人乳腺癌高转移细胞亚系及其建立方法技术

一种人乳腺癌高转移细胞亚系ＭＤＡ－ＭＢ－２３１ｓｃｉ，具有生物学和病理学特征、特殊转移表型。生物学特征是ＭＤＡ－ＭＢ－２３１ｓｃｉ细胞为典型的多边形上皮样细胞；胞浆丰富，胞核大而圆；贴壁生长，大小较一致，排列紧密，界线清楚。病理学特征是裸鼠体内转移部位肿瘤细胞与皮下肿瘤的细胞结构相似，转移时间缩短，转移率高。转移时间缩短至２６－４２天；肺转移率为１００％，同时伴部分动物腋下淋巴结转移。高转移人乳腺癌细胞系的建立方法，（１）人乳腺癌原位移植瘤模型的建立；（２）原位移植肺靶向转移模型的筛选；（３）人乳腺癌肺靶向高转移细胞系的建立及传代。本发明专利技术采用体内筛选每代手术切除肿瘤及相应乳腺，提高成功率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及癌细胞系，具体涉及，属于动 物细胞系的

技术介绍
肿瘤的侵袭与转移时恶性肿瘤最基本的生物学特性之一，原发性肿瘤致死是较为 罕见的，90%以上肿瘤患者的死于肿瘤细胞在人体内的转移时。乳腺癌是危害女性身心健康的主要疾病之一，成为女性最常见的恶性肿瘤。在美 国，每年有4. 5万名乳腺癌患者因肿瘤远处转移而死亡。然而目前肿瘤转移的确切机制尚不十分清楚，关于肿瘤转移一直是肿瘤学研究的 热点。在有关乳腺癌浸润、转移研究中，MDA-MB-435是较为常用的人乳腺癌细胞株。文献 报道，裸鼠乳腺癌脂肪垫原为接种该细胞4周、8周和12周时，鼠肺的转移率分别是30%、 70%和100%。由此可见，虽然该细胞株最终可以有较高的肺转移率，但需要较长的实验周 期和较高的实验投入。所以在本领域的研究中较大的局限性，制约了对乳腺癌转移机制的 研究的进展。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种高转移人乳腺癌细胞系，以解决现有技 术所存在的诸多不足之处，如人乳腺癌细胞株MDA-MB-435实验周期较长和实验投入较高 的缺陷。本专利技术所需要解决的技术问题，可以通过以下技术方案来实现作为本专利技术的第一方面，一种人乳腺癌高转移细胞亚系是MDA-MB-231sci，具有生 物学和病理学特征，还具备特殊转移表型。所述生物学特征是，MDA-MB-231sci细胞为典型的多边形上皮样细胞；胞浆丰富，胞核大而圆，保持了 MDA-MB-231细胞系的形态学特点； 贴壁生长，大小较一致，排列紧密，界线清楚。所述病理学特征是所述转移使用裸鼠，所述裸鼠体内转移部位肿瘤细胞与皮下肿 瘤的细胞结构相似，转移时间缩短，转移率高。所述转移时间缩短至沈-42天。所述裸鼠转移率为100%。人乳腺癌高转移细胞亚系MDA-MB-231sci，包藏于中国典型培养物保藏中心。保藏 地址中国湖北省武汉市武汉大学生命科学学院武汉市武昌珞珈山，邮编430072。保藏日 期2009年7月四日。保藏编号CCTCC NO :C200955。作为本专利技术的第二方面，人乳腺癌高转移细胞亚系(MDA-MB-231sci)的建立方 法，其特征在于，(1)人乳腺癌原位移植瘤模型的建立取裸小鼠5只，收集体外培养生长旺盛的连 续传代人乳腺癌细胞株MDA-MB-231，调整细胞浓度为每毫升1 X IO7个，每只小鼠取0. 2ml 接种于裸小鼠右背侧近腋部皮下；当移植瘤长至直径15mm左右时，颈椎脱臼法处死小鼠，剥取出移植瘤，清除外周 血块及结缔组织，用含抗菌素的生理盐水冲洗，切取生长良好、淡红色、鱼肉状的瘤组织，将 其剪切成直径约1. 5mm的小块，用20号套管针移植至另外裸小鼠右前侧乳腺脂肪垫部位， 建立乳腺癌原位移植瘤模型；(2)原位移植肺靶向转移模型的筛选建立原位移植瘤模型后，待瘤径长至1. 5 2. Ocm时手术切除肿瘤及相应乳腺，待动物处于濒死状态时牺牲小鼠进行系统解剖，取肉眼 明显可见的肺转移灶移植至另外裸小鼠乳腺脂肪垫进行原位移植，按乳腺原位移植、手术 切除肿瘤及相应乳腺、肺转移灶、乳腺原位移植的体内筛选方式进行高转移循环筛选；原代10只裸小鼠，其他每代4 6只裸小鼠，循环筛选至肺转移达100%，此时取 肿瘤组织建立相应的高转移细胞亚系；(3)人乳腺癌肺靶向高转移细胞系的建立及传代将荷瘤裸小鼠颈椎脱白法处 死，无菌条件下取出皮下移植瘤，剔除坏死组织、纤维包膜及血管；用含双抗的PBS洗2次，向组织滴1-2滴含10%小牛血清的DMEM培养液，用显微 剪刀和显微镊将其尽量剪成小块；用显微镊将剪切好的组织块在6cm培养皿上均勻放置，每一小块间距0. 5cm左 右；然后在培养皿内注入适量培养液，放置在37°C、含5% CO2的培养箱内。以后所建 立的原代细胞用含10%小牛血清的DMEM培养液进行常规培养和传代。所述步骤O)中所述循环筛选至第四代时肺转移达100%，同时伴部分动物腋下 淋巴结转移。本专利技术的有益效果1、本专利技术采用体内筛选每代手术切除肿瘤及相应乳腺，提高成功率。2、本专利技术的转移率提高达100%，同时伴部分动物腋下淋巴结转移。以下结合附图和具体实施方式来进一步说明本专利技术。附图说明图1为乳腺癌原位移植瘤模型的照片。图2为MDA-MB_231sci细胞的形态照片。人乳腺癌高转移细胞亚系MDA-MB_231sci。保藏日期2009年7月29日。保藏单位中国典型培养物保藏中心，简称CCTCC。保藏编号CCTCC NO :C200955。具体实施例方式为了使本专利技术的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具 体图示，进一步阐述本专利技术。一、材料1.肿瘤细胞人乳腺癌高转移细胞MDA-MB-231由和记黄埔(上海)医药有限公司惠赠(原始来 源于 ATCC 美国菌种保藏中心 American Type Culture Collection 编号 ATCC HTB16 )， 皮下移植瘤MDA-MB-231由上海市肿瘤研究所保存和传代。2.细胞培养试剂Dulbecco MEM(DMEM)培养基购自 SIGMA-ALDRICH 公司；胎牛血清购自 PAA laboratories GmbH公司；胰蛋白酶购自GIBCO BRL公司；生理盐水，庆大霉素，10%中性甲 醛溶液，PBS缓冲液等均为进口分装或国产分析纯试剂。3.仪器与设备超净工作台由苏州净化设备有限公司生产，型号为SW-CJ-2FD ；CO2培养箱为 Heraeus产品，型号为BB16UV，以及Thermon公司产品，型号为eel 1150 ；恒温水浴锅为上海 精宏实验设备有限公司产品，型号为DK-S22;倒置显微镜为重庆光电仪器有限公司产品， 仪器型号为》)S-1B ；数码相机为NIKON产品；超低温冰箱型号为Jouan，法国生产；移液枪 为GILSON公司产品；液氮罐型号为，MVE CRYSTEM 4000 ；培养皿及培养瓶为Greiner公司 产品；小型电热真空灭菌器，型号为XG1.UXD-0. 361B。4.实验动物SPF级BALB/c-nu/nu裸小鼠，鼠龄6 7周，体重18_22g，雌性。实验小鼠 由上海市肿瘤研究所提供，生产许可证号为SCXK(沪)2007-0001，使用许可证号为 SYXK (沪)2007-0001。所用垫料、饮水、全价颗粒饲料及其他与动物接触的物品均经高压灭 菌处理。实验和饲养条件严格按照SPF动物的规范要求。二、方法1.人乳腺癌原位移植瘤模型的建立取裸小鼠5只，收集体外培养生长旺盛的连续传代细胞，调整细胞浓度为每毫升 1 X IO7个，每只小鼠取0. 2ml接种于裸小鼠右背侧近腋部皮下。当移植瘤长至直径15mm左 右时，颈椎脱白法处死小鼠，剥取出移植瘤，清除外周血块及结缔组织，用含抗菌素的生理 盐水冲洗，切取生长良好、淡红色、鱼肉状的瘤组织，将其剪切成直径约1. 5mm的小块，用20 号套管针移植至另外裸小鼠右前侧乳腺脂肪垫部位，建立乳腺癌原位移植瘤模型(图1)。2.原位移植肺靶向转移模型的筛选建立原位移植瘤模型后，待瘤径长至1. 5 2. Ocm时手术切除肿瘤及相应乳腺，待 动物处于濒死状态时牺牲小鼠进行系统解剖，取肉眼明显可见的肺转移灶移植至另外裸小 鼠乳腺脂肪垫本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人乳腺癌高转移细胞亚系是ＭＤＡ－ＭＢ－２３１ｓｃｉ，具有生物学和病理学特征，还具备特殊转移表型。

