牛的辨别方法、所辨别的牛和辨别牛用试剂盒技术

本发明专利技术提供一种通过蛋白组学分析对参与肉牛的经济性状的蛋白质进行鉴定，并将这些蛋白质作为生物标记来对具备有用经济性状的牛个体进行辨别的牛个体的辨别方法和所使用的牛个体辨别用试剂盒。本发明专利技术牛个体的辨别方法，包括：（１）采集牛的体组织的采集工序；（２）从所采集的体组织提取全蛋白质的提取工序；（３）检测所提取的全蛋白质中所含的膜联蛋白Ａ５的野生型蛋白质、膜联蛋白Ａ５的野生型蛋白质的同工型、膜联蛋白Ａ５的野生型蛋白质或其同工型的修饰蛋白质的检测工序；以及（４）基于所检测的膜联蛋白Ａ５的种类，对牛的平均分割胴体重量是否变大进行辨别的辨别工序。此外，在膜联蛋白Ａ５的野生型蛋白质、其同工型以及它们的修饰蛋白质的检测中，利用了双向电泳和抗原抗体反应。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及对分割胴体重量(Carcass weight)等经济性状优良的牛进行辨别的 牛的辨别方法、所辨别的牛和用于该方法的辨别牛用试剂盒。
技术介绍
目前，对于肉牛、特别是作为日本特有的专门肉食种类的黑毛和种牛的育种改良， 是基于统计遗传学的育种改良方法来进行的，所述统计遗传学育种改良方法，是以基于迄 今为止所积累的表现型信息和血统信息的统计遗传学分析为平台，针对牛的遗传能力进行 推测的方法。并且，所述育种改良方法的确立，对黑毛和种的遗传能力的提高有极大的贡 献。但是，该统计遗传学的育种改良方法，是针对肉牛群体所具有的优良基因型为后 代群体所继承的概率(probability :p值)进行推测的方法，并不能掌握各个肉牛所具有的 脂肪混杂肉质、分割胴体重量、里脊肉面积(rib-eyearea)、五花肉厚度等与经济性状相关 的遗传性信息。此外，经济性状不仅受遗传因素的影响，多数情况下还受环境的影响，因此，根据 遗传因素难以严格地选拔优良的个体。进而，基于统计遗传学方法的育种改良方法，必须经 过牛的交配、催肥等过程，因此，育种耗费极大的成本和时间。因此，从20世纪80年代后半期开始，采用利用基因的育种方法，具体而言，进行数 量性状基因座(QTL)分析，所述数量性状基因座(QTL)分析是明确参与肉牛的经济性状等 数量性状的基因数以及它们在连锁图上的位置。人们期待该分析方法在鉴定与肉牛经济性 状有关的责任基因(responsiblegene，責任遺伝子)方面带来划时代的成果，并着眼于利 用牛DNA标记的育种方法的开发推进其研究(参照非专利文献1和2)。但是，迄今为止，该方法虽然有助于claudin-16缺乏症(夕口一 fM > 16欠損 症)等恶性遗传病的病因基因(原因遺伝子)的鉴定方法，但尚没有达到确立对参与经济 性状的责任基因进行鉴定、并利用所述基因的肉牛育种改良方法的程度。此外，最近，在经济性状的表现型中，不仅涉及责任基因，而且对其它基因的表达 进行调节的基因、DNA的甲基化等的表观遗传修饰也参与在其中，因此，在进行分析时，也必 须考虑到这方面。进而，对于QTL分析而言，难以选择适宜的交配亲本，必须经过品系选育 的过程，因此，育种与统计遗传学方法相同地，需要耗费极大的成本和时间。另一方面，目前的生命科学整体的研究潮流，关注点集中在基因组研究的下一个 阶段的研究(后基因组研究)上，具体而言，集中在利用转录物组学分析、蛋白组学分析、代 谢组分析等分析方法的研究中，其中，针对网罗性/系统性地分析蛋白质功能及其关连性 的蛋白组学分析令人瞩目，其研究开发得到推进。作为该理由，可以举出作为基因的最终产物的蛋白质是直接发挥生理学功能的 分子，根据其表达量和分子修饰改变的蛋白质，以细胞、组织、个体的等级直接参与在生理 功能中。此外，作为其它理由，可列举根据蛋白组学分析，不需要交配/饲育和品系选育等3需要时间和成本的过程。蛋白组学分析广泛应用于各领域中，尤其在医学领域中的研究得以推进。例如，在 与基因的变异和病态之间的因果关系较少的基因病患以外的病患方面，细胞内流程的蛋白 质功能的变化是引起发病的直接导火索，因此，目前正在活跃地进行通过蛋白组学分析捕 捉因病患而变化的蛋白质，并用于诊断有无病患和病态的生物标记的鉴定和开发(参照专 利文献1 4和非专利文献3)。但是，蛋白组学分析在畜产领域方面的应用是非常落后，目前尚未实现参与肉牛 经济性状的蛋白质的鉴定，以及利用这些蛋白质对具有有用的经济性状的牛进行辨别。现有技术文献专利文献1 日本特开2006-308533号公报专利文献2 日本特开2007-93597号公报专利文献3 日本特开2007-139742号公报专利文献4 日本特开2007-523346号公报非专利文献1 动物遗传研究所年报(第11号)、社团法人畜产技术协会附属动物 遗传研究所发行、2004年非专利文献2 肉用牛遗传资源活用体制整备事业报告书、社团法人畜产技术协 会发行、2005年非专利文献3 《病患蛋白组学的最前线(疾患口〒才、々夕7 最前茅泉)》、乂 ^力^ K勺株式会社发行、2005年
