本发明专利技术公开了视磺酸诱导基因Ⅰ及其编码蛋白介导的信号通路的新用途。该新用途为视磺酸诱导基因Ⅰ或视磺酸诱导基因Ｉ编码的蛋白或该蛋白介导的信号通路在设计和／或筛选药物中的应用。实验证明，本发明专利技术将ＲＩＧ－Ⅰ基因或ＲＩＧ－Ⅰ蛋白或ＲＩＧ－Ⅰ蛋白介导的信号通路作为靶点得到的药物，通过下调或抑制ＲＩＧ－Ⅰ及其信号通路分子，有效的抑制了一些与炎症性疾病相关的因子的表达，如ＩＬ－８因子、ＧＲＯ－α因子，进而降低了多种炎症性疾病的发病机率和缓解了炎症性疾病的病情。因此，将ＲＩＧ－Ⅰ作为靶点进行一系列炎症性疾病的预防和／或治疗，为药物开发提供了新思路，将在药物制备及炎症性疾病的预防和／或治疗中广泛应用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及视磺酸诱导基因I及其编码蛋白介导的信号通路的新用途。
技术介绍
视黄酸诱导基因I (RIG-1 ， Retinoic acid-Inducible Gene-1)最早在视黄 酸诱导分化急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia, APL)中发现 表达上调，并因此得名。人源RIG-I编码基因(Genbank号NW—001839149)位于第9 号染色体，具有18个外显子，编码的蛋白有925个氨基酸；鼠源RIG-I编码基因(Genbank号丽j72689)位于第4号染色体，同样具有18个外显子，编码的蛋白 则有926个氨基，与人源蛋白相似性达到81%。 2004年Yoneya腿等人发现RIG-1 分子在由dsRNA引起抗病毒信号通路中具有重要作用，从此RIG-1被广泛认为是先 天免疫反应中独立于TLR (ToU-likeRec印tor)、存在于细胞胞质的dsRNA受体。 RIG-I属于含DExD/H序列的RNA解旋酶家族，过表达后它通过其自身C端helicase 结构域识别并结合病毒的dsRNA，位于C端两个串联的CARD (caspase recruitment domain)结构域激活IRF3和NF- k B，向下游传递信号，引起下游IFN- e的激活， 从而发挥其抗病毒的生理功能。RIG-I被敲除后，细胞受到Sendai Virus、 NDV和 VSV等病毒感染后，不能再产生I型干扰素和炎性因子。RIG-I除了可以被视黄酸和病毒所诱导，还可以被很多细胞因子所诱导IL-lb 可以在人的牙龈成纤维细胞里诱导RIG-1; IFN-y可以在人脐带静脉表皮细胞(HUVEC)、平滑肌细胞(SMC)、乳腺癌细胞(MCF-7)和膀胱上皮细胞(T24)中 诱导RIG-I; IFN-a和TNF-a联合可以在肺表皮细胞(A549)中诱导RIG-1。 2005 年，Imaizumi等人报道LPS可以在表皮细胞(HUVEC)诱导RIG-1，并且过表达RIG-I 可以上调环氧化酶2 (cuclooxygenase-2, COX-2)的表达及激活其启动子区域。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供视磺酸诱导基因I及其编码蛋白介导的信号通路的 新用途。本专利技术所提供的一种新用途为视磺酸诱导基因I及其编码蛋白介导的信号通 路在设计和/或筛选药物中的应用。本专利技术所提供的另一种新用途为以视磺酸诱导基因I及其编码蛋白介导的信 号通路为靶点的物质在制备药物中的应用。其中，所述药物可为用于预防和/或治疗炎症相关疾病的药物。 所述药物具体可为用于预防和/或治疗动脉粥样硬化疾病的药物。 所述药物具体为用于抑制白细胞介素-8因子表达的药物。所述以视磺酸诱导基因I及其编码蛋白介导的信号通路为靶点的物质为核酸。 本专利技术的另一个目的是提供一种以视磺酸诱导基因I及其编码蛋白介导的信号通路为靶点的用于预防和/或治疗炎症相关疾病的药物。