一种对动物疫苗免疫起增强作用的卡介苗注射方法技术

本发明专利技术涉及对动物疫苗免疫起增强作用的卡介苗注射方法，其主要特征是将卡介苗在疫苗免疫注射之前或同时注射入待免疫的动物身上，以卡介苗代替传统的药物免疫增强剂，有效地增强疫苗注射的免疫作用。该方法广泛适用于动物的疫苗免疫注射，尤其是猪和鸡。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种对动物(畜、禽等)的疫苗免疫效果起增强作用的卡介苗注射方法。以往为了增强动物疫苗免疫注射效果，人们多采取药物配合的办法，例如CN1200272一种能抑制肿瘤生长的免疫增强剂；CN1176139鸡马立克氏病疫苗免疫增强剂及制备工艺；CN1091639狂犬疫苗特异性免疫增强剂的制备方法。这些方法由于药物的付作用以及某些成分暂时或长期在动物体内的积累，具有一定的缺陷。目前未发现采用卡介苗作为疫苗免疫增强剂在动物中的应用之报导。本专利技术的目的是提供一种采用卡介苗作为动物疫苗免疫增强剂的卡介苗的注射方法。本专利技术是这样实现的，其特征在于将卡介苗在疫苗注射之前或与疫苗同时注射入待免疫接种的动物身上。卡介苗(BCG)是一种广谱的免疫细胞激活剂，能刺激骨髓的多能干细胞，使之发育成具有免疫功能的免疫活性细胞，促进T、B、K、NK细胞和巨噬细胞的分化增殖，从而明显地提高机体的免疫力。这种广谱的非特异性的免疫刺激剂，在动物免疫能力增强方面具有普遍的意义。然而，非特异性免疫力的保护效果是有限的，因此，仅采用卡介苗来控制动物的疾病效果并不理想；只有将卡介苗的非特异性免疫因素与特异性免疫疫苗结合起来进行免疫才能达到良好效果。也就是说，将卡介苗作为特殊疫苗免疫的增强剂才能有效地提高该种动物的免疫效果。另外，经研究发现卡介苗剂量大小或重复使用次数与免疫效果并不成正比，过强的刺激反而有可能诱发免疫抑制。因此，只有将卡介苗的非特异性免疫因素与动物的特定疾病的特定免疫疫苗的特异性免疫因素结合起来进行动物的免疫处理才能收到显著的免疫效果。在动物疫苗(例如鸡球虫病疫苗)注射之前(1-10天左右)预先注射卡介苗，先激活动物免疫系统的非特异性因素，为该系统的特异性因素的激活(例如鸡球虫病疫苗的特异性免疫作用)打好基础，从而使动物(例如幼鸡)体内的免疫系统得到既普遍又有针对性的激活，显著增强免疫效果。当然，将卡介苗与动物疫苗(例如猪瘟疫苗)同时注射(包括同时注射，先后依次注射效果也良好，这是由于动物体内的免疫系统中非特异性免疫因素与特异性免疫因素同时被激活，同时发挥作用的缘故。但是，若待动物特异性疫苗注射效果开始下降时再注射卡介苗，则由于卡介苗作用发挥之时，动物体内的特异性免疫作用已经减弱，甚至消失，这样处理就达不到在动物体内形成非特异性免疫与特异性免疫互补的效果。本专利技术可以这样具体化动物的免疫注射一般在动物的幼年进行。对于20～40天龄的幼猪，卡介苗的注射量为0.1～0.2毫克/头比较适宜；作为猪瘟疫苗的免疫增强剂，卡介苗的注射和猪瘟疫苗接种同时进行。对于7～14天龄的幼鸡，卡介苗的注射量为0.025～0.05毫克/只比较适宜；作为鸡球虫病疫苗的效果增强剂，卡介苗可以与鸡球虫病疫苗同时进行注射或提前七天进行。本专利技术由于将卡介苗取代药物作为动物疫苗免疫增强剂，在疫苗接种之前或同时进行注射，有效地提高了疫苗接种的免疫效果；尤其是对某些免疫效果不太强或稳定性差的动物疫病(例如鸡的球虫病)效果尤为好。实施例1卡介苗作为猪瘟疫苗的免疫增强剂注射。试验猪40日龄健康杜—长—大三元杂交断乳商品仔猪，体重均约10kg，性别不限，所用饲料为商品饲料厂生产的仔猪配合全价饲料。猪瘟兔化弱毒疫苗购自广东省生物药品厂，批号9942，用12.5mL灭菌生理盐水溶解，30分钟内用完。免疫增强剂小牛胸腺素，武汉梅山生化制品厂出品，批号980401，含量为2mg/mL；冻干卡介苗，广东省生物制品研究所生产，批号981102，含量为75mg/mL，临用前按说明每支以10mL灭菌注射用水溶解，30分钟内用完。1、试验分组及处理试验分组及处理见表1。