一种分离脐带间充质干细胞的方法技术

本发明专利技术属于细胞生物学领域，涉及一种快速充分获得脐带间充质干细胞的方法。本发明专利技术将在无菌情况下获得的脐带去除动、静脉，制成组织碎块，再加入含有青霉素和链霉素的磷酸盐缓冲液清洗，离心弃上清；随后用胶原酶ＮＢ４和透明质酸酶消化脐带碎块，并在乙二胺四乙酸磷酸盐溶液中置于摇床振荡；用１００－２００目滤网过滤，收集滤过液；最后以６００ｇ离心５－１０分钟，弃去上清液，用ＤＭＥＭ培养基清洗２－３次，即获得脐带间充质干细胞。本发明专利技术可以在短时间内获得大量脐带间充质干细胞。且经过实验证实，获得的脐带干细胞表达干细胞的特异性标记，能够向脂肪、骨、软骨等诱导分化。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种分离脐带间充质干细胞的方法，其特征是，该方法包括下述步骤：（１）将在无菌情况下获得的脐带去除动、静脉，制成组织碎块，再加入含有青霉素和链霉素的磷酸盐缓冲液清洗，离心弃上清；（２）将步骤（１）中获得的脐带碎块，加入２－４倍于碎块量体积的质量／体积比为０．１－０．２％胶原酶ＮＢ４消化，消化温度为３７℃，在摇床中振荡消化２－３小时；得混合物１；（３）将步骤（２）得到的混合物１中，加入其体积１／４－１／２量的质量体积比为０．１－０．２％的透明质酸酶，３７℃消化１０－３０分钟；得混合物２。（４）将步骤（３）得到的混合物２中，加入等体积的质量体积比为０．０１－０．０２％乙二胺四乙酸磷酸盐溶液，３７℃摇床振荡１０－２０分钟；得混合物３。（５）将步骤（４）得到的混合物３，用１００－２００目滤网过滤，收集滤过液。（６）将步骤（５）收集的滤过液以６００ｇ离心５－１０分钟，弃去上清液，用ＤＭＥＭ培养基清洗２－３次，即获得脐带间充质干细胞。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：祝加学，沈尊理，秦金保，沈华，张兆峰，
申请(专利权)人：上海市第一人民医院，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]