从属于鲑鳟亚目的鱼的鱼脑下线得到提纯的抽提物，而提供了鱼生长激素．这个激素是一种多肽，具有如下的理化性质：（Ⅰ）氨基酸组成：如表示１所示；（Ⅱ）在Ｎ一端上３３个氨基酸的顺序和在Ｃ一端上２３个氨基酸的顺序如说明书和权利要求中定义的；（Ⅲ）分子量：大约２２，０００；（Ⅳ）等电点：５．６－５．７；（Ⅴ）可溶于碱性水溶液中，难溶或不溶中性和酸性水溶液．（*该技术在2005年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术与从硬骨鱼得来的鱼生长激素和使用鱼生长激素来促进鱼的生长的方法有关。哺乳动物的生长激素是在脑下线中生成的。哺乳动物生长激素的活性和结构都已经知道。例如，人的生长激素在下列刊物中均有报导：U.J.Lewis：J.Am.Chem.Soc.，80，4429（1958）A.S.Hartree：Biochem.J.，100，754（1966）C.H.Li：Arch.Biochem.Biophys.（Suppl.），1，327（1962）已经发表许多有关鱼生长激素的分离的报告如下：“从Tilapias（一种鱼名-译者）中分离”，S.W.Farmer等人著，Gen.Comp.Endocrin.，30，91（1976）“从鲟鱼中分离”，S.W.Farmer等人著，Endocrinology，108，377（1981）“从鲤鱼中分离”，A.F.Cook等人著，Gen.Comp.Endocrin.，50，335（1983）本专利技术者从鲑鱼的脑下线抽提出一种生长激素，确定它是一种多，并求得其分子量和氨基酸在激素的N-端和C-端的顺序，这是与哺乳动物的生长激素相似的生长激素。此外，本专利技术者证实本专利技术的生长激素能促进硬骨鱼类的生长。因此，本专利技术已经完成。附图的简要说明图1 表示从硬骨鱼得来的鱼生长激素的紫外光谱。图2 表示以盐酸和丙酮的混合液处理O.keta的脑下线，用碱-->的水溶液抽提处理的脑下线并以交联葡聚糖凝胶G-25分馏柱把脑下线抽提物加以分馏而得来的洗脱图形。图3是SDS＊聚丙烯酰胺电泳图，根据电泳的迁移距离测定了鲑鱼生长激素的分子量。使用标准蛋白质标记器No44223 2 U（BDH化学公司的产品）。分子量为14.3K＊＊、28.6K、42.9K和57.2K的分别相当于单体、二聚物、三聚物和四聚物。以下详细叙述本专利技术。本专利技术与从硬骨鱼得来的鱼生长激素和使用鱼生长激素来促进鱼的生长的方法有关。根据本专利技术用碱的水溶液从属于鲑鳟亚目的鱼的鱼脑下线中抽提出鱼的生长激素。生长激素的理化性质如下：（1）氨基酸组成：如表1所示。＊SDS为Sodium dodecyl sulphate（十二烷基硫酸钠）的缩写-译者＊＊K＝千-译者-->表1 氨基酸的组成（注1）氨基酸 鲑鱼的生长激素 Tilapia鱼的生长激素天冬氨酸 28.0 19.3苏氨酸 6.8 12.0丝氨酸 11.7 21.4谷氨酸 22.5 29.1脯氨酸 3.7 6.8甘氨酸 7.3 7.4丙氨酸 6.6 8.2半胱氨酸 3.3 4.6缬氨酸 10.7 6.0蛋氨酸 2.7 1.2异亮氨酸 10.6 9.0亮氨酸 28.5 27.2酪氨酸 6.8 7.2苯丙氨酸 6.8 6.7色氨酸 -（注2） 1.0组氨酸 4.2 5.0赖氨酸 12.6 8.2精氨酸 8.6 11.0注1 全部数值都是每摩尔的残基数。-->注2 从Tilapia鱼分离出的生长激素，引自Gen.Comp.Endocrin，30，91（1976）。注3 借紫外吸收作分析结果，每摩尔的色氨酸残基数作1来测定。（Ⅱ）在N-端的33个氨基酸和C-端的23个氨基酸的顺序如下：N-端：H2N-异亮氨酸-谷氨酸-天冬酰胺-谷氨酰胺-精氨酸-亮氨酸-苯丙氨酸-天冬酰胺-异亮氨酸-丙氨酸-缬氨酸-丝氨酸-精氨酸-缬氨酸-谷氨酰胺-组氨酸-亮氨酸-组氨酸-亮氨酸-亮氨酸-丙氨酸-谷氨酰胺-赖氨酸-蛋氨酸-苯丙氨酸-天冬酰胺-天冬氨酸-苯丙氨酸-天冬氨酸-甘氨酸-苏氨酸-亮氨酸-亮氨酸-C-端：-蛋氨酸-组氨酸-赖氨酸-缬氨酸-谷氨酸-苏氨酸-酪氨酸-亮氨酸-苏氨酸-缬氨酸-丙氨酸-赖氨酸-半胱氨酸-精氨酸-赖氨酸-丝氨酸-亮氨酸-谷氨酸-丙氨酸-天冬酰胺-半胱氨酸-苏氨酸-亮氨酸-OH（Ⅲ）分子量：大约22，000。（Ⅳ）紫外吸光谱：入量大277毫微米（图1）。（Ⅴ）溶解性：可溶于碱性水溶液中，难溶或不溶于中性和酸性水溶液。（Ⅵ）按碱性或酸性分类：酸性多肽。