本发明专利技术公开了一种雷帕霉素眼用微乳注射剂及其制备方法和应用，该注射剂以雷帕霉素为活性成分加入药学上可接受的载体，每１０００ｍｌ制剂中含有０．０５－２０ｇ的雷帕霉素。该眼用微乳注射剂成本低、稳定性好，对眼部无明显刺激性及毒副作用，可用于治疗视网膜变性疾病，特别是用于治疗老年黄斑变性疾病具有显著的效果，本发明专利技术的疗效是在致病机制的突破发现基础上提出的，对此类别的疾病治疗具有深远的意义。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于制药领域，具体涉及一种雷帕霉素眼用微乳注射剂及其制备方法和 应用。
技术介绍
致盲性眼病是WHO评定的第三大影响人类的疾病，而其中最重要的是视网膜变 性疾病。视网膜变性是一大组以进行性感光细胞丧失为共同特征的疾病，其中又分由明 显遗传缺陷引起的遗传性视网膜变性疾病和由多因素引发的复杂视网膜变性疾病。老年 黄斑变性(Age-related Macular Degeneration，AMD)是最常见的复杂视网膜变性疾病，特 别是随着人口老龄化，其发病率不断提高仅在美国就有超过1000万患者。AMD可以由 遗传相关因素，吸烟，氧化损伤和线粒体缺陷等年龄相关因素引发，患者由于视网膜黄 斑区的感光细胞丧失而严重影响视力乃至失明。由于AMD发病机制多样复杂，临床表 型多样复杂，并且感光细胞丧失具有不可逆性，因此目前无任何有效药物治疗。由此可 见，找到一个AMD根本的通用的发病机制，并且开发针对性的药物来抑制感光细胞丧失 过程是治疗此类疾病的最可能成功的手段。视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium，RPE)对神经视网膜特别是感光细胞具有一系列功能。当在RPE内表达的基因发生突变(如RPE65，LRAT等)时，会引 起各种遗传性视网膜变性疾病。所有，RPE的正常功能对感光细胞的功能和数量具有至 关重要的意义。同样，在绝大多数的AMD患者中，由氧化损伤和线粒体缺陷等引起的 RPE损害是疾病的原发病变，而感光细胞的丢失是继发的。然而，在本研究之前，关于 RPE对各种损害的原发分子病理反应和病变过程世界上鲜有报道。Rapamycin又名sirolimus，中文译名为雷帕霉素或西罗莫司，目前，其口服片/剂虽已应用，但其临床应用完全是以抑制器官移植后的免疫排斥和治疗部分肿瘤为目 的。由于眼球自身血-眼屏障和角膜屏障等解剖特点，全身用药达到有效血药浓度时， 眼内药物浓度几近微量，无法达到有效的药物浓度和持续时间。新近的Rapamycin眼药 膏的基础研究是针对角膜移植后的排斥反应，而根据眼球对药物的吸收原理，滴眼液给 药或眼药膏给药可产生眼前部组织中(角膜、结膜、巩膜、房水、睫状体)的药物比眼后 部组织(晶状体、玻璃体、视网膜)浓度高。因此，Rapamycin眼药膏是不可能被视网 膜和RPE吸收，因此不可能治疗视网膜疾病。治疗眼后部组织疾病宜采用结膜下注射、 玻璃体内注射、球后注射等。目前世界上不存在Rapamycin眼用微乳注射剂，也没有任 何关于Rapamydn治疗老年黄斑变性和其它类型视网膜变性疾病的理论知识、报道抑或 尝试ο
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种有效治疗视网膜变性疾病的雷帕霉素眼用微乳注射 剂，并且该微乳注射剂成本低、稳定性好、毒副作用小。本专利技术的另一目的是提供该雷帕霉素眼用微乳注射剂的制备方法。本专利技术还有一个目的是提供该雷帕霉素眼用微乳注射剂在制备治疗视网膜变性 疾病的药物中应用，特别是制备治疗复杂视网膜变性疾病的药物中应用。本专利技术的目的是通过以下方式实现的一种雷帕霉素眼用微乳注射剂，包括以雷帕霉素为活性成分加入药学上可接受 的载体。该注射剂中，每IOOOrnl制剂含有0.05-20g的雷帕霉素。所述的载体包括乳化 剂、油相和助乳化剂等。上述雷帕霉素眼用微乳注射剂，每IOOOrnl制剂优选原料配方为雷帕霉素0.05 20g，油相1.2 48.0ml，乳化剂55.0 200.0ml，助乳化剂 51.0 150.0ml,注射用水至IOOOmL上述雷帕霉素眼用微乳注射剂，每IOOOrnl制剂进一步优选原料配方为雷帕霉素0.5 4g，油相4.0 25.0ml，乳化剂60.0 98.0ml，助乳化剂55.0 90.0ml,注射用水至1000ml。