治疗雄性哺乳动物不育和增强其致育能力制造技术

本发明专利技术涉及通过施用致育增强量的致育增强胸腺素肽或致育增强抗胸腺素抗体治疗雄性哺乳动物的不育。在较佳实施方案中，治疗包括施用胸腺素α＃－［１］或抗胸腺素α＃－［１］或胸腺素β＃－［４］的抗体。（*该技术在2013年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及治疗雄性哺乳动物不育的方法，特别是，本专利技术涉及利用某些胸腺素多肽和抗体以治疗雄性不育。胸腺包含有在身体的免疫和内分泌体内平衡中(参见Bese-dovsky.et.al Nature249356-361(1974))。目前，胸腺对哺乳动物中免疫能力的发育和衰老的重要性，一般已得到公认。胸腺的各种不同因子公认可调节能依次造成自发和实验诱导的自身免疫性疾病和改变妊娠期免疫应答的性类固醇含量(参见Oates，et al Trends Pharmacol Sci 5347(1984))。已由胸腺或其提取物中分离并表征了某些具有类激素活性的体液因素(参见例如Goldstein，et al.Proc，Natl Acad Sci，74725-729(1977))。已分离的因素包括前胸腺素-α(Pro Tα)，胸腺素-α1(Tα1)和胸腺素-β4(Tβ4)。Tα1和Tβ4已被定序和合成。例如在美国专利No.4079127(Goldstein et al)中示出了Tα1的顺序。美国专利4297276(Goldstein，et al.)中提供了Tβ4的顺序。已报导了在人体精液和人体滤泡液中存在Tα1(参见Naz et al，Int.J.Fertil 32375(1987)，结合入本文参考)。Naz等人报导了在精液的Tα1量和精子数以及精液体积之间存在相关性并且该值在具有缺陷性精子功能的男性中显著地较低。受精是一种需要在与卵质膜融合前使精子经受一连串偶然事件的复杂过程。这一连串偶然事件包括与透明带结合的精子的获得能力、顶体反应，以及穿入透明带(全部如Nazetal.Cur-rentOpin.Immunol，2748-751(1990)所述)。获得能力是哺乳动物精子细胞在其能使卵细胞受精前必须经受的一种生理过程。不育对大部分居民来说是一个麻烦问题。累积数据表明，在美国四对想要有孩子的配偶中多达一对对受胎一个孩子具有困难。近年来，已开发了一系列技术，如人工授精、配子的显微操作以及试管受精，旨在克服某些问题的原因。然而，很多这些技术相当昂贵，且成功率不高。因此，对可用于治疗不育的组合物和方法存在实际的需要。本专利技术的一个目的是提供治疗雄性哺乳动物不育的组合物和方法。更确切地，本专利技术的一个目的是为由缺陷性精子功能引起的雄性哺乳动物的不育提供治疗。通过以致育增强量给用致育增强胸腺素肽(如Tα1)，或致育增强抗胸腺素抗体(如一种抗Tα1或抗Tβ4抗体)完成了本专利技术的这一和其他目的。胸腺素肽或抗胸腺素抗体可通过收集来自不育雄性精液中的精子并用致育增强胸腺素肽或抗胸腺素抗体将其培育经足以增强精子致育能力的时间周期而离体给用。然后洗涤精子并在可使卵受精的条件下与卵一起培育。用另一种方法，致育增强胸腺素可以足以增强精子致育能力的量体内给用。本专利技术的一个实施方案涉及使用致育增强胸腺素肽以治疗不育雄性哺乳动物。本文所用的“致育增强胸腺素肽”是指增强精子使卵受精能力的胸腺素肽。精子使卵受精的能力，例如可通过增强精子的获得能力或通过增强精子的顶体反应而得到改善并可由穿入卵的精子的增加而被证实。这些胸腺素多肽包括Tα1和生物活性类似物及其片段。胸腺素多肽可以是天然分离的，重组体制得的或合成的。用胸腺素分子治疗既可离体也可在体内进行。对于离体治疗来说，可将胸腺素肽加入由不育雄性哺乳动物精液中收集的精子中并培育经足以提高精子受精能力的时间周期，通常约5-10小时。培育后，可洗涤精子试样并与分离的卵一起培育。培育可按已知技术离体或在体内进行。另一方面，胸腺素肽也可在体内给用。在一个实施方案中，可以足以提高精液中的胸腺素量和其精子受精能力的一系列注射液对不育雄性给用胸腺素。