粒细胞-巨**细胞-集落刺激因子作为疫苗佐剂的用途制造技术

本发明专利技术是一种提高哺乳动物对疫苗免疫应答的方法，该方法包括给予哺乳动物有效量的ＧＭ－ＣＳＦ以及疫苗。本发明专利技术还提供了含有有效量的ＧＭ－ＣＳＦ，天然的、合成的或重组的抗原和适于药用载体的药用组合物。（*该技术在2013年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及粒细胞-巨噬细胞-集落刺激因子(GM-CSF)，特别是人GM-CSF作为疫苗佐剂的用途。自动免疫接种是对动物使用抗原以便在该动物体内产生免疫应答。抗微生物的疫苗是一种抗原制剂，将其接种到非免疫个体会产生对微生物的自动免疫但不会致病。特异性和记忆力这两个适应性免疫系统的关键因素在接种中被利用，因为适应性免疫系统对第二次接触到的抗原有更强的应答。该第二次免疫应答较第一次应答出现得更快并更有效。研制疫苗的原则是用使一种微生物或其毒素(天然抗原)变成无害的但不丧失抗原性的方法改变它们。另外，可通过重组方法或合成化学产生所说微生物的抗原多肽来制得有效的疫苗。自动免疫接种中经常遇到的一个问题是在疫苗中使用的抗原没有足够的免疫原性，不能将抗体滴度提高到足够高的水平以提供针对后续激发的保护作用，或者不能在整个持续的期间内维持提高抗体水平的能力。另一个问题是所用疫苗可能不足以诱导细胞介导的免疫(它是抗细菌和病毒感染的初次免疫防御)。还有一个问题是个别病人可能是免疫抑制的。为了获得较强的体液和/或细胞应答，疫苗通常以一种含有佐剂的制剂形式给药。佐剂是非特异性地提高对抗原的应答或者引起在没有佐剂时对抗原无应答的个体对抗原应答的物质。佐剂通常与抗原一起给药，但也可以在抗原给药之前或之后给药。对哺乳动物接种合适的佐剂包括但不限于佐剂65(含有花生油、二缩甘露醇单油酸酯和单硬脂酸铝);福氏完全或不完全佐剂;矿物胶例如氢氧化铝、磷酸铝和矾;表面活性剂例如十六烷基胺、十八烷基胺、溶血卵磷脂、二甲基双十八烷基-溴化胺、N，N-双十八烷基-N′，N′-双(2-羟甲基)丙烯二胺、甲氧基十六烷基甘油和普卢兰尼克多元醇(pluronicpolyols);聚阴离子例如吡喃、葡聚糖硫酸盐、polyIC、聚丙烯酸和carbopol;肽类例如胞壁酰基二肽、二甲基甘氨酸和tuftsin;和油乳状液。抗原也可以掺入到脂质体或其它微载体中给药。粒细胞-巨噬细胞-集落刺激因子(GM-CSF)被惊奇地发现是一种有效的疫苗佐剂。因而，本专利技术提供了一种提高哺乳动物对疫苗的免疫应答的方法，该方法包括给予需要接种的哺乳动物有效量的GM-CSF以及疫苗。较好的是，被治疗的哺乳动物是人，所使用的GM-CSF是人的异型的一种。GM-CSF较好是在疫苗给药之前或之后1-14天以每公斤体重约0.1-100微克(μg)的量给药。本专利技术还提供了含有有效量的GM-CSF，天然的、合成的或重组的抗原，和适于药用的载体的药用组合物。本专利技术也要求了一种增强哺乳动物对疫苗中抗原的致免疫应答的试剂盒，该试剂盒包括具有其中含有GM-CSF的药用组合物的第一容器，和具有其中含有疫苗的药用组合物的第二容器。本申请引用参考资料的
技术实现思路
就其整体一并引入本文作为参考。按照本专利技术，我们惊奇地发现在哺乳动物中，尤其是在人中对疫苗的免疫应答可有效地被使用有效量的GM-CSF以及疫苗来提高。本文使用的“以及”一词是指GM-CSF的给药是与疫苗的给药同时，或在其之前或之后。本文使用的“GM-CSF”是指一种蛋白质，该蛋白质(a)具有与Lee等人在Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.82∶4360(1985)中描述的成熟(即缺乏信号肽)人GM-CSF基本相同的氨基酸序列和(b)具有与天然GM-CSF相同的生物学活性。氨基酸序列基本相同是指序列相同或由一个或多个氨基酸改变(缺失、增加、取代)引起的不同，但这种改变基本上不降低生物学活性。在人的GM-CSFs中，核苷酸序列和氨基酸异质性已被观察到。例如，就氨基酸序列的N-未端位置来说，苏氨酸和异亮氨酸两者都在人GM-CSF的100位被观察到。