每IOOOml制剂最优选的原料配方为雷帕霉素0.85 1.15g，油相8.0 12.0ml，乳化剂70.0 90.0ml，助乳化剂 58.0 70.0ml,注射用水至IOOOmL所述的乳化剂优选吐温-80，助乳化剂优选聚乙二醇-400，油相优选为大豆油。上述眼用微乳注射剂的PH范围为4 9，优选6.5 7.5。渗透压为0.7 1.5% 氯化钠溶液的渗透压，优选0.8 1.0%氯化钠溶液的渗透压。该微乳注射剂粒径范围 100 μ m,优选为<10μιη。PH值范围可通过盐酸、氢氧化钠、醋酸等常规PH调节剂调 节，渗透压可通过甘油、氯化钠等常规等渗调节剂调节。上述雷帕霉素眼用微乳注射剂的制备方法包括以下步骤a)根据配方取雷帕霉素，加入油相、乳化剂，充分研磨至粉末溶解，混合均 勻；b)取助乳化剂，加入助乳化剂5 15倍重量的灭菌注射用水，煮沸使溶解，搅 拌混勻；C)将搅勻的“b)”步骤溶液倒入“a)”步骤所述混合液中，快速搅拌、定容， 混勻后经微孔滤膜过滤，分装，即得。所述的雷帕霉素眼用微乳注射剂在制备治疗视网膜变性疾病的药物中应用。所 述的视网膜变性疾病可为遗传性视网膜变性疾病或复杂视网膜变性疾病。所述的复杂视 网膜变性疾病为老年黄斑变性(AMD)疾病。本专利技术建立了两个AMD动物模型来进行相应的研究1.通过遗传基因修饰方法，建立原发RPE线粒体缺陷的小鼠模型(MT-KO)，这 一模型可以模拟由于RPE内线粒体功能缺陷引发的AMD病变。这一模型的设计方案是将 控制线粒体DNA复制和转录的重要基因Tfam基因w从小鼠RPE细胞的基因组中敲除， 使得RPE细胞具有原发的线粒体缺陷。具体实验动物制作方法应用了 “loxp”和“ere” 系统模式。“loxp”是一个23个碱基的序列，可以被ere蛋白重组酶识别后切断。本研 究中的MT-KO小鼠是通过将tfam靶基因修饰鼠(tfam1。——)和BESTl-Cre转基因鼠杂交而来。tfam靶基因修饰鼠以前已被广泛应用，其中tfam基因的6和7号外显子被两 个Ioxp序列包夹⑴。BESTl-Cre转基因鼠的制作方法是首先制作出人类BESTl基因 的驱动子(BEST1基因的-538至+38核苷酸序列)和ere重组蛋白基因共同组成的DNA 构建。其次，将BESTl-creDNA构建显微注射到B6小鼠的受精卵细胞中。最后，将此 受精卵细胞植入代孕鼠子宫孕育而来。经过杂交tfam靶基因修饰鼠和BESTl-Cre转基因 鼠后，最终的MT-KO小鼠具有+/BESTl-cre ； tfamloxp/loxp基因型。由于BESTl基因的 驱动子可以诱导ere蛋白重组酶特异性的表达在RPE中，ere蛋白重组酶识别了 RPE细胞 中tfam基因的Ioxp序列，从而将tfam基因的6和7号外显子切除，进而使得tfam基因丧 失表达。由于tfam基因是控制线粒体DNA复制和转录的重要基因，这样小鼠的RPE细 胞呈现严重的线粒体功能缺陷。我们通过定量PCR的方法证明MT-KO小鼠RPE细胞中 一系列线粒体编码的基因表达严重降低，包括MT-ATP6，MT-ND4和MT-ND6基因。 同时，我们通过酶学染色方法证明线粒体中重要功能复合体(complex IV)的酶学活性消 失。电镜进一步显示MT-KO小鼠RPE细胞中线粒体肿胀、形态严重改变。这些结果证 明成功的建立了 RPE线粒体缺陷的小鼠模型(MT-KO)。2本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种雷帕霉素眼用微乳注射剂，其特征在于该眼用微乳注射剂包括以雷帕霉素为活性成分加入药学上可接受的载体。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：赵晨，赵堪兴，刘美欣，
申请(专利权)人：赵晨，
类型：发明
国别省市：12
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