一种α－葡萄糖甙酶活性抑制剂及在制备糖尿病药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种α－葡萄糖甙酶活性抑制剂及在制备糖尿病药物中的应用，该方法以蔷薇科植物仙鹤草为原料，乙醇为提取溶剂，进行热回流，合并醇提液，浓缩，制成浸膏，浸膏用水溶解，按极性大小先后用石油醚，乙酸乙酯，正丁醇对水溶液进行萃取，挥干乙酸乙酯部位的溶剂得乙酸乙酯部位的浸膏即是仙鹤草提取物，也即本发明专利技术的α－葡萄糖甙酶活性抑制剂；仙鹤草提取物与ａ－葡萄糖甙酶和作为底物的４－硝基酚－ａ－Ｄ－吡喃葡萄糖甙反应，根据添加提取物后葡萄糖量的变化值可推断出提取物具有抑制ａ－葡萄糖甙酶的活性而降糖作用，添加了该提取物的药物组合物或食品组合物具有降糖作用而可用于防治糖尿病。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种α -葡萄糖甙酶活性抑制剂及在制备糖尿病药物中的应用。
技术介绍
糖尿病在全世界的发病率有逐年增高的趋势，在发达国家已被列为继心血管疾病 及肿瘤之后的第三大疾病，其中2型糖尿病是占了糖尿病患者的90%。目前糖尿病对人类 健康危害最大的是在动脉硬化及微血管病变基础上产生的多种慢性并发症，如糖尿病性心 脏病、糖尿病性脑血管病、糖尿病性肾病等，已引起全世界医学界的高度重视。中药与其他降糖药物相比，其优势在于，不仅能降低血糖，还能发挥复方多靶点、 多途径的优势对机体进行调整，通过辨证施治，改善患者糖耐量异常、降低血粘度，达到预 防大血管及微血管病变，降低糖尿病并发症的效果。α-葡萄糖甙酶活性抑制剂能抑制肠道内的蔗糖酶等糖水解酶，从而能延缓或减 少肠道对糖的摄取，起到防治糖尿病的作用。仙鹤草提取物具抑制α-葡萄糖甙酶活性，起 到防治糖尿病尤其是并发症的作用，是一种有广阔应用前景的治疗糖尿病的药物。目前用 于临床的α-葡萄糖甙酶抑制剂有三种阿卡波糖、伏格列波糖，米格列醇。经临床应用，均 取得了较好的疗效，但它们种类太少，也都存在这样或那样的副作用，临床上没有更多的选 择余地。因此，开发更多，更有效、副作用更少的α-葡萄糖甙酶抑制剂供临床选择使用就 显得尤为重要。近年来。从中药中筛选出α-葡萄糖甙酶抑制剂成为国内研究降糖药物的 执占之一。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供来源于植物，通过α -葡萄糖甙酶活性防治糖尿病的药物。本专利技术人以蔷薇科(Rosaceae)植物的仙鹤草为原料。本专利技术制备仙鹤草提取物，使其与α-葡萄糖甙酶和作为其底物的4-硝基 酚-a_D-吡喃葡萄糖甙反应，用紫外-可见分光光度计在400nm处测吸光度的变化值来测 定葡萄糖量。对葡萄糖量的测定后发现仙鹤草提取物能显著抑制α-葡萄糖甙酶的活性。 仙鹤草提取物能抑制四氧嘧啶糖尿病小鼠和链佐霉素糖尿病小鼠高血糖的上升，有较强的 降糖活性。仙鹤草提取物同时有抑制α -淀粉酶的活性从而起到防治糖尿病的效果。本专利技术提供的一种α -葡萄糖甙酶活性抑制剂用以下方法提取获得首先取干燥 的仙鹤草Ikg粉碎，过60目筛，称取仙鹤草被中药粉碎机粉碎后过60目筛所得的粉末IOOg 于2000ml圆底烧瓶中，加IOOOml的质量浓度为60%的乙醇为提取溶剂，加热至80°C进行 热回流，回流提取3次，每次1小时，合并醇提液，浓缩，制成浸膏；浸膏用水溶解，按极性大 小先后用石油醚，乙酸乙酯，正丁醇对水溶液进行萃取，挥干乙酸乙酯部位的溶剂得乙酸乙 酯部位的浸膏即是仙鹤草提取物，也即本专利技术的α-葡萄糖甙酶活性抑制剂。本专利技术提供的一种防治糖尿病的医药组合物，其含有所述的α “葡萄糖甙酶活性 抑制剂，以及药学上可接受的辅助剂。本专利技术提供的一种防治糖尿病的食品组合物，其含有所述的α -葡萄糖甙酶活性 抑制剂。所述的药物制成片剂、丸剂、胶囊剂、悬浮剂或乳剂。本专利技术的有益效果是本专利技术提取物与目前市场上α-葡萄糖甙酶抑制剂降糖药 相比具有更强的抑制α-葡萄糖甙酶活性，又同时能抑制α-淀粉酶活性等，各种降糖机理 同时协同发挥降糖作用，与目前市场上的降糖药相比，不仅具有较好的降糖效果，还能降低 糖尿病性心脏病、糖尿病性肾病等糖尿病并发症的效果。附图说明图1是提取物的剂量对抑制率的影响图。图2是提取物对温度的稳定性实验图。图3是提取物对ρΗ的稳定性实验图。图4是提取物对α -葡萄糖甙酶的抑制动力学实验图。具体实施例方式以下结合实际情况，对本明的具体实施方式作详细说明实施例1仙鹤草提取物的制备实施中，以在广州附近采的仙鹤草(由广东中研所蔡岳文教授鉴定为蔷薇科 (Rosaceae)植物仙鹤草(Agrimonia pilosa Ledeb.))