大分子内质网的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种含有通过含有一种或多种可聚磷脂，胆甾醇和一种或多种可聚脂肪酸的混合物的聚合作用而得到的聚合物的大分子内质网。其中表面电荷被固定为阴性的大分子内质网可在工业领域或医药领域中用作药物，酶，血红蛋白等的载体。（*该技术在2010年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种大分子内质网，其中表面电荷被固定为阴性。有可能用本专利技术的大分子内质网作为工业领域或医药领域中的药物，酶，血红蛋白等的载体。有许多有关试图通过将有用的物质如药物和酶装入小胶囊中而增强其有效性的报道。在起始的试验中，采用合成的大分子化合物如聚苯乙烯和尼龙作为膜材料。然而，由于这些材料有毒并因其粒度大而引起血栓，所以不能使用。最近，注意到使用由天然磷脂制成的细小的微囊体(内质网)作为毒性小的膜材料，特别是作为药物载体。可根据需要将微囊体的颗粒度调节到0.02μm至几μm。从而通过适当颗粒度的确定可避免血栓形成一类的问题。但是，因为内质网在体内理化性质不稳定并易于分解，所以存在其既不具有贮存稳定性也不保留在血液中的问题。另外，在哺乳动物体内携带氧气的血红蛋白可用作携带、贮存或吸收氧气剂。特别是，它常被用作携带氧气的液体材料。在机体内，红血细胞中含有血红蛋白。与之相仿，报道了一种在由双层膜组成的内质网中含有血红蛋白水溶液的氧气携带者(ArbingFrankMiller等人，日本专利公告60-26092号;C.AnthonyHunt，日本专利公告58-183625号;Suzuki等人，日本专利公告62-178521号)。所有含有血红蛋白的内质网都可被用作采用天然或合成不可聚脂质或脂质混合物制成的膜材料。如上所述，经广泛地检验这种内质网不但可用作血红蛋白水溶液的载体而且可用作医药用品的载体。由于这些内质网可由天然化合物制得，所以很安全。然而，这些内质网不能长时间保存，其理化性质不稳定并易于分解。特别是，问题在于它们不能保持在血液中。因此，对于如何使内质网稳定进行了认真研究。例如，作为一种使内质网稳定的方法，报道了一种用可聚磷脂(有许多磷脂酰胆碱类型的衍生物)聚合脂质双分子膜的方法(H.Ringsdorf等人，AngewandteChemieInternationalEditionEnglish，vol.20，page305(1981)，及其它文献)。在这一方法中，试图通过聚合作用使膜具有物理稳定性。有一则报道，其中在血红蛋白水溶液包入由这些可聚磷脂之一(一种以二炔基作为可聚残基基团的磷脂酰胆碱衍生物)和胆甾醇得到的内质网中之后，使内质网聚合得到含有血红蛋白的大分子内质网(J.A.Hayward等人，PCTWO85/04326)。然而，为使微囊体在活体内，特别是在血液中稳定，必须维持适当的脂质体的Z电势和保持表面电荷阴性，从而使微囊体与生物细胞和成分之间的相互作用降低至最小。为此，对于普通(非聚合)内质网和上述大分子内质网，已使用了带有负电荷的非聚合脂质，例如，不可聚脂肪酸，磷脂酸，联十六烷基磷酸，磷脂酰丝氨酸。但是在血液中，这些成分易于通过活体内的一个成分如高密度脂蛋白(HDL)从膜中提取，因此这些微囊体不够稳定。本专利技术的目的在于提供一种在囊膜表面带有负电荷的稳定的大分子内质网，特别是，其中参与聚合作用的负电成分通过共价键固定于膜上的大分子内质网。即，本专利技术的大分子内质网包括一种通过含有一种或多种可聚磷脂，胆甾醇和一种或多种可聚脂肪酸的混合物的聚合作用而得到的聚合物。作为可聚磷脂，可以使用除常规磷脂胆碱以外的具有可聚基团的磷脂。当使用阴性可聚磷脂时，不必参与与带有负电荷的成分可聚脂肪酸的聚合反应。因此，本专利技术的重要性在于使用带有中性电荷和可聚基团的磷脂(通常为磷脂酰胆碱衍生物)。作为可聚脂肪酸，可以使用任何具有可聚合性的化合物，优选具有12或更多个碳原子的脂肪酸。考虑到囊裹血红蛋白的效率，可聚磷脂与可聚脂肪酸的克分子比为6∶1-2∶1较好，为5∶1-3∶1更好。可聚磷脂与胆甾醇的克分子比为1∶2-3∶2较好，为3∶4-4∶3更好。