本发明专利技术属于食品技术领域。以脱脂葵花籽粕为原料提取、分离纯化水溶性多糖。采用碱性亚硫酸氢钠溶液浸提、离心除渣、无机酸酸沉除蛋白、碱中和的方法提取葵花籽粗多糖；所得的葵花籽粗多糖采用超滤分离得浓缩液，浓缩液经酶法结合有机酸法除蛋白、离子交换脱色、醇沉及柱层析的方法制备葵花籽多糖。利用该法制备的葵花籽水溶性多糖包含三个组分，其中一个糖组分分子量约为３７ＫＤ，其余糖组分分子量小于１０ＫＤ。该水溶性多糖具有较高的抗氧化活性，在食品和医药工业具有广泛的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于食品
本专利技术涉及葵花籽水溶性多糖及葵花籽水溶性多糖的 提取、分离纯化方法，所说的水溶性多糖含有三个组分，其中一个组分的分子量约为37KD， 其余组分的分子量小于10KD，该水溶性多糖具有较强的抗氧化活性。
技术介绍
向日葵在全球广泛种植，不仅是一种经济食用作物，而且是一种值得开发利用 的药用植物。向日葵的花盘、杆、叶子和种子都有药用价值。我国向日葵的生产已由过 去零星种植发展成为仅次于油菜、大豆、棉籽和花生的第五大油料作物，年栽培面积已达 9. 5X10hm2，年总产量位居世界第六位。葵花籽为向日葵籽实，葵花籽仁低聚糖含量达到10%以上，水不溶性以及水溶性 多糖类2.7%。我国尽管是向日葵的生产大国，但是向日葵的基础研究工作却显得十分薄 弱，目前大部分的研究主要集中在品种资源和种植等方面，而对葵花籽的加工仅局限于油 脂、蛋白质以及绿原酸等酚类化合物等方面，例如，01111025. 2葵花籽水剂一步法分离油蛋 白提取技术，89104414. 0从葵花籽中提取并提纯蛋白质提取物的方法，200510047693. 0从 葵花籽饼中提取绿原酸及葵花蛋白的方法，但是国内对葵花籽水溶性多糖及其提取纯化方 面的专利及研究未见报道。葵花籽多糖具有抗肿瘤、抗病毒、抗炎活性、免疫调节作用、抗氧化及抗衰老作用、 降血糖作用、保肝作用及抗凝血作用。本专利技术的目的是将来源广、成本低的葵花籽充分利 用，以脱脂葵花籽粕为原料，提取、分离纯化水溶性多糖，并对其性质进行初步研究，这为进 一步了解葵花籽糖类物质的结构与生物活性关系提供理论基础，填补国内该项研究空白， 丰富了糖类科学，为葵花籽糖类物质的开发利用提供理论依据。该研究成果对提升葵花籽 的产业价值，拓展葵花籽深加工途径具有重要的理论和实践价值。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供葵花籽水溶性多糖的提取、分离纯化方法。以下将具体描述该专利技术的实施方法。以脱脂葵花籽粕为原料提取、分离纯化水溶性多糖的工艺流程如附图所示。要点如下1.浸提脱脂葵花籽粕中有大量的酚类物质，其含量为3% 4%，其中绿原酸是对葵花籽 蛋白质质量影响最大的酚类物质。在提取过程中，由于多酚氧化酶和空气中氧的作用，在中 性或者碱性条件下提取时，绿原酸很容易被氧化成醌，使得提取出来的蛋白质变色，并且影 响了多糖和低聚糖的色泽。亚硫酸氢钠作为抑制多酚氧化酶酶促褐变的高效抑制剂，既可 直接作用于酶本身，降低酶对单酚和二酚类的催化反应活性，又可与第一步酶促反应生成 的醌类物质发生不可逆的结合形成无色物质，同时，亚硫酸盐有漂白的作用；碱性条件有利于蛋白质的溶出。采用碱性亚硫酸氢钠法浸提脱脂葵花籽粕低聚糖有利于产品的精制。浸 提条件浸提温度40 70°C (例如40 70°C，如约50°C )；液固比5 20 lv/w (液固 比指亚硫酸氢钠溶液体积与葵花籽粕的质量之比，亚硫酸氢钠浓度以0. 2% w/v (例 如，0. 1%，0· 2%，0· 3%或 0. 5% w/w)存在)袖值7.5 10. 0 (例如，7. 5，8. 0，8. 5 或 9， 如约8.0)；浸提时间0.5 Mi (例如，1，2，4，5或乩，如约5h)；2.离心除渣在转速为5000r/min的条件下离心lOmin，收集上清液。3.酸沉除蛋白用0. 1 2mol/L盐酸调节上清液pH至4. O 4. 5后，3000 5000r/min离心 10 30min，收集上清液。4.碱中和用0. 1 2mol/L氢氧化钠调节上清液pH至7. O。5.超滤:在压力为O. Ol O. IMpa(例如0. 02 0. 