含白芍、人参、丹参、青蒿、甘草、川芎和当归中至少两种的中成药的检测方法技术

本发明专利技术提供了一种含白芍、人参、丹参、青蒿、甘草、川芎和当归中至少两种的中成药的检测方法，包括：制备供试品溶液、对照品药材溶液，以乙腈∶水作为流动相，检测波长为２０１－２９０ｎｍ，进行ＨＰＬＣ的测定；结果检测是在供试品的色谱中，在与对照药材色谱相同保留时间的位置上，检视是否有相应的色谱峰；本发明专利技术的检测方法与传统的薄层色谱鉴别方法相比，改变了通常对液相色谱中含多种药材的样品处理方法，成功地消除了中成药制剂中待测成分以外的液相图谱中的杂峰，结果更精确稳定。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术提供了一种药物中有效成分的检测方法，其为一种中药有效成分的检测方 法，尤其是指含有白芍、人参、丹参、青蒿、甘草、川芎、当归中的两种或两种以上药材成分的 中药制剂中有效成分的检测方法。
技术介绍
中药复方是中医临床用药的主要形式和手段，方中各味药又含有多种化学成分， 这些固有的化学成分是复方发挥药效作用的物质基础，但方中任一活性成分又不能全面反 映中医用药所体现的整体疗效，这是中药复方与化学合成药品在制定质量标准过程中的根 本区别，所以宏观的综合分析成为中药复方发展的必然趋势。中药复方作为中医药的精髓， 已应用了上千年，从现代研究的角度，一个中药复方具有多成分、多作用、多靶点等特点。在 “素问”至真要大论中记载“主病之谓君，佐君之谓臣，应臣之谓使”。随着中药现代化、国 际化的深入发展，迫切需要建立一种对中药和中药复方产品从原料到成品进行质量控制以 及对其复杂成分检出的方法，指纹图谱应运而生。“指纹”(finger printing)鉴定来源于法医学，每个人的指纹在微小的细节构造 中各有不同。依据这些差异，通过“比对”方式，可以确定鉴别每个人的特征。随着现代生 物技术的发展，出现了 DNA指纹图谱。通过DNA指纹图谱分析，能对人、动物、植物等生物体 进行鉴别鉴定。植物药在质量控制方面使用指纹图谱(尤其是色谱指纹图谱)发轫于20世纪70 年代。当前的中药指纹图谱(fringerprinting)借用DNA指纹图谱发展而来，是一种综合 的、可量化的色谱鉴定手段。最先发展起来的是中药化学成分色谱指纹图谱，特别是高效液 相色谱(HPLC)指纹图谱。HPLC具有很高的分离度，可把复杂的化学成分进行分离而形成高 低不同的峰组成一张色谱特，这些色谱峰的高度和峰面积分别代表了各种不同化学成分和 其含量，和药效研究结果联系就会产生中药谱效学。很多中成药是由多种药味组成的，例如同仁乌鸡白凤丸由十九味药材组成，药材 涉及面广，化学成分复杂，仅仅靠其十几个活性成分作为其质量控制指标，难于全面控制中 成药丸的内在质量状况，更不能对其真伪优劣做出判断。因此，利用建立色谱指纹图谱来控 制其质量比薄层鉴别、含量测定等常规标准更加全面客观。
技术实现思路
针对现有技术在中药成分检测方面存在的缺陷。专利技术人经过大量的实验，研究了 一种中药制剂中同时鉴别处方多种药材的检测方法，结果证明，与传统的薄层色谱鉴别方 法相比，本专利技术的方法避免现有方法需要分别制备供试品溶液和对照药材溶液，再采用不 同的展开剂系统分别实验的缺点，鉴定结果也更客观准确。本专利技术的贡献在于专利技术人将指纹图谱应用于中药制剂质量的整体分析与评价。4以同仁乌鸡白凤丸为例，采用HPLC方法建立同仁乌鸡白凤丸(水蜜丸)制剂指纹图谱，为 中药指纹图谱分析提供新的思路。本专利技术的目的是提供一种含白芍、人参、丹参、青蒿、甘草、川芎和当归中至少两种 成分的中成药的检测方法，通过该方法可以得到准确的结果，且尽可能避免了其他杂质干 扰。本专利技术提供一种含白芍、人参、丹参、青蒿、甘草、川芎和当归中至少两种成分的中 成药的检测方法，该方法包括(1).