本发明专利技术公开了一种流感Ａ型Ｈ１Ｎ１病毒血凝素蛋白亲和肽，其特征在于它的氨基酸序列为：氨基端－ＡＷＬＰＥＴＰＬＨＷＫＨＡＧ－羧基端。本肽序列是基于肽的定量结构功能关系模型设计，经表面等离子共振技术检测得到。它对流感Ａ型Ｈ１Ｎ１病毒血凝素蛋白具有高亲和能力，可用于抑制流感Ａ型Ｈ１Ｎ１病毒血凝素蛋白活性，进一步开发为抗流感Ａ型Ｈ１Ｎ１病毒药物。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种流感病毒血凝素蛋白亲和肽，特别是一种流感A型HlNl病毒血 凝素蛋白亲和肽。
技术介绍
A(甲)型流感正在严重影响公共健康，A型流感病毒抗原性易发生变异，多次 引起世界性大流行。1918年的HlNl型西班牙流感，1957年的H2N2亚洲流感，1968 年的香港H3N2流感，已夺取世界几千万人的生命(Das et al.，NatStruct Mol Biol.2010, 17:530)。另外，目前仍在出现的H5N1病毒(禽流感病毒)，虽未在人与人之间有效 的传播，但在人类中表现出高致病性。自2009年4月，一种新的HlNl流感(猪流感) 已蔓延全球，至2010年8月6日，该流感病毒已致至少18449人死亡(http://www.who. int/csr/don/2010_08_06/en/index.html)。这种病毒来自于北美和欧亚猪毒株的重组，猪 流感的Hl亚型的血凝素(HA)蛋白显著不同于最近季节性的流感A型病毒的Hl亚型的 HA。所以，大多数人缺少对这种病毒的免疫保护，因此导致流感大流行。疫苗接种是预防流感病毒传染的理想方法。抗病毒药物也已被用于预防和治疗 季节性流感。但因为足够、快速地生产一种有效的疫苗是很困难的(Couzin-Fnmkel， Science 2009，324，705)，因此在快速传播流行的起初，抗病毒药物显得特别重要。流 感A型病毒膜包括3种蛋白，血凝素(HA)，神经氨酸酶(NA)以及质子通道(M》。在 病毒感染的起初阶段，HA负责唾液酸受体亲，病毒吸收进入内涵体(endosome)之后， 通过其构象的变化诱使病毒与细胞的融合。M2运输质子进入内涵体中正在感染的病毒， 在酸性条件下，基质蛋白Ml从基因转录酶复合体中分离出，以便于膜融合之后，未被包 裹的复合体被运输到细胞核。在感染的末期，NA从病毒和细胞复合糖裂解唾液酸，以确 保来自被感染细胞的、新的病毒释放。M2蛋白和NA已作为药靶用于抗A型流感，以M2蛋白为靶点的药物包括金刚 胺及其衍生物，以NA为靶点的NA抑制剂，包括zanamivir和oseltamivir，然而，许多 流感A型毒株已经对金刚胺或oseltamivir表现出抗性(http://www.who.int/csr/disease/ influenza/hlnl_table/en/index.html)。因此，针对新的药靶研发新的抗病毒药物则显得特别重要。HA蛋白抗病毒药物潜在的药靶，因为其在病毒感染的最初阶段的作用受体 亲和与病毒与细胞膜的融合(Rupert，etal.，PNAS, 2008，105，17736)。同时，抑制病 毒进入细胞是最有前景的策略，HA识别宿主细胞表面的唾液酸受体，这是病毒感染过程 的第一步(Wiley，etal, Annu.Rev.Biochem.1987, 56，365)，因此，HA 抑制剂对于抗流 感具有潜在的应用开发前景。目前，许多研究报道含唾液酸的聚合物可以有效的抑制流 感病毒进入宿主细胞。肽可有效地抑制HA与唾液酸糖蛋白的相互作用(Matsubara，et al., JMed.Chem.2010，53: 4441)。因此，设计有效的肽抑制剂则显得尤为重要。
技术实现思路
