一种保护哺乳动物对抗疟疾的疫苗．（*该技术在2006年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
疟疾是常见的重症，虽然多年已有广泛的研究，但却未开发其疫苗例如参见“科学”226卷679页(1984年11月9日)。就实验上而言，哺乳动物包括人类曾以经过光照之裂殖体免疫而保护对抗疟疾病原一疟原虫的感染。Clyde等人Am.J.Trop.Med.Hyg.，24卷397页(1975)及Rieckman等人Bull，WHO，57卷(Supp.1)261页(1979)。及良田等人“科学”207卷71页(1980)报告此种保护作用至少部分经由针对裂殖体表面上的蛋白质一裂殖体周围(CS)蛋白质其抗体所媒介。对抗CS蛋白质诱出的单源抗体可於活体外中和感染能力并於活体内保护动物。CS蛋白质在演化上显然可高度保留於种属内，但各种属间又有相当大差异。已知有四种疟原虫可感染人体镰状、间日、卵圆及四日疟原虫，后二者出现频度远为低。其它科学上感兴趣的种属有伯吉疟原虫(P.berghei)及诺里西疟原虫(P.knowlesi)，而其宿主分别为啮齿类及猴类。诺里西疟虫的CS蛋白质含有12个氨基酸序列的12个衔接重复段。Zavala等人J.Exp.Med.，157卷1947页(1983)报告重复单位为诺里西疟虫的主要免疫原，是基于实验显示对重复单位的单源抗体可阻止抗一裂殖体抗血清接近已溶解的裂殖体蛋白质。Gysin等人J.Exp.Med.，160卷935页(1984)报告代表诺里西疟虫CS蛋白质衔接重复单位合成的24残基肽可中和毒力裂殖体对猴类的感染能力。Colman等人WO84-2922-A(1984年8月2日出版)报告选殖诺里西疟虫CS蛋白质重复单位的部分编号区，及在大肠杆菌体内表现其β-内醯胺酶及β-半孔糖苷酶融合体。Nussenzweig等人美国4，466，917揭示称为P44蛋白质的裂殖体蛋白质及其在大肠杆菌体内的选殖及表现。Enea等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA81卷7520页(1984)报告在西诺疟虫(P.cynomlolgi)CS蛋白质内有类似重复单位结构。Kemp等人WO.84-02917-A揭示镰状疟虫cDNA在大肠杆菌体内之选殖及表现。Dame等人“科学”，225卷593页(1984)报告镰状疟虫CS蛋白质在大肠杆菌体内的选殖及表现。蛋白质描述为包含约412氨基酸，分子量约为44，000;包含41个四肽衔接重复段-系从与针对CS蛋白质诱生的单源抗体结合的重复区衍生而得的合成的7-，11-及15-残基肽。一方面，本专利技术为可赋予哺乳动物对抗镰状疟原虫感染的免疫能力的免疫原多肽，刨含镰状疟虫CS蛋白质4或4个以上衔接重复单位。另一方面，本专利技术为保护人不受镰状疟原虫裂殖体感染的疫苗，包含免疫保护用量的本专利技术多肽及药用合格载剂。附图的简单说明图1a为携有CS蛋白质编码序列的镰状疟虫基因组DNA之一区的部分鉴识内核酸酶切割拼图。图1b为pASl部分鉴识内核酸酶切割拼图。本专利技术的多肽包含4或多个在大肠杆菌体内产生的衔接CS蛋白质重复单位。非CS蛋白质，唯包含CS蛋白质的非重复单位部分。镰状疟虫重复单位为四肽，其序列如下天冬素(asn)-丙氨酸(ala)-asn-脯氨酸(pro)-。本专利技术多肽内，可存在有四肽变化，规定不可对其抗体与镰状疟虫CS蛋白质的反应性有显著不良影响;举例来说，如Dame等人“科学”225卷593页(1984)所揭示者(并入本文以资参照)，天然镰状疟虫CS蛋白质的41四肽重复段中，有37段为asn-ala-asn-pro及4段为asn-缬氨酸(val)-天冬酸(asp)-pro。比较好的是，本专利技术多肽中的四肽重复单位有超过半数为所谓的常见序列-asn-ala-asn-pro。较好的是，本专利技术多肽包含约8重复段(即32个氨基酸)，至多约148重复段;更好的是，多肽包含约16至112重复段。本专利技术多肽可为具有非CS蛋白质重复单位序列的混成体，亦即融合多肽。此种非CS蛋白质重复序列可作为载剂分子而促进免疫原性，及有助於在重组微生物体内选殖及表现。