基于病毒颗粒的鼻内流感疫苗制造技术

本发明专利技术提供了流感病毒颗粒的组合物，所述病毒颗粒包含所述病毒的重构包膜，其中所述病毒包膜完全从流感病毒粒获得，其中没有从外源向重构病毒颗粒加入脂类，其中病毒颗粒包含流感抗原血细胞凝集素和／或神经氨酸酶或其衍生物，其中没有向所述组合物加入单独的佐剂和／或免疫刺激剂，并且其中所述组合物作为鼻内或吸入给药制剂来设计，所述组合物特征在于所述制剂向人类的单次鼻内或吸入给药足以诱导抵抗所述流感抗原的全身性免疫应答和／或局部免疫应答和／或细胞毒性淋巴细胞应答，所述全身性应答能符合针对流感疫苗的ＣＨＭＰ标准，并且其中每种病毒株每次鼻内或吸入给药的血细胞凝集素剂量等于或低于３０μｇ。本发明专利技术还提供了重构的流感病毒颗粒用于制备所述组合物的用途，以及由此制备的疫苗制剂。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】基于病毒颗粒的鼻内流感疫苗专利
本专利技术涉及，例如，用于灭活流感疫苗的组合物以及给药方式， 其中，单次鼻内或吸入给药获得了与临床保护正相关的全身性免疫应答。专利技术背景通过鼻内或口咽途径及4吏用灭活流感抗原针对流感进行免疫的多种设想已作为皮下或肌肉内免疫的非注射(无针头needle-less)替 代途径被研究。已在动物模型中产生了支持非注射手段的实验数据。 得到动物数据支持的、使用灭活流感抗原(例如化学方式灭活的完整 病毒粒子，或者被进一步加工的病毒组分，例如被切开的病毒，或者 经纯化的表面抗原血细胞凝集素(HA )和/或神经氨酸酶(NA ))经鼻 内途径进行免疫的思路包括使用佐剂或免疫刺激剂(immune stimulator)与灭活流感抗原組合，或者需要多次免疫。佐剂是能增 强与其混合的抗原的免疫原性的任何物质。在人类中，通过鼻内途径 抵抗流感的成功疫苗接种仅报道过(a)活的(冷适应性的林)流感 疫苗(FluMist , Medlmmune Vaccines Inc)(参考文献l、 2、 3)， (b)病毒颗粒型流感疫苗，其佐有大肠杆菌(E. coli)的热不稳定 毒素(NasalFlu, Berna Biotech Ud)(参考文献4)或(c)使用 高剂量抗原并且重复疫苗接种(参考文献5、 10、 11)。虽然活疫苗 能诱导满意的免疫应答，但其能变成活病毒的特定性质带来了额外的 安全顾虑，而且由于需要在上呼吸道附近的病毒复制，因此有可能会 诱导出副作用。此外，所需的贮藏条件也限制了这些产品的商业化。 使用大肠杆菌HLT作为佐剂的鼻内流感疫苗与面瘫(Bell， s Palsy) 之间的强烈相关性导致佐有HLT的病毒颗粒疫苗从市场撤出(参考文献6)。流感疫苗在给定人群中的疗效可通过下述方法来评估评定与接 种后产生的抗流感抗体的数量相关的免疫原性参数。这些免疫原性参 数通常被称为CHMP标准，其用于对灭活流感疫苗进行每年重新许可认 证(参考文献7)。至今为止，通过使用灭活疫苗的一次单次鼻内施 予，不加佐剂(其是疫苗中的附加成分，其不来自将用疫苗来预防的 感染性试剂，并且是为了增强对抗原的免疫应答的目的被加入到疫苗 制剂中)，就符合这些免疫学要求或者CHMP标准(参考文献7)的、 对人类抵抗流感的成功免疫尚未有记栽。因此，人们认识到，在本领 域中仍有对下述灭活流感疫苗组合物的需求，所述组合物能在单次鼻内给药之后诱导满意的全身性免疫反应，并且不含佐剂，且通过所述 单次给药能符合CHMP标准(参考文献7 )。所述"CHMP标准，，按照下文所述被定义。在CHMP ( Committee for Medicinal Products for Human Use ) 的 iVofe尸or Cw油/7ce /^sr迈o/z/sa〃on o尸Ae《u/re边e/ "尸or Zn/7ue/zza 「acc//2es中，定义 了下述血清学参数，以评定灭活流感疫苗的免疫原性-血清保护率，其中血清保护被定义为红血球凝聚抑制 (Haemagglutination Inhibition, HI)效价 > 40,-血清转化率，其中血清转化被定义为接种前HI效价< 10，接 种后HI效价> 40，或者，接种前HI效价> IO以及HI效价至少 4倍的增加，-平均倍数增加值，这是对受试者内增加的几何平均值(即，接 种后HI效价/接种前HI效价)。