06MPa,如约0. 05MPa)、温度为10 400C (例如20 30°C，如约25°C )的条件下对上清液进行超滤处理，收集浓缩液。6.酶法结合三氯乙酸(TCA)法除蛋白采用酶法结合三氯乙酸(TCA)法除蛋白。首先利用碱性蛋白酶法除蛋白酶解温 度40 65°C，pH值7. 5 9. 0，加酶量1 % 4. 0% w/w,酶解时间O. 5 2h ；酶解结束后， TCA处理酶解液进一步除蛋白TCA浓度以0. 3% 例如，0. 1 %，0. 5%，1. O%或 1. 5% w/w)存在，时间以0.5 3h(例如，0.5，1，2或3h)存在；7.脱色采用D296型树脂对多糖进行脱色；脱色柱为Φ 1. O X IOcm,树脂填装量为5ml。上 样量为0. 5 IOml (例如，2，3，4或5ml)，蒸馏水洗脱，流速为0. 1 2ml/min (例如，0. 5， 1,1. 5 或 2ml/min)；8.醇沉乙醇浓度为80% ν/ν存在；温度1 20°C (例如4 10°C，如约4°C )；时间以 12 36小时(例如，15，20，24或36小时)存在；离心转速为1000 8000r/min(例如 1000 6000r/min，如约 5000r/min)；时间以 15 30min (例如，15，20，25 或 30min)存在；9.柱层析采用DEAE Sepharose Fast Flow柱层析分离葵花籽多糖，分离条件为层析柱 为Φ2. 6X20cm，上样量为0. 5 IOml (例如，0. 5，1，2或5ml)；洗脱流速为0. 1 :3ml/ 111士11(例如，0.5，1，1.5，2或；31111/1^11)；以蒸馏水、0. 1 0. 4mol/L NaCl 溶液阶段梯度洗 脱；蒸馏水洗脱分离得到DPW组分，0. 1 0. 4mol/L NaCl溶液洗脱分离得到DPm组分；采 用^^1!虹0紹CL-6B柱层析进一步分离糖组分，分离条件为层析柱为Φ1.6Χ100αιι，上样 量为0. 1 5ml (例如，0. 1，0. 5，1或5ml)，洗脱流速为1 5ml/min (例如，1，2，3或5ml/ min)，洗脱液为0. lmol/L NaCl溶液，最终得到三个组分，其中，DPW为单一组分，DPNl含有 两个组分,分别为DPNl-Sl和DPm-S2。附图说明图1以脱脂葵花籽粕为原料提取、分离纯化水溶性多糖的工艺流程实施例1本专利技术还将通过具体实施例的方式作进一步说明，这些实施例仅仅是举例说明性 的而没有限制本专利技术范围的意思。取Ikg过60目筛的脱脂葵花籽粕置于容器中，按照液固比10 lv/m加入亚硫酸 氢钠溶液(其中亚硫酸氢钠溶液的浓度为0. 30% m/v)，用2mol/L氢氧化钠将固液混合物 pH至8.0，551条件下搅拌提取证。浸提结束后，在5000r/min的条件下离心IOmin去除渣 子，收集上清液。用2mol/L盐酸调上清液pH至4. 5，在5000r/min的条件下离心20min，收 集上清液。用2mol/L氢氧化钠调节上清液pH值至中性。在压力为0. 05Mpa，20°C对上清液 进行超滤处理，收集浓缩液；在温度^°C，pH值8. 0，碱性蛋白酶添加量4. 0% w/w条件下 对超滤所得浓缩液进行酶解处理Ih ；用浓度为1. 5% TCA w/w处理酶解液2h，收集上清液。 用D296型树脂洗脱上清液，对多糖进行脱色上样量5ml，蒸馏水洗脱，流速为lml/min ；洗 脱液用80% ν/ν乙醇，4°C醇沉12h，5本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种以脱脂葵花籽粕为原料提取、分离纯化水溶性多糖的方法，其特征包括以下步骤：（ａ）采用浸提、离心除渣、酸沉除蛋白、碱中和的方法提取葵花籽粗多糖；（ｂ）对步骤（ａ）处理所得的物料进行超滤浓缩、酶法结合三氯乙酸（ＴＣＡ）法除蛋白、脱色、醇沉、柱层析的方法分离纯化葵花籽多糖；。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王文侠，宋春丽，李文娟，
申请(专利权)人：齐齐哈尔大学，
类型：发明
国别省市：23
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