采用衍生的三嗪作为亲合配体的用于抗体片段的纯化方法技术

技术编号:4940611 阅读:235 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
提供了一种从介质中分离片段抗体的方法。所述方法包括在使所述片段抗体结合至合成的亲合配体上的条件下,使包含所述片段抗体的介质与连接在载体基质上的合成的亲合配体接触。所述合成的亲合配体具有下式:其中Q代表与固体载体基质的连接,其任选经由间隔基团连接;A和B各自独立地为被一个或多个能够氢键结合的取代基,优选一个或多个–OH、-SH或–CO2H取代的-Y-苯基或-Y-萘基;每个Y独立地代表–NR-、-O-或–S-;和每个R独立地代表H或C1-4烷基。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本专利技术涉及一种纯化片段抗体(fAb)的方法。在许多治疗领域中片段抗体(fAb)越来越重要。制备fAb的最重要的方法之一是 借助重组技术。这种技术采用宿主细胞表达希望的fAb,然后再从制备介质中分离并纯化。 纯化通常借助色谱进行,而且纯化通常是复杂的多步方法。这种复杂性不可避免地限制了 所能获得的fAb的产率,并且显著减缓了制备过程。因此,人们希望找到操作更简便的纯化 方法。许多全抗体都是采用蛋白质A亲合色谱纯化。但是,人们认为蛋白质A具有许多 缺陷,包括有时在恶劣的方法条件下稳定性差、变性、成本高以及由于蛋白质A本身是生物 源材料而引起的法规限制问题。因此,为了纯化具有蛋白质A亲合性的抗体,人们研发出作 为替代物的合成的亲合配体。fAb不具有蛋白质A亲合性,不能够与其结合,因此不能采用蛋白质A亲合色谱 进行纯化。根据本专利技术的一个方面,提供一种从介质中分离fAb的方法,其包括在使fAb结 合至合成的亲合配体上的条件下,使包含所述fAb的介质与连接在载体基质上的合成的亲 合配体接触,其中所述合成的亲合配体具有下式权利要求1. 一种从介质中分离片段抗体的方法,其包括在使所述片段抗体结合至合成的亲合配 体上的条件下,使包含所述片段抗体的介质与连接在载体基质上的合成的亲合配体接触, 其中所述合成的亲合配体具有下式其中Q代表与固体载体基质的连接,其任选经由间隔基团连接;A和B各自独立地为被一个或多个能够氢键结合的取代基取代的-Y-苯基或-Y-萘基; 每个Y独立地代表-2. 一种制备片段抗体的方法,包括a)通过重组技术制备片段抗体,从而制备包含片段抗体的介质;b)按照包含下述步骤的方法从所述介质中分离所述片段抗体使包含所述片段抗体 的介质与连接在载体基质上的合成的亲合配体接触,其中所述合成的亲合配体具有下式3.根据权利要求2的方法,其中通过大肠杆菌或毕赤酵母菌宿主细胞的表达制备所述 片段抗体。4.根据前述任何权利要求的方法,其中能够氢键结合的取代基独立地选自-0H、-SH 或-co2H。5.根据前述任何权利要求的方法,其中连接在载体基质上的合成的亲合配体选自下式的化合物6.根据前述任何权利要求的方法,其中Q代表选自下列的间隔基团式-NH-(CH2) nNH-G; -NH- (CH2)nO-G; -0- (CH2)nO-G; -0- (CH2CH2)nO-G; -NH- (CH2)nO-G;和-NH-(CH2) nNH-(CH2)xO-G其中η为至多12的正整数;χ为1 - 6 ;和G为固体载体基质。7.根据权利要求6的方法,其中η为2- 6。8.根据前述任何权利要求的方法,其中所述片段抗体在6-8的ρΗ下结合在配体上。9.根据权利要求8的方法,其中所述片段抗体在6.5-7. 5的ρΗ下结合在配体上。10.根据前述任何权利要求的方法,其中在离子强度小于50mS/cm,优选为10-40mS/cm 的溶液中使所述片段抗体结合在所述配体上。11.根据权利要求10的方法,其中在离子强度为10-40ms/cm的溶液中使所述片段抗体 结合在所述配体上。12.根据前述任何权利要求的方法,其中所述片段抗体为Fab;scFv;单个的结构域或 其片段 ’双scFV、Fab2、Fab3、微型抗体、双抗体、三抗体、四抗体或tandab。13.根据权利要求12的方法,其中所述片段抗体为来自可变重链或其片段的单个的结 构域,或者为来自可变轻链或其片段的单个的结构域。HO全文摘要提供了一种从介质中分离片段抗体的方法。所述方法包括在使所述片段抗体结合至合成的亲合配体上的条件下,使包含所述片段抗体的介质与连接在载体基质上的合成的亲合配体接触。所述合成的亲合配体具有下式其中Q代表与固体载体基质的连接,其任选经由间隔基团连接;A和B各自独立地为被一个或多个能够氢键结合的取代基,优选一个或多个–OH、-SH或–CO2H取代的-Y-苯基或-Y-萘基;每个Y独立地代表–NR-、-O-或–S-;和每个R独立地代表H或C1-4烷基。文档编号C07K1/22GK102056943SQ200980117168 公开日2011年5月11日 申请日期2009年5月7日 优先权日2008年5月16日专利技术者M. 利德尔 J. 申请人:Msd生物制剂(英国)有限公司本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从介质中分离片段抗体的方法,其包括在使所述片段抗体结合至合成的亲合配体上的条件下,使包含所述片段抗体的介质与连接在载体基质上的合成的亲合配体接触,其中所述合成的亲合配体具有下式:  ***  其中  Q代表与固体载体基质的连接,其任选经由间隔基团连接;  A和B各自独立地为被一个或多个能够氢键结合的取代基取代的-Y-苯基或-Y-萘基;  每个Y独立地代表-NR-、-O-或-S-;和  每个R独立地代表H或C↓[1-4]烷基。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员:JM利德尔
申请(专利权)人:MSD生物制剂英国有限公司
类型:发明
国别省市:GB

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