【技术特征摘要】
1. 一种人乳腺癌高转移细胞亚系是MDA-MB-231sci，具有生物学和病理学特征，还具 备特殊转移表型。2.根据权利要求1所述的人乳腺癌高转移细胞亚系，其特征在于，所述生物学特征是，MDA-MB-231sci细胞为典型的多边形上皮样细胞；胞浆丰富，胞核大而圆，保持了 MDA-MB-231细胞系的形态学特点；贴壁生长，大小较一致，排列紧密，界线清楚。3.根据权利要求1所述的人乳腺癌高转移细胞亚系，其特征在于，所述病理学特征是 所述转移使用裸鼠，所述裸鼠体内转移部位肿瘤细胞与皮下肿瘤的细胞结构相似，转移时 间缩短，转移率高。4.根据权利要求3所述的人乳腺癌高转移细胞亚系，其特征在于，所述转移时间缩短 至26-42天。5.根据权利要求1所述的人乳腺癌高转移细胞亚系，其特征在于，所述裸鼠转移率为 100%。6. 一种根据权利要求1所述的人乳腺癌高转移细胞亚系的建立方法，其特征在于，(1)人乳腺癌原位移植瘤模型的建立取裸小鼠5只，收集体外培养生长旺盛的连续传 代人乳腺癌细胞株MDA-MB-231，调整细胞浓度为每毫升1 X IO7个，每只小鼠取0. 2ml接种 于裸小鼠右背侧近腋部皮下；当移植瘤长至直径15mm左右时，颈椎脱臼法处死小鼠，剥取出移植瘤，清除外周血块 及结缔组织，用含抗菌素的生理盐水冲洗，切取生长良好、淡红色、鱼肉状的瘤组织，将其剪 切成...

【专利技术属性】
技术研发人员：闫明霞，姚明，刘蕾，赵方瑜，朱淼鑫，王晓敏，孔韩卫，
申请(专利权)人：上海市肿瘤研究所，
类型：发明
国别省市：31