Schrims等人也公开了一种人GM-CSF变异体，其中在80位的甲硫氨酸残基被异亮氯酸残基取代。其它种系例如小鼠、长臂猿(其中仅含有3个甲硫氨酸)和鼠的GM-CSF也为该专利技术所关注。如本领域所公知，由原核生物表达系统产生的重组GM-CSFs也可以含有一个额外的N-末端甲酰氨酸残基。任何符合基本相同要求的GM-CSF均包括在本专利技术内，无论它是糖基化的(即源于天然的或源于真核生物表达系统的)或是非糖基化的(即源于原核生物表达系统或化学合成的)。用于本专利技术的GM-CSF可从天然来源获得(美国专利No.4，438，032;Gasson等，同上;Burgess同上;Sparrow等，同上;Wu等，同上)。具有与天然产生的GM-CSF基本相同氨基酸序列和活性的GM-CSF可以用于本专利技术，编码GM-CSF的互补DNA(cDNAs)已被许多实验室克隆和测序，例如Gough等，Nature，309∶763(1984)(小鼠);Lee等，Proc.Natl.Acad.Sci.usA82∶4360(1985)(人);Wong等，Science，228∶810(1985)(人和长臂猿);Cantrell等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，82∶6250(1985)(人)Gough等，Nature，309∶763(1984)(小鼠);Wong等，Science，228∶810(1985)(人和长臂猿);Cantrell等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，82∶6250(1985)(人)。GM-CSF也可购自Immunex，Inc.ofSeattle，Washington、Schering-PloughCorporatinofKenilworth，NewJersey和GenzymeCorporationofBoston，MA.佐剂活性由用在原本对疫苗根本不产生应答的个体中产生了免疫应答而使免疫-介导的保护作用的明显增强来证明，体液免疫增强的典型证明是针对抗原产生的抗体的滴度明显增加。本专利技术提供GM-CSF以及疫苗给药的方法，具有如下优点待给疫苗中的总抗原量可被减少，因为在GM-CSF存在下较少的抗原可诱发至少与疫苗正常量给药所达到的水平相当的免疫应答。因为按照本专利技术给予GM-CSF每次接种需要较少的抗原，所以出现与现行所用的某些疫苗相关的不期望的副作用的可能性会减小。对接种几乎无应答个体的某种类型的免疫应答会被GM-CSF连同疫苗给药所增强。将从本专利技术的方法受益的个体类别包括(1)具有削弱的免疫应答性的那些类别，(2)一般表现正常但对某些疫苗无应答的那些个体以及(3)正接受免疫抑制治疗例如放疗的个体。因此，我们发现了有关以下内容的有效方法(1)提高在哺乳动物中提高对存在于疫苗中抗原的有效的第一次免疫应答，(2)在哺乳动物中提高接触疫苗中抗原的抗体的有效水平，和(3)在哺乳动物中提高对存在于疫苗中抗原的第一次免疫应答，其中所说哺乳动物在不给予GM-CSF时的免疫应答不会足够强或足够快地预防疾病。按照本专利技术，所研究使用的疫苗包括但不限于用于自动免疫接种的细菌疫苗、类毒素疫苗(灭活的毒素)和病毒疫苗或其混合物。参见例如在Remington′sPharmaceuticalSciences14thEdition1990MackPublishingCo.P1426-1441中的题为“ImmunizingAgents”的第75章、由U.S.FoodandDrugAdministration认可的并本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种提高哺乳动物对疫苗的免疫应答的方法，该方法包括给予需要接种的哺乳动物有效量的ＧＭ－ＣＳＦ以及疫苗。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：EM邦尼姆，E施图帕克，IA乔德里，
申请(专利权)人：先灵公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]