本发明专利技术属于植物基因工程技术领域，具体为一种拟南芥ＴＣＰ家族转录因子及其编码基因与应用。本发明专利技术所提供的ＴＣＰ８蛋白，来源于拟南芥，名称为ＡｔＴＣＰ８，其氨基酸序列如ＳＥＱＩＤＮＯ：２所示。拟南芥ＴＣＰ８转录因子的编码基因的核苷酸序列为ＳＥＱＩＤＮＯ：１所示序列，或者为编码ＳＥＱＩＤＮＯ：２氨基酸序列的多核苷酸序列。本发明专利技术的基因可用于拟南芥调控开花分子机制的研究，并可用于调控植物开花进程。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于植物基因工程
，具体涉及一种拟南芥TCP家族转录因子及其 编码基因与应用。
技术介绍
开花是高等植物从营养生长向生殖生长转化的重要发育阶段，这一过程是受植物 内部发育信号与外界环境共同决定的，它不仅是植物个体发育过程中极其重要的一个环 节，对于物种的繁衍与进化也同样至关重要。对于农业生产，农作物开花时间的适宜性与一 致性直接影响到农产品的产量与质量。过早、过晚的开花或者雌雄花期不遇都将导致农业 生产的减产，同时花期不遇也对制种过程中种子质量的保障构成巨大的威胁。另外，植物开 花的调控对园林花卉生产也有着重要的意义。因此，从模式植物拟南芥入手，了解调控植物 开花的分子机制，获得宝贵的基因资源；培育具有合适花期的农作物及调控植物的开花具 有重要的现实和战略意义。通过对模式植物拟南芥的生理学与遗传学研究，目前认为调控拟南芥开花至少存 在四个途径光周期途径、赤霉素途径、自主途径和春化作用途径。这四条途径相对独立却 又相互差错，许多基因间存在调控与反馈关系，如促进开花的整合子SOCI和FT，都同时受 到多条途径的调控。这些交错最终形成复杂的网络，使得植物能综合内部发育与外界环境 信号，实现对开花时间的精密调控(曾群等，遗传，28 (8) :1031-1036，2006)。TCP家族转录因子是植物古老而特有的转录因子家族，然而对它的认识研究却刚 刚起步。1999年，Cubes根据玉米基因TBI、金鱼草基因CYC和水稻基因PCFs所拥有共同 的保守domain，第一次提出TCP家族的概念。早期的研究发现TCP家族基因广泛参与调控 植物的生长发育，如TBl参与抑制侧芽伸长；CYC参与花的对称性建立；PCF亚家族在分生 组织调控细胞周期中有重要作用(雷娟等，分子植物育种，2005年，第3卷，第1期，第31-35 页)。对拟南芥基因组分析显示拟南芥共有24个潜在的TCP家族转录因子，可分为TCP-C 和TCP-P两个亚家族。近年来随着研究的深入，人们对TCP家族的作用有了更多的认识，如 AtTCPl可以调控油菜素内酯的合成；AtTCP4可以调控甲基茉莉酸的合成；AtTCPH在种子 胚的萌发过程中有重要作用。目前对AtTCPS的研究基本上是一片空白，对于TCP家族调控植物开花的研究也为 数不多，大多仅停留在生理观察阶段，人们对其遗传和分子机制也几乎一无所知。因此借助 拟南芥模式生物，挖掘TCP家族中调控开花的重要基因资源，并应用到农作物性状改良上 具有重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种拟南芥TCP家族转录因子AtTCPS及其编码基因，并提供 该编码基因的应用。本专利技术所提供的拟南芥TCP家族转录因子AtTCPS，是具有SEQ ID NO. 2所示氨基酸残基序列的蛋白质，或者是将SEQ ID NO. 2所示的氨基酸残基序列经过一个或几个氨 基酸残基的取代、缺失或添加具有与SEQ ID NO. 2所示的氨基酸残基序列相同活性的由 SEQ ID NO. 2衍生的蛋白质。拟南芥TCP家族转录因子AtTCPS的编码基因，是下列核苷酸之一1)SEQ ID NO. 1所示的DNA序列；2)编码SEQID NO. 2所示氨基酸序列的多核苷酸。SEQ ID NO. 1由1630个碱基组成，该基因的读码框为自5，端第129位至1334位 碱基；SEQ ID N0. 2由401个氨基酸残基组成。本专利技术还包括上述基因的表达载体和细胞系。本专利技术的基因可用于拟南芥调控开花分子机制的研究，并用于调控植物开花进 程。附图说明图1为AtTCPS全长扩增产物凝胶电泳图谱。图2为AtTCP8和部分拟南芥TCP家族转录因子TCP domain同源性分析。图3为AtTCPS和其它拟南芥TCP家族转录因子系统发生树。图4为长日照生长45天野生型拟南芥和转基因植株抽苔表型。