供试品溶液的制备，称取供试品，加入相当于供试品5-10倍量的甲醇，溶解， 滤过，滤液回收溶剂并浓缩至干，残渣加与上述甲醇等量的水使溶解，放冷，通过大孔树脂 吸附柱，以上述甲醇量的2-10倍的水洗脱，弃去水液，再用15-45% wt的与上述甲醇等量 的乙醇洗脱，弃去洗脱液，继用75-95% wt的为上述甲醇量的2-6倍的乙醇洗脱，收集洗脱 液，蒸干，残渣用甲醇溶解并移至量瓶，加甲醇至刻度，过微孔滤膜，取续滤液，制成供试品 溶液；(2).对照药材溶液的制备，分别取白芍、人参、丹参、青蒿、甘草、川芎和当归中至 少两种对照药材各lg，与供试品溶液同法制成对照药材溶液；(3).色谱条件，以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按照不同比例的A B洗脱； 检测波长为201-290nm ；(4).测定，吸取上述溶液各10μ L，注入液相色谱仪，测定；(5).结果检测，在供试品的色谱中，在与对照药材色谱相同保留时间的位置上，检 视是否分别有相应的色谱峰。上述步骤(1)中过滤用的微孔滤膜优选为0.2 0.75 μ m的微孔滤膜，更优选 0. 4 0. 5 μ m的微孔滤膜.本专利技术的检测方法采用样品先经过前处理再用高效液相色谱的检测方法，改变了 通常对液相色谱中含白芍、人参、丹参、青蒿、甘草、川弯和当归中至少两种药材的样品处理 方法，成功地消除了中成药制剂中待测成分以外的液相图谱中的杂峰，结果更精确稳定。本专利技术提供的上述一种含白芍、人参、丹参、青蒿、甘草、川芎和当归中至少两种成 分的中成药的检测方法，具体步骤包括1.供试品溶液的制备精密称取供试品(例如6g)，加入相当于供试品5-10倍量 的甲醇(优选相对于6g供试品，甲醇量为约50mL)，溶解，优选超声处理(功率300W，频率 50kHz) 30分钟，滤过，滤液回收溶剂并浓缩至干，残渣加与上述甲醇等量的水使溶解，放冷， 通过DlOl型大孔树脂吸附柱(装柱的树脂约60g，内径2cm，长12cm)，以大约是上述甲醇 量的2-10倍的水(优选5-7倍于甲醇，例如甲醇量约50mL，则水大约300mL)洗脱，弃去水 液，再用15-45% wt (优选30% wt)的与上述甲醇等量的乙醇(例如300mL)洗脱，弃去洗 脱液，继用75-95% wt (优选80% wt)的约为上述甲醇量的2-6倍的(优选3_5倍于甲醇) 乙醇(例如甲醇量约50mL，则该乙醇大约200mL)洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇溶解 并转移至量瓶中(例如供试品为6g，则优选量瓶为4-6mL，更优选5mL量瓶)，加甲醇至刻 度，过微孔滤膜(优选0. 45 μ m的微孔滤膜)，取续滤液，制成供试品溶液；2.对照药材溶液的制备分别取白芍、人参、丹参、青蒿、甘草、川芎、当归中至少 两种对照药材各lg，与供试品溶液同法制成对照药材溶液；3.色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，进行按照由100% wt的B依次减少B的量增加A的量直至100% wt的A的次序的梯度洗脱；梯度洗脱的时间为100-150分钟；检测波长为201-290nm，优选 203-180nm，例如检测波长约为203nm(当检测白芍、人参、甘草和/或青蒿时)，检测波长优 选约280nm(当检测丹参、川芎和/或当归时)；4.测定照高效液相色谱法(附录VI D)试验，精密吸取上述溶液各10μ L，注入 液相色谱仪，测定；5.结果检测在供试品的色谱中，在与对照药材色谱相同保留时间的位置上，检 视是否分别有相应的色谱峰，且紫外光谱相一致。若供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相同保留时间位置上，分别有相应 的色谱峰，且紫外光谱相一致，则可以判断该供试品(样品)中含有对照品的药材或者药材 成分；进一步根据峰的面积可以折算该供试品(样品)中含有对照品的药材或者药材成分 的含量。