技术实现思路
因此，本专利技术的课题在于，提供根据蛋白组学分析对参与肉牛的经济性状的蛋 白质进行鉴定，并将这些蛋白质作为生物标记对具有有用经济性状的牛进行个别辨别的方 法，根据该方法所辨别的牛以及所使用的辨别牛用试剂盒。专利技术人等，为了寻找能够作为与牛的经济性状相关的生物标记利用的蛋白质，合 并使用了基于双向电泳、质量分析、统计学方法的数据分析，对牛的白色脂肪组织所含的蛋 白质和牛的经济性状之间的相关性进行了网罗性的调查。其结果，发现了特定蛋白质的表 达与分割胴体重量之间存在显著的相关性，由此完成了本专利技术。即本专利技术第1实施方式的牛的辨别方法，包括(1)采集牛的体组织的采集工序； (2)从所采集的体组织提取全蛋白质的提取工序；(3)检测所提取的全蛋白质中所含的膜 联蛋白A5的野生型蛋白质、膜联蛋白A5的野生型蛋白质的同工型、膜联蛋白A5的野生型 蛋白质或其同工型的修饰蛋白质的检测工序；以及⑷根据在检测工序中仅检测出膜联蛋 白A5蛋白质的野生型蛋白质、其同工型以及来自它们的修饰蛋白质中的任一者，或者检测 出A5蛋白质的野生型蛋白质、其同工型以及来自它们的修饰蛋白质中的两者，对采集了体 组织的牛的平均分割胴体重量是否变大进行辨别的辨别工序。在此，所谓膜联蛋白A5 (也称作Annexin A5、AnnexinV或ANX5)，属于作为钙/磷 脂质结合蛋白质的膜联蛋白家族，已知是一种与细胞伸展促进作用、性腺刺激激素产生促 进作用、细胞凋亡抑制作用等多种生理现象相关的蛋白质。此外，所谓膜联蛋白A5的野生型蛋白质，是一种由序列号1所述的氨基酸序列所构成的蛋白质(CaBP33)。另外，所谓膜联蛋白A5的野生型蛋白质的同工型，与野生型蛋白 质相比，并不是在功能上完全相同，在氨基酸类序列上也稍有不同，具体而言，是由序列号2 所述的氨基酸序列所构成的蛋白质(CaBP37)。另外，所谓修饰蛋白质，是指接受糖链修饰、 磷酸化、乙酰化、甲基化等的化学修饰的蛋白质。本专利技术的第2实施方式的牛的辨别方法，是在上述第1实施方式所述的牛的辨别 方法中的检测工序中，通过电泳检测膜联蛋白A5的野生型蛋白质、膜联蛋白A5的野生型蛋 白质的同工型、膜联蛋白A5的野生型蛋白质或其同工型的修饰蛋白质。本专利技术的第3实施方式的牛的辨别方法，是在上述第1实施方式所述的牛的辨别 方法的检测工序中，通过抗原抗体反应检测膜联蛋白A5的野生型蛋白质、膜联蛋白A5的野 生型蛋白质的同工型、膜联蛋白A5的野生型蛋白质或其同工型的修饰蛋白质。本专利技术的第4实施方式涉及一种牛和分割胴体，是根据上述第1 第3实施方式 所述的牛的辨别方法所辨别的牛。此外，第5实施方式涉及一种牛，是上述第4实施方式所 述的牛的后代或其克隆牛。另外，第6实施方式涉及一种分割胴体，是第4实施方式或第5 实施方式中任一项所述的牛的分割胴体。本专利技术的第7实施方式涉及一种辨别牛用试剂盒，其包含与膜联蛋白A5的野生 型蛋白质及其修饰蛋白质的任一种进行特异性结合的抗体；以及与膜联蛋白A5的野生型 蛋白质的同工型及其修饰本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种牛的辨别方法，包括：（１）采集牛的体组织的采集工序；（２）从所采集的体组织提取全蛋白质的提取工序；（３）检测所提取的全蛋白质中所含的膜联蛋白Ａ５的野生型蛋白质、膜联蛋白Ａ５的野生型蛋白质的同工型、膜联蛋白Ａ５的野生型蛋白质或其同工型的修饰蛋白质的检测工序；以及（４）根据在检测工序中仅检测出膜联蛋白Ａ５蛋白质的野生型蛋白质、其同工型以及来自它们的修饰蛋白质中的任一者，或者检测出Ａ５蛋白质的野生型蛋白质、其同工型以及来自它们的修饰蛋白质中的两者，来对采集了体组织的牛的平均分割胴体重量是否变大进行辨别的辨别工序。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：松本和也，森本康一，池上春香，永井宏平，
申请(专利权)人：学校法人近畿大学，独立行政法人科学技术振兴机构，
类型：发明
国别省市：JP[日本]