图5为野生型拟南芥和转基因株系AtTCPS表达水平检测。图6为抽苔达2cm时野生型拟南芥和转基因植株莲座叶片数统计。具体实施例方式实施例1、拟南芥TCP家族转录因子AtTCP8编码基因的获得。1. 1拟南芥材料准备取在16h L/8h D光照，23°C条件下培养30天拟南芥Col-O的花分生组织、花序分生 组织和幼嫩的花苞。1.2 RNA 提取取拟南芥材料约0. lg。液氮充分研磨后，转移到1. 5ml离心管，加Iml TRIZoI# ( irwitrogen公司)，混勻后，室温放置15分钟，加0. 2ml氯仿异戊醇 (24:1),剧烈摇动15秒后室温放置5分钟，13000rpm, 4°C离心15分钟。取上清液并加入等 体积异丙醇，小心混勻，室温放置15分钟，13000rpm, 4°C离心15分钟。70%乙醇洗涤沉淀， 室温干燥15分钟。溶解于适量的经0. 1% DEPC处理过的ddH20水中，贮存于_80°C备用。1. 3 cDNA第一链合成和反转录PCR采用上海申能博彩生物技术公司(SHBC)的cDNA第一链合成试剂盒，按照操作指 南将总RNA反转录成cDNA。反应体系和反应条件分别为2μ g制备的总RNA，0. 5μ 1 Rnase inhibitor，加 DEPC 处理过的去离子水至 8. 5 μ 1，2 μ 1 的 Oligo (dT) 18 primer. 65°C，5min,室温放置 lOmin，13000rpm 简短离心5s。再依次加入4μ1 5XFirst-Strand buffer,0.5 μ 1 RNase Inhibitor,2 μ 1 IOOmM DTT, 2μ 1 dNTP, 1 μ 1 MMLV Reverse Transcriptase ο小心混勻；37°C反转录1小时，90°C 5分钟；冰上冷却；13000rpm短暂离 心5秒钟，存放于-20°C待用。1.4 AtTCP8全序列的获得根据 TAIR (http://www. arabidopsis. org/)上提供的 AtTCP8 全长 CDS 序列，设计了 两条引物 AtTCP80E-S(5，ATAGAGCTCATGGATCTCTCCGACATCCGAAACA 3，)和 AtTCP80E_A (5， ATACTGCAGTCACTCAGAGCTATTTGAGTTCTCC 3，)(SEQ ID NO. 3)作为 PCR 反应的引物。PCR 反应体系为50μ 1，反应条件为94°C预变性5min，94°C变性40s，55°C复性40s，72°C延伸 70s，循环38次。72°C充分延伸5min。将所得的PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳分离获得一 段约1200bp的片断，如图1所示。回收并且通过TA克隆至TAKARA pMD_19_T载体后，由上 海英骏公司测序，获得AtTCPS全序列，获得的全序列和TAIR上公布的序列完全一致。实施例2 拟南芥TCP家族转录因子AtTCP8功能分析。2. 1序列比较分析用Genedoc软件分析了 AtTCPS与其他拟南芥TCP家族蛋白的同源性。分析结果表明 AtTCP8具有典型保守的TCP domain，如图2所示，图中显示的是TCP domain，加黑部分是一 致性的氨基酸序列。使用MEGA软件建立了 AtTCPS同其他拟南芥TCP家族蛋白的本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种拟南芥ＴＣＰ家族转录因子，其特征在于是ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．２所示氨基酸残基序列的蛋白质。
【技术特征摘要】
1.一种拟南芥TCP家族转录因子，其特征在于是SEQ ID NO. 2所示氨基酸残基序列的 蛋白质。2.拟南芥转录因子AtTCPS编码基因，其特征在于其DNA序列为SEQID NO. 1所示序 列，或者为编码SEQ ID NO. 2所示氨基酸序列的多核苷酸序列。3.根据权利要求2所述的基因，其特征在于...
【专利技术属性】
技术研发人员：蒯本科，王晓彦，魏强，余进，梁宁菁，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]
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