本专利技术所涉及的供试品是指含有白芍、人参、丹参、青蒿、甘草、川芎和当归中至少 两种成分的中成药(制剂)。本专利技术上述的检测方法中，还优选包含另一对照溶液的制备的步骤，即对照品溶 液的制备的步骤本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种含白芍、人参、丹参、青蒿、甘草、川芎和当归中至少两种的中成药的检测方法，该方法包括：（１）．供试品溶液的制备，精密称取供试品，加入相当于供试品５－１０倍量的甲醇，溶解，滤过，滤液回收溶剂并浓缩至干，残渣加与上述甲醇等量的水使溶解，放冷，通过大孔树脂吸附柱，以上述甲醇量的２－１０倍的水洗脱，弃去水液，再用１５－４５％ｗｔ的与上述甲醇等量的乙醇洗脱，弃去洗脱液，继用７５－９５％ｗｔ的为上述甲醇量的２－６倍的乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至量瓶中，加甲醇至刻度，过微孔滤膜，取续滤液，制成供试品溶液；（２）．对照药材溶液的制备，分别取白芍、人参、丹参、青蒿、甘草、川芎和当归中至少两种对照药材各１ｇ，与供试品溶液同法制成对照药材溶液；（３）．色谱条件，以乙腈为流动相Ａ，以水为流动相Ｂ，按照不同比例的Ａ：Ｂ洗脱；检测波长为２０１－２９０ｎｍ；（４）．测定，吸取上述溶液各１０μＬ，注入液相色谱仪，测定；（５）．结果检测，在供试品的色谱中，在与对照药材色谱相同保留时间的位置上，检视是否分别有相应的色谱峰。

【技术特征摘要】
1.一种含白芍、人参、丹参、青蒿、甘草、川芎和当归中至少两种的中成药的检测方法， 该方法包括(1).供试品溶液的制备，精密称取供试品，加入相当于供试品5-10倍量的甲醇，溶解， 滤过，滤液回收溶剂并浓缩至干，残渣加与上述甲醇等量的水使溶解，放冷，通过大孔树脂 吸附柱，以上述甲醇量的2-10倍的水洗脱，弃去水液，再用15-45% wt的与上述甲醇等量的 乙醇洗脱，弃去洗脱液，继用75-95% wt的为上述甲醇量的2-6倍的乙醇洗脱，收集洗脱液， 蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至量瓶中，加甲醇至刻度，过微孔滤膜，取续滤液，制成供试品 溶液；(2).对照药材溶液的制备，分别取白芍、人参、丹参、青蒿、甘草、川芎和当归中至少两 种对照药材各lg，与供试品溶液同法制成对照药材溶液；(3).色谱条件，以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按照不同比例的A:B洗脱；检测波 长为 201-290nm ；(4).测定，吸取上述溶液各10P L，注入液相色谱仪，测定；(5).结果检测，在供试品的色谱中，在与对照药材色谱相同保留时间的位置上，检视是 否分别有相应的色谱峰。2.如权利要求1所述的检测方法，其中，所述的供试品溶液的浓度为每ml相当于供试 品 0. l-10g。3.如权利要求1所述的检测方法，其中，步骤(3)所述的检测波长为203-280nm。4.如权利要求1所述的检测方法，其中，步骤(3)所述的流动相为以乙腈为流动相A， 以水为流动相B，按照由100% wt的B依次减少B的量增加A的量直至100% wt的A的次 序进行梯度洗脱。5.如权利要求1所述的检测方法，其为含白芍、人参、丹参、青蒿、甘草、川弯和当归的 中成药中有效成分的检测方法，其中，步骤⑵为分别取白芍、...

【专利技术属性】
技术研发人员：林瑞超，王钢力，聂黎行，李志猛，陈佳，范国强，
申请(专利权)人：中国药品生物制品检定所，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]