本试验分胸腺素组(T)、卡介苗组(B)、胸腺素+猪瘟疫苗组(TC)、卡介苗+猪瘟疫苗组(BC)、猪瘟疫苗组(C)和生理盐水(N)，试验猪数，免疫剂量，免疫次数及接种方式按表中安排进行。表1试验分组及处理 注T指胸腺素，B指卡介苗，TC指胸腺素+猪瘟疫苗，BC指卡介苗+猪瘟疫苗，C指猪瘟疫苗，N指注射生理盐水2、试验检测指标采血日期为0(免疫前)，3、7、14、21、28(免疫后)天、，所采血样检测指标有(1)猪PBNC转化水平；(2)白细胞计数；(3)活性T淋巴细胞试验(4)血清IgG、IgM水平。(5)血清杀菌试验；(6)兔体交互免疫保护试验；其中，(1)、(2)、(3)项目检测0、3、7、10天血清，(4)项检测0、3、7、10、14、天的IgM含量及0、3、7、10、14、21、28天的IgG含量，(5)(6)项目检测第7天血清。3、试验结果①免疫增强剂对猪PBMC增殖反应的影响结果见表2，随着日龄的变化差异不显著。其余各组以BC、TC、B组上升趋势最明显。免疫后第7天，BC、TC、B组淋巴细胞转化水平达最高值，较C组差异显著(P＜0.01)。T组和B组在免疫后，淋巴细胞转化水平呈上升趋势，且与N组比差异显著(P＜0.05)，B与BC组间差异不显著，T与TC组在免疫7天后对猪PBMC增殖反应的影响差异显著，各组淋巴细胞转化水平在免疫7天后均呈不同程度的递减趋势，至免疫后10天，各组间淋巴细胞转化水平差异不显著(P＞0.05)。表2免疫增强剂对猪PBMC增殖反应的影响 注(1)T小牛胸腺素；B卡介苗；TC小牛胸腺素+猪瘟疫苗；BC卡介苗+猪瘟疫苗；C猪瘟免疫对照；N空白健康对照。(2)表内数字为x±SE，数据采用邓肯氏新复极差检验法(DMRF法)进行多重比较，小括号内字母为统计结果，同列字母不相同者差异显著(a＝0.05)，相同或无字母标记者差异不显著。②免疫增强剂对白细胞总数的影响结果见表3。检测期内健康对照的白细胞总数变化不大，从白细胞变化曲线图表中可看出，卡介苗、胸腺素对白细胞的产生有一定的刺激作用，免疫后第3-7天影响显著(P＜0.05)。第10天后影响不显著(P＜0.05)。表3免疫增强剂对白细胞总数的影响 注(1)TC小牛胸腺素+猪瘟疫苗；BC卡介苗+猪瘟疫苗；T小牛胸腺素；B卡介苗；C猪瘟免疫对照；N空白健康对照。(2)表内数字为x±SE，数据采用邓肯氏新复极差检验法(DMRF法)进行多重比较，小括号内字母为统计结果，同列字母不相同者差异显著(a＝0.05)，相同或无字母标记者差异不显著。③免疫增强剂对活性T淋巴细胞的影响结果见表4，健康对照的E-玫瑰花环形成率在检测期内呈水平曲线波动，各免疫组的E-玫瑰花环形成率均呈不同程度的递增并在免疫后第3天左右达峰值，其中，BC、TC与T、B、C间呈显著差异，BC与TC间无显著差异。结果表明，卡介苗与胸腺素均能极显著地(P＜0.01)提高和延长免疫猪的E-玫瑰花环形成率。表4免疫增强剂对活性T淋巴细胞的影响 注(1)T小牛胸腺素；B卡介苗；TC小牛胸腺素+猪瘟疫苗；BC卡介苗+猪瘟疫苗；C猪瘟免疫对照；N空白健康对照。(2)表内数字为x±SE，数据采用邓肯氏新复极差检验法(DMRF法)进行多重比较，小括号内字母为统计结果，同列字母不相同者差异显著(a＝0.05)，相同或无字母标记者差异不显著。④免疫增强剂对血清IgM的影响结果见表5。因40日龄的猪仍存有一定的母源抗体，故免疫后3天内，除N、T、B组外，其余各组的血清IgM含量均有有同程度的迅速降低本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种对动物疫苗免疫起增强作用的卡介苗注射方法，其特征在于：将卡介苗在疫苗注射之前或与疫苗同时注射入待免疫接种的动物身上。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：谢明权，杜伟贤，李繁，蓝天，
申请(专利权)人：广东省农业科学院兽医研究所，
类型：发明
国别省市：44[中国|广东]