有鉴于此，为了解决上述问题，本专利技术提供了一种流感A型HlNl病毒血凝素蛋 白亲和肽，可进一步开发为抗流感A型HlNl病毒药物。本专利技术的目的是这样实现的它的氨基酸序列为氨基 端-AWLPETPLHWKHAG-羧基端。本专利技术的一种流感A型HlNl病毒血凝素蛋白亲和肽，选取一组经过噬菌 体肽库展示技术获得的、含有15个氨基酸残基的肽样本，经过肽定量构效关系建模 技术设计具有高亲和力的流感A型HlNl病毒HA蛋白亲和肽，经过表面等离子体共 振技术检测肽与HA的亲和力，依此方法找到了本专利技术所述的氨基酸序列，即氨基 端-AWLPETPLHWKHAG-羧基端。本专利技术的其它优点、目标和特征在某种程度上将在随后的说明书中进行阐述， 并且在某种程度上，基于对下文的考察研究对本领域技术人员而言将是显而易见的，或 者可以从本专利技术的实践中得到教导。本专利技术的目标和其他优点可以通过下面的说明书， 权利要求书来实现和获得。合成本专利技术所述的氨基酸序列方法均是现有的成熟技术，它是按照如下方法制 成的采用标准Fmoc方案，起始选用0.0125mmol，PSC树脂(ABI公司生产，批号 A5F013),按照权利要求1所述的序列特征，使肽链从C端逐个向N端延伸，各氨基酸的 用量为O.lmmol，各种氨基酸保护基团是各氨基酸的alplia氨基Pmoc保护，其余侧链 保护基团，Arg (Mtr)，Tyr (tBu), Thr (tBu)，Asp (OtBu)，对于生物素基和十八酰基团的 修饰，Fmoc-Lys (biotin) -OH和十八酸分别连接到肽的C末端和N末端。每步缩合都加 入HoBT/Dcc活化保护氨基酸的羧基。每步缩合用含有20%六氢吡啶的NMP溶液去除 Fmoc保护基，肽侧链合成后，按照ABI公司推荐的步骤，将含树脂的肽链加入处于冰浴 条件下的混合反应液中，反应液的成分结晶苯酸0.75g，酒石酸乙二胺(EDT)0.25ml， 苯硫基甲烷0.5ml，去离子水0.5ml，三氟乙酸10ml。在室温条件下持续搅拌，反应时间 为4.5小时，把肽链从树枝上裂解下来，同时去除多种保护基团。将混合液经4G的玻璃 滤器过滤，以滤掉切下的树脂和保护集团，并用三氟乙酸冲洗反应瓶和滤器，将滤液在 常温下低压蒸发至l_2ml，加乙醚50ml，使多肽沉淀后，经6G滤器过滤后，冷冻干燥， 所得便是肽产品。以上过程都是在ABI-431A固相自动肽合成仪中完成。所合成肽经过 RP-HPLC纯化，纯度达到95%，并经TOF-MS鉴定结构。 用表面等离子体共振技术测定上述所合成肽与流感A型HlNl病毒HA蛋白的亲 和力。具体实施方式以下对采用本专利技术的方法用于流感A型HlNl病毒HA蛋白亲和肽的设计和鉴定 为例进行详细的描述，包括以下步骤a)肽的定量构效关系建模；al)肽结构表征；从文献(Matsubara et la，J.Med.Chem.2010, 53 4441-4449) 选择57个肽样本，每个肽含有15个氨基酸残基。为了合理表征这些肽的结构特征，精选20种天然氨基酸的335种性质参数，这些变量表征氨基酸的如下性质，a_螺旋与转角 倾向性质；β倾向性质；物理化学性质；构成特征及其它特性等。用因子分析法处理精 选得到的变量，通过斜交旋转，并用主成分法提取6个因子，这6个因子解释了原始变量 83.47%的信息，参见表1;对6个因子进行载荷分析发现，每个因子都具有较明显的物理化学意义，涉及 序列的疏水性、a_螺旋与转角倾向、体积性质、构成特征、局部柔性及静电性质。进一 步计算各因子得分，见表1，为方便，称此6个因子得分矢量为氨基酸广义信息因子分析 标度，该表征体系综合了 335个原始氨基酸性质参数大部分信息，可将其用于肽或蛋白 质结构表征。肽序列中的每个氨基酸残基用6个氨基酸广义信息因子分析标度表征，对 于每个15肽序列，则可用15X6个=90个变量表征。表120种天然氨基酸的335个性质参数本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种流感Ａ型Ｈ１Ｎ１病毒血凝素蛋白亲和肽，其特征在于它的氨基酸序列为：氨基端－ＡＷＬＰＥＴＰＬＨＷＫＨＡＧ－羧基端。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：梁桂兆，苗霞，马秀岩，赵军，郑洁，李元朝，杨力，
申请(专利权)人：重庆大学，
类型：发明
国别省市：85[中国|重庆]
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