针对流感疫苗免疫原性的C服P要求是对于疫苗中三种病毒林中 的每种而言，符合下述标准中的至少一项<table>table see original document page 7</column></row><table>本专利技术还适用于儿童，从他们显示出，他们以与成年人相当的方式作出免疫应答(参考文献8)。本专利技术还适用于老年受试者。老年 人为超过60岁的。专利技术描述令人吃惊地，与临床前啮齿类数据和关于人类临床经历的文献相 反，我们发现，对于18-60岁年龄组而言，用包含重构流感病毒包膜 的灭活流感疫苗进行单次鼻内接种后，人类的免疫应答符合针对流感 疫苗疗效的全部三个CHMP标准。 一次单次鼻内施予是为符合针对灭 活流感疫苗免疫原性的上述CHMP标准，通过一个或两个鼻孔进行疫苗 制剂的接种，而无需重复施予疫苗制剂。 一次单次疫苗施予(通过鼻、 吸入、口服、皮下或肌内途径)通常是下述接种安排，其不包括在 本领域作为初次(priming)和强化(boosting)而已知的、以数天或 数周的时间间隔对疫苗的多次施予。被z没计为鼻内或吸入给药制剂的 制剂包含一种或多种活性组分和赋形剂的混合物，是按照允许鼻内或 吸入给药的方式制备的。本专利技术提供了一种方法，用于诱导符合CHMP 标准的全身性免疫应答(循环的免疫球蛋白或产生抗体的B细胞)， 有利地，所述方法用对病毒颗粒流感疫苗的单次鼻内或吸入给药来进 行。本专利技术还提供了一种方法，用于诱导局部或粘膜免疫应答，所述 应答包括粘膜膜表面上作为IgA已知的分泌免疫球蛋白的增加，有利 地，所述方法用对病毒颗粒流感疫苗的单次鼻内或吸入给药来进行。活性(参考文献12)。此类组织作^^相关淋巴组织(WALT)已;， 其还被显示为用于细胞免疫应答的粘膜诱导位点(参考文献13)。因 为已知病毒颗粒具有诱导细胞内免疫应答妁可能性(参考文献14、 15),因此本专利技术还提供了诱导特异性细胞毒性淋巴细胞(CTL)的方 法。病毒颗粒(virosome)是含有病毒糖蛋白的脂质双层。通常通过 用去垢剂从带包膜病毒提取膜蛋白和脂类，接着通过除去所述去垢剂来重构特征性双层来生产病毒颗粒。本专利技术还提供了流感病毒颗粒的 组合物，其包含重构的流感病毒包膜(具体而言，不再加脂类，并且 不加免疫刺激剂(通常称为佐剂)的免疫调节剂而重构)，用于通过 气溶胶进行接种，所述气溶胶通过一个或两个鼻孔施予鼻咽或口咽的 粘膜，以获得抵抗流感的全身性和局部免疫性。通过吸入进行的单次 施予也是可行的。单次口服粘膜施予也是可行的。可从灭活病毒来制备重构流感病毒颗粒，可以用不可透析的去垢 剂对灭活病毒加以溶解，通过吸附到疏水珠粒上来除去所述去垢剂。 制备物可包含一种或多种流感抗原的经过纯化的悬浮液，所述流感抗原选自血细胞凝集素(HA)、神经氨酸酶(NA)、血细胞凝集素的衍 生物和神经氨酸酶的衍生物。可以在病毒脂类(含有低水平的内毒素 和卵清蛋白)构成的膜中，对病毒膜蛋白血细胞凝集素和神经氨酸酶 进行重构(见参考文献9)。血清凝集素和/或神经氨酸酶的衍生物是 具有经修饰的氨基酸序列和/或结构的血细胞凝集素和/或神经氨酸酶 分子。氨基酸可例如被删除、替换或添加到序列中。此外，糖基化方 式可被改变。衍生物保留有导入宿主时诱导免疫应答的能力。可在例如含有胚胎的鸡蛋中，或在附着的细胞或悬浮液中的细胞 的细胞培养物中培养用于制备重构病毒颗粒的流感病毒。病毒例如可 以是野生型的或重配的(reassortant)或经过遗传修饰的株。病毒类 型可例如是任何流感A或B亚型，包括流行性的林。本专利技术还提供疫苗。术语疫苗应被理解为具有免疫活性的药物制 备物。在某些实施方式中本文档来自技高网...

【技术保护点】
包含流感病毒颗粒的组合物，所述病毒颗粒包含所述病毒的重构包膜，其中所述病毒包膜完全从流感病毒粒子获得，其中没有从外源向所述重构病毒颗粒加入脂类，其中所述病毒颗粒包含所述流感抗原血细胞凝集素和／或神经氨酸酶或其衍生物，其中没有向所述组合物加入单独的佐剂和／或免疫刺激剂，并且其中所述组合物作为鼻内或吸入给药制剂来设计，所述组合物特征在于所述制剂向人类的单次鼻内或吸入给药能诱导抵抗所述流感抗原血细胞凝集素和／或神经氨酸酶或其衍生物的全身性免疫应答和／或局部免疫应答。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：AJ克斯坦，L杰勒兹，PJ舍恩，JJP瑙塔，DH范蕾内科莱希思，
申请(专利权)人：索尔瓦生物学有限公司，
类型：发明
国别省市：NL[荷兰]