为例，首先取干燥的仙鹤草Ikg粉 碎，过60目筛，称取仙鹤草被中药粉碎机粉碎后过60目筛所得的粉末IOOg于2000ml圆 底烧瓶中，加IOOOml的质量浓度为60%的乙醇为提取溶剂，加热至80°C进行热回流，回流 提取3次，每次1小时，合并醇提液，浓缩，制成浸膏。浸膏用水溶解，按极性大小先后用石 油醚，乙酸乙酯，正丁醇对水溶液进行萃取，挥干乙酸乙酯部位的溶剂得乙酸乙酯部位的浸 膏，即是本专利技术所指的仙鹤草提取物。本专利技术中所述的仙鹤草提取物作为一种α -葡萄糖甙酶活性抑制剂能抑制α -葡 萄糖甙酶活性达到防治糖尿病的作用。实施例2PBS溶液的配制又称磷酸盐缓冲溶液，一般选择K2HPO4和KH2PO4配制，因为钠盐溶解的较慢。根据 不同PH的溶液，称量不同质量的磷酸盐，也可以用ρΗ计调溶液的pH。PBS —般用作支持电 解质。其配置方法如下采用去离子水、KH2PO4和Na2HPO4 · 2Η20配制PBS溶液，按以下步 骤进行⑴配制l/15mol/L KH2PO4,即每升水中溶解9. 078克KH2PO4 ； (2)配制l/15mol/ LNa2HPO4 ·2Η20，即每升水中溶解 11. 876 克 Na2HPO4 ·2Η20 ； (3)将 18. 2% (体积分数)KH2PO4 溶液和81. 8% Na2HPO4 · 2Η20混合；最终测定PBS液的ρΗ值约为7. 4。实施例3小肠α -葡萄糖甙酶的提取雄性大鼠，体重230 280g，左右体重禁食24h，脱颈椎(断头)处死，立即取小肠 上段，用预冷的PBS冲洗2次，翻转小肠后再漂洗，将洗净的小肠置于冰台上，用粗卫生纸 掖干小肠上的黏液，用载波片轻刮下小肠黏膜，称重，按1 10比例加入PBS溶液勻浆，于 40C，14000xg离心30min，弃上清，沉淀用预冷的PBS洗两次，均于4°C，14000xg离心30min， 最后沉淀按1 5用PBS稀释后，于4°C，500xg离心lOmin，上清液供实验用。Bradford法 测定蛋白浓度。实施例4α -葡萄糖甙酶反应体系的建立67mmol/L 磷酸钾缓冲液(pH6. 8) 1. 7ml, lmg/ml GSH 50 μ 1，20mg/ml α -葡萄糖甙 酶提液5μ 1，37°C水浴反应IOmin后，加入0. 116mol/L PNPG过饱和溶液50 μ 1，37°C水浴 反应IOmin后，加入0. lmol/L碳酸钠溶液IOml终止反应。实施例5仙鹤草提取物对α -葡萄糖甙酶活性影响的测定仙鹤草提取物溶液25μ1 (终浓度为30yg/ml)加入到标准反应体系(系统缓 冲液体积相应减少)中，而后先与酶保温lOmin，再加底物(0. 116mol/L PNPG过饱和溶液 50 μ 1)反应10min，0. lmol/L碳酸钠溶液IOml终止反应，测定400nm处吸光度。用蒸馏水 代替酶和仙鹤草提取物液作空白试验，蒸馏水代替酶液作背景实验，其他步骤及试剂同上。 酶抑制率测定公式如下抑制率(％)=白—rU背景χ 100%d空白式中A空白为不加样品反应后的吸光度值；A样品为加入样品反应后的吸光度 值；A背景为只加样品的吸光度值。结果见表1 表1 仙鹤草提取物α -葡萄糖甙酶活性影响的测定A空白A样品A背景抑制率(％)=(4白—“样品々背景))χ100% d空白0. 560. 230.02665%实施例6仙鹤草提取物对α -淀粉酶活性影响的测定取适量用本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种α－葡萄糖甙酶活性抑制剂，其特征在于该抑制剂用以下方法提取获得：首先取干燥的仙鹤草１ｋｇ粉碎，过６０目筛，称取中药粉碎机粉碎仙鹤草过６０目筛所得粉末１００ｇ于２０００ｍｌ圆底烧瓶中，加１０００ｍｌ的质量浓度为６０％的乙醇为提取溶剂，加热至８０℃进行热回流，回流提取３次，每次１小时，合并醇提液，浓缩，制成浸膏；浸膏用水溶解，按极性大小先后用石油醚，乙酸乙酯，正丁醇对水溶液进行萃取，挥干乙酸乙酯部位的溶剂得乙酸乙酯部位的浸膏即是仙鹤草提取物，也即本专利技术的α－葡萄糖甙酶活性抑制剂。

【技术特征摘要】
一种α 葡萄糖甙酶活性抑制剂，其特征在于该抑制剂用以下方法提取获得首先取干燥的仙鹤草1kg粉碎，过60目筛，称取中药粉碎机粉碎仙鹤草过60目筛所得粉末100g于2000ml圆底烧瓶中，加1000ml的质量浓度为60％的乙醇为提取溶剂，加热至80℃进行热回流，回流提取3次，每次1小时，合并醇提液，浓缩，制成浸膏；浸膏用水溶解，按极性大小先后用石油醚，乙酸乙酯，正丁醇对水溶液进行萃...

【专利技术属性】
技术研发人员：张焜，陈优生，杜志云，赵肃清，
申请(专利权)人：广东工业大学，
类型：发明
国别省市：81[中国|广州]