或用另一方法，可对雌性哺乳动物给用胸腺素，以便在雌性阴道中提供胸腺素，然后它与进入阴道的精子作用并提高精子的受精能力。例如，可注射胸腺素肽，在血流中的胸腺素可穿过膜进入阴道并从而可实现与精子的反应。要不可将胸腺配制成插入雌性阴道的缓慢释放的胶囊。胶囊缓慢地释放出胸腺素，然后胸腺素可与进入阴道的精子细胞反应以增强精子的受精能力。离体或体内给用的较佳致育增强胸腺素肽包括Tα1或生物活性类似物或其片段。Tα1是本领域中普通技术人员所公知的并可由例如Bethesda，MD的Alpha 1 Biomedicals，Inc购得。美国专利No.4079127中公开了Tα1的结构。本文所用的Tα1将包括具有美国专利No.4079127中所公开的Tα1结构的肽或如美国专利4612365中所公开的那些生物活性类似物或该分子的片段。较佳的是，这些片段为4-18氨基酸长度，包括其保持胸腺素活性的盐类。在本专利技术的如下所述的另一实施方案中，致育增强抗胸腺素抗体为离体给药以治疗雄性哺乳动物的不育。本文所用的“致育增强抗胸腺素抗体”是指抗提高精子受精能力的胸腺素肽的多克隆或单克隆抗体。胸腺素肽可以是天然的，重组体或合成的并且包括全长肽和生物活性类似物或其片段。致育增强抗体包括抗Tα1抗体和抗Tβ4抗体。如上所指出的，在本专利技术的一个方法中，由不育雄性哺乳动物的精液中收集精子并在与卵一起培育前用致育增强胸腺素肽或致育增强抗胸腺素抗体处理。收集精子的方法是本领域普通技术人员公知的并且本专利技术并不是针对这些方法的。较佳的是，将精子液化并收集向上游动的精子群体。较佳的是，在37℃加热15-30分钟时发生液化。这一方法公开在Nat et al.，J.Cell Sci.，99157-165(1991)中。由向上游动的精子群体中收集的精子细胞形成精子悬浮体，该悬浮体被洗涤。合适的悬浮和洗涤工序的介质包括Biggers、Witten和Wittingham(“BWW”)介质和Ham’sF-10介质(由Gibco，N.Y.得到)。较佳的是用牛血清清蛋白(“BSA”)补充介质。尽管可使用其他的补充，但1%补充物已足够。试样中精子浓度可按需要调节。通常，合适的浓度范围为约5-约10×106游动精子/每毫升介质。然后用致育增强胸腺素肽培育精子。较佳的是在二氧化碳增强气氛下于约37℃进行培育。已测得较佳的气氛含有95%空气和5%二氧化碳。培育时间可变化。然而通常培育时间范围为约5-约10小时，较佳为约5-约8小时，这对能产生获得能力已足够。加入到含精子试样中的胸腺素量也可以改变。通过本领域的普遍技术人员在阅读了本专利技术的描述后可确定有效浓度。通常，浓度范围为约0.05-约10微克/100微升精子悬浮体。较佳的是，胸腺素浓度范围为约0.05-约0.5微克/100微升精子悬浮体。根据为获得精子所需的时间量，本领域的普通技术人员可作出对适合量的确定。理想的是，添加足量的胸腺素以使精子能在约5-10小时内获得。在培育周期后，较佳的是用补充有1%BSA的介质洗涤精子。在这时，精子立即与卵母细胞一起培育。既可离体通过人工授精或在体内进行接触。因而，可由雌性分离出卵并在进行再植入术之前用处理过的精子受精。另一方面，可在体内用卵培育胸腺素处理过的精子。两种情况下应用的技术均是本领域普通技术人员所公知的。作为一种用有效量致育增强胸腺素处理精细胞的可选择方法，可用有效量的致育增强抗胸腺素抗体处理精细胞。合适的抗体包括对刺激精子穿入率(如通过提高精本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种治疗雄性哺乳动物不育的组合物，该组合物包括含有足以有效地治疗所述不育用量的致育增强胸腺素肽或致育增强抗胸腺素抗体的药物剂量单位。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：AL戈德斯坦，拉杰施K纳茨，
申请(专利权)人：乔治华雹顿大学医学中心，艾伯特爱恩斯坦医学院，拉杰施K纳茨，
类型：发明
国别省市：US[美国]