（Ⅶ）等电点：5.6-5.7。（Ⅷ）物质的颜色和形状：白色粉末。-->（ⅸ）聚丙烯酰胺电泳：单频带的用SDS聚丙烯酰胺电泳（9.9%聚丙烯酰胺/0.1%SDS）检测本专利技术的鲑鱼生长激素的纯度。在110℃，于20%的恒沸点盐酸中使物质水解22小时后用LKB4，400型氨基酸自动分析器分析氨基酸的组成。把470A型顺序仪（AppIiedBiosystemCo.的产品）和高压液相色谱（SpectraPhysicsCo.的产品）联合使用，进行生长激素N-端和C-端上氨基酸顺序的分析。本专利技术的生长激素，与分离多肽的常规方法相似，是用丙酮抽提的方法，从在河里游泳并升上河来的3-4岁的雌性OnCOrhynchus Keta的脑下腺中制得的。例如，把35%的浓盐酸和丙酮的混合溶液（10∶90-90∶10）加到脑下腺中，并用均化器在500-2，000转/分下使脑下腺旋转5-10分钟。加入同样盐酸和丙酮的混合溶液，搅拌混合物，并在冷却到-5至5℃时于10，000-20，000转/分下加以离心分离10-60分钟（以下将同样应用）。除去上层清液，并把50-90%的含水丙酮加进残余物中。搅拌混合物并在冷却下加以离心分离。把生成的残余物在悬浮在水中，用饱和的氢氧化钙水溶液调节悬浮液的PH在9-11之间。搅拌悬浮液并在冷却下加以离心分离。使上层清液渗析掉水并冻干以便得到粉末。使粉末悬浮在水中，用NaOH的水溶液调节悬浮液的PH到5-7之间。用离心分离除去不溶物，并以盐酸调节上层清液的PH到5-6之间。用离心分离回收生成的沉淀。把沉淀溶解在醋酸铵水溶液中（PH8-10，0.05-0.5摩-->尔）并加以交联葡聚糖凝胶柱色谱分离。以同样的醋酸铵水溶液进行饱和和洗脱。合并活性馏份并冻干以得白色粉末。使白色粉末在TSK凝胶ODS-120T柱上（TOyoSoda Manufacturing Co.Ltd的产品）加以高压液相色谱分离以便最后净化。合并活性馏份并冻干，便得到成白色粉末的本专利技术的生长激素。本生长激素的纯度大约为100%。用以下使用霓虹斑鳟鱼（Salmo irideus）的例子中所述的方法测定生长激素的活性。已经发现本专利技术的生长激素能促进硬骨鱼类（Osteichthyes）的生长，并对包括斑鳟鱼和鲑鱼在内的（Iupeiformes的培养是有用的。在腹膜内注射的情况下，在4-7天的期间内，每1克体重注入0.01-0.1微克生长激素。以下例说明本专利技术的一特别具体情况。例子（1）Oncorhynchus Keta的生长激素的抽提和提纯：在这一步中，把50毫升35%浓盐酸和丙酮（1∶28）加到50克3-4岁雌性Oncorhynchus leta的脑下腺中，并用均化器在1，000转/分下使脑下腺旋转10分钟。然后，加入250毫升上述同样的盐酸和丙酮的混合溶本文档来自技高网...
【技术保护点】
制备鱼生长激素方法，特征在于该激素是由硬骨鱼中抽提出来。
【技术特征摘要】
1、制备鱼生长激素方法，特征在于该激素是由硬骨鱼中抽提出来。2、根据权利要求1制备鱼生长激素方法，该激素是从属于鲑鳟亚目的鱼的鱼脑下线中抽提出来的。3、根据权利要求1和2制备鱼生长激素方法，特征在于该激素是一种多肽，具有如下的理化性质：（Ⅰ）氨基酸的组成：如表1中所指出;（Ⅱ）在N-端33个氨基酸的顺序和在C-端23个氨基酸的顺序如下：N-端：N2N-异亮氨酸-谷氨酸-天冬酰胺-谷氨酰胺-精氨酸-亮氨酸-苯丙氨酸-天冬酰胺-异亮氨酸-丙氨酸-缬氨酸-丝氨酸-精氨酸-缬氨酸-谷氨酰胺-组氨酸-亮氨酸-组氨酸-亮氨酸-亮氨酸-丙氨酸-谷氨酰胺-赖氨酸-蛋氨酸-苯丙氨酸-天冬酰胺-天冬氨酸-苯丙氨酸-天冬氨酸-甘氨酸-苏氨酸-亮氨酸-亮氨酸-C-端：-蛋氨酸-组氨酸-赖氨酸-缬氨酸-谷氨酸-苏氨酸-酪氨酸-亮氨酸-苏氨酸-缬氨酸-丙氨酸-赖氨酸-半胱氨酸-精氨酸-赖氨酸-丝氨酸-亮氨酸-谷氨酸-丙氨酸-天冬酰胺-半胱氨酸-苏氨酸-亮氨酸-OH;（Ⅲ）分子量：大约22，000;（Ⅳ）等电点：5.6-5.7;（Ⅴ）可溶于碱性水溶液中，难溶或不溶于中性和酸性水溶液。4、利用激素促进鱼生长...
【专利技术属性】
技术研发人员：川内浩司，山口和夫，白幡公胜，
申请(专利权)人：协和发酵工业株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]
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