另外，如此额外序列可携带有1个或多个亲和基而亲和其他裂殖体免疫原，其他疟原虫免疫原及/或其他非疟原虫免疫原。本专利技术特别排除其外者为无法以实用量在大肠杆菌体内安定地表现的CS蛋白质，及对镰状疟原虫免疫不需要CS蛋白质。本专利技术各型多肽的特殊具体例例示於本文者有Rtet32多肽，包含至少4个重复段，而有来自pBR322抗四环素(tet R)基因的约32N端氨基酸融合至重复段的C端;Rtet86多肽，包含至少4个重复段，而有tet R基团产物融合至重复段C端;RNSl多肽，包含至少4个重复段，而有227NSl氨基酸融合至重复段C端;NSlR多肽，包含至少4个重复段，而有81NSlN端氨基酸融合至重复段N端;RG多肽，包含至少4个重复段，接著为-甘氨酸残基位在重复段的C端;RLA多肽，包含至少4个重复段，接著为-白氨酸-精氨酸位在重复段C端;RN多肽，包含至少4个重复段，接著为-asn-thr-val-ser-ser位在重复段C端。CS蛋白质重复单位的遣传编码序列可藉已知技术获得。包括合成法，较好，从镰状疟虫藉著逆转录信使RNA而得，例如，由Ellis等人“自然”，302卷，536页(1983)所揭露者，或者直接选殖得自镰状疟原虫基因组DNA的完整基因，例如，Dame等人如前文摘述者而揭露。图中例示CS蛋白质编码区。镰状疟虫及其裂殖体可从受感染的人及蚊而得。已经选殖所有或部份CS蛋白质的编码序列，则编码有所有或部份重复单位的次片段可藉已知技术制得。图1显示CS蛋白质基因内特选有用的鉴识址。较佳为XhoⅡ址。以XhoⅡ切割可释放出16重复段编码序列如下N-asp-pro〔(asn-ala-asn-pro)15(asn-val-asp-pro)1〕nC.式中n为1。使用取向适当的多重衔接XhoⅡ片段，可获得较长重复段，换言之，n大於1。合成技术为咸知，可使用商业DNA合成机而完成;可合成合成的寡核苷酸，具有实质相同的氨酸字码子，并具有相同XhoⅡ端或在各端有不同切割址。此种合成寡核苷酸可与天然64字码子有差异，且可编码有相同氨基酸，或具有较少数目，较好的少於8左右，不同氨基酸的多肽规定对於多肽的免疫保护功效无显著不良影响者。举例来说，合成编码序列编码有常见序列(asn-ala-asn-pro-)n，其中n至少为4的整体编码。多肽的编码序列可插入任何大肠杆菌媒介内，其中有许多为已知且可得。本专利技术多肽於大肠杆菌体内表现位准高-当有鉴於产物不寻常氨基酸组成时，此系出人意表者一约50%天冬素(asn)，25%丙氨酸(ala)及25%脯氨酸(pro)。如下文进一步描述者，已经发现使用一种调节元体可将编码序列表现良好，调节元体包含λ的PL启动子及λ的cⅡ核醣体结合址，如同由质体p A Sl所包含者，描述於Rosenberg等人，Meth，Enzym.，101卷，123页(1983)及Shatzman等人於“基因表现之实验操作”一书，M.Inouye编辑，学术印刷社，纽约，1982.p A Sl携带有p BR322复制起点，安比西林抗药性标记子及一系列得自λ的片段，包括PL，N抗终结功能辨识址(Nut L及Nut R)，本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种保护人体不受镰状疟虫感染的疫苗的制造方法，其特点是该方法包含将具有４或４以上镰状疟虫ＣＳ蛋白质衔接重复单位的多脍与药用合格载剂结合。
【技术特征摘要】
US 1985-2-7 699,116范围内的所有修饰例。权利要求1.一种保护人体不受镰状疟虫感染的疫苗的制造方法，其特点是该方法包含将具有4或4以上镰状疟虫CS蛋白质衔接重复单位的多脍与药用合格载剂结合。2.按照权利要求1所述的方法，其特点是该方法包含将具有16至148衔接重复单位之多肽与药用合格载剂结合。3.按照权利要求1所述的方法，其中该多肽可为Rtet32多肽，RNSl多肽，NSlR多肽，Rtet36多肽...
【专利技术属性】
技术研发人员：W里普利巴卢，米切尔斯图尔特格罗斯，韦恩T霍克匹耶，詹姆斯韦朗西斯扬，
申请(专利权)人：史密丝克莱恩贝克曼公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。