此外，考虑到血红蛋白的囊裹效率，应选择可聚磷脂和可聚脂肪酸与胆甾醇的组合。例如，由下式(Ⅰ)或(Ⅱ)表示的可聚磷脂和由下式(Ⅲ)表示的可聚脂肪酸的组合。 其中n为12.10，8或6的整数。可用常规方法(G.Gregoriades.“LiposomeTechnology”vol.1，C.R.C.Press(1983)，etc.)生产包括可聚磷脂，可聚脂肪酸和胆甾醇的混合物的内质网。例如，向可聚磷脂，可聚脂肪酸和胆甾醇于苯的混合物的冻干粉末中加入水，缓冲剂，等渗生理盐水(pH5-9，最好为6-8)等。在惰性气体(氮气，氩气，一氧化碳等)条件下，温度低于0°-60℃，通过超声波(探测器类型或浴器类型的超声振荡器)处理混合物，得到内质网分散物。另外，向所述粉末混合物中，加入水，缓冲剂和等渗生理盐水并在5－37℃下，用voltex混合器处理混合物5－60分钟得到多层内质网(粒度～10μm)。可将各种药物，酶，蛋白质等包入内质网中。例如，可用下述方法将血红蛋白包入内质网中。众所周知，血红蛋白溶液可含有足够量的还原剂如烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(还原型)，抗坏血酸等以防止高铁血红蛋白含量的增加和含有足够量的血红蛋白氧气结合亲合力调节剂如2.3-二磷酸甘油酸，肌醇六磷酸等以调节包囊血红蛋白的氧气亲合力。将浓血红蛋白水溶液(血红蛋白浓度为10－50wt%,最好为15－35wt%)加到所述脂质混合物中并在惰性气体(氮气，氩气或一氧化碳气)，5－37℃条件下，用Voltex混合器处理5－60分钟，得到多层内质网(粒度～10μm)的溶液，其中包有血红蛋白。使包有血红蛋白的多层内质网溶液通过多孔聚碳酸酯膜(孔径8，5，3，2，1，0.6,0.4μm等)，然后在适宜的超滤柱(例如，Pharmacia精细化学公司生产的SepharoseCL-4B)上通过凝胶渗透色谱或用超滤膜(例如，日本Asahi医药公司和生产的AC-1760型空心纤维)(等渗生理盐水(pH7.4)作为介质)纯化该溶液，除去未包入多层内质网中的血红蛋白，同时，浓缩血红蛋白内质网溶液，得到所需内质网(粒度；0.1-0.6μm)分散物。此外，将等渗生理盐水加到所述冻干脂质混合物中，在惰性气体(氮气，氨气等)，0－60℃条件下，用超声波处理所得溶液，制备含有单层内质网(粒度20-60μm)的分散物。将浓血红蛋白溶液加到分散物中之后，经冰冻和融化(-78℃至室温)处理该溶液，得到内质网中包有血红蛋白水溶液的溶液。使所得溶液通过多孔聚碳酸酯膜(孔径8，5，3，2，1，0.6，0.4μm等)之后，用适宜的超滤膜(例如，日本Asahi医药公司生产的AC-1760型空心纤维)(用等渗生理盐水(pH7.4)作为介质)洗涤该溶液，除去未包入内质网的血红蛋白，同时，浓缩血红蛋白内质网溶液，得到所需血红蛋白内质网溶液(粒度0.1-0.6μm)分散物。为了通过内质网的聚合作用制备大分子内质网，可通过在惰性气体(氮气，氩气或一氧化碳气)条件下紫外线或γ射线的辐射，或通过加入适宜的引发剂进行聚合。当包含在内质网中的物质(药物，酶，蛋白质等)对热不稳定时，应有效地使用低温引发剂。例如，可在偶氮二(2-脒基丙烷)二盐酸盐存在下，于低温(～10℃)下，经可见光的辐射得到一种聚合物。此外，可在低温下，采用NHSO3/K2S2O8氧化还原引发剂得到一种聚合物。任何聚合方法都可在本专利技术范围内不受限制地使用。可通过紫外光谱特征吸收带强度减弱(例如对于化合物(Ⅰ)，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种大分子内质网，它含有通过含有一种或多种可聚磷脂，胆甾醇和一种或多种可聚脂肪酸的混合物的聚合作用而得到的聚合物。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：长谷川悦雄，武真司，大野弘幸，西出宏之，土田英俊，
申请(专利权)人：日本油脂株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]