所述药物的活性成分可为核酸或其它以视磺酸诱导基因I及其编码蛋白介导的信号通路为靶标的任意活性成分。上述任一所述核酸可为抑制所述视磺酸诱导基因I表达的小干扰RNA、表达所 述小干扰RNA的载体、表达抑制所述视磺酸诱导I型基因表达的shRNA的载体、与 所述视磺酸诱导I型基因发生同源重组且抑制所述视磺酸诱导I型基因表达的同 源序列或含有所述同源序列的载体。上述任一所述shRNA可由茎I 、环和茎II构成的茎环结构；所述茎I的序列为 5， AGUGGAAUCACGGAUUAGCTT3，，所述茎II的序列为5， GCUAAUCCGUGAUUCCACU3，； 所述shRNA的编码DNA为所述药物可为用于抑制白细胞介素-8因子表达的药物。 本专利技术的最后一个目的是提供一种炎症相关疾病诊断试剂盒。 本专利技术所提供的炎症相关疾病诊断试剂盒，包括检测视磺酸诱导基因I或该基因编码的蛋白表达水平的物质。检测视磺酸诱导基因I或该基因编码的蛋白表达水平的物质在制备炎症相关疾病诊断试剂盒中的应用也属于本专利技术的保护范围。其中，所述物质可为用于扩增视磺酸诱导基因I的RT-PCR引物和/或该基因编码蛋白的抗体。实验证明，本专利技术将视磺酸诱导基因I及其编码蛋白介导的信号通路作为靶点 得到的药物，通过下调和抑制RIG-I的表达或抑制和下调RIG-I信号通路分子，有 效的抑制了一些与炎症性疾病相关的因子的表达，如IL-8因子，进而降低了多种 炎症性疾病的发病机率和缓解了炎症性疾病的病情。因此，将RIG-I及其介导的信号通路作为靶点进行一系列炎症性疾病，如动脉粥样硬化等的预防和/或治疗，为 药物开发提供了新思路，将在药物制备及炎症性疾病的预防和/或治疗中广泛应用。 附图说明图1为25-羟基胆固醇诱导RIG-1表达的结果。 图2为高糖诱导RIG-I表达的结果。图3为转染干涉质粒的细胞中RIG-I的蛋白表达情况，以及干涉RI-1后的细 胞中RIG-I和IL-8的转录情况。图4为动脉粥样硬化病人外周血中巨噬细胞和正常人的外周血中巨噬细胞中 RIG-I的表达情况。图5为RIG-I介导的信号通路中的分子对IL-8的影响。 具体实施例方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从市面公司购买。 HUVEC为人脐静脉内皮细胞，从离体的新生儿脐带静脉中分离得到。 THP-1为人单核细胞型淋巴瘤细胞，购自美国ATCC公司，产品目录号为 TIB-202。RIG-I为视磺酸I型基因，IL-8为白细胞介素-8因子，25-HC为25羟基胆固醇。佛波酯购自美国merck公司，产品目录号为524400; pSUPER载体购自美国 OligoEngine公司，产品目录号为VEC-PRT-0001/0002。实施例1、 25-羟基胆固醇和高浓度葡萄糖可以诱导RIG-I的表达 (一)在HUVEC中25-HC诱导RIG-I的表达从离体的新生儿脐带静脉中分离内皮细胞HUVEC，铺板24小时后，用5ug/ml 25-HC (每孔加入5ug 25-HC)进行刺激，4h、 8h、 16h、 24h后收样，分别在RNA 和蛋白水平检测RIG-I蛋白的诱导，同时在RNA水平检测IL-8的诱导，以未经任何诱导的细胞作为对照。RIG-1 RNA水平检测方法为RT-PCR。 用trizol提取RNA， 反转录得到cDNA， 再用PCR检测RIG-1的表达。所用引物序列为RIG-I:正义链， 5， -TCGGCGTTGGAGATGCTA-3';反义链，5， -TGGAAGAAGGCTTTGAGG-3，。结果如图1A 所示，表明25-HC可以诱导RIG-I的转录。RIG-I蛋白水平检测方法为western蛋白杂交。提取细胞总蛋白，SDS-PAGE 电泳，转膜然后分步加入一抗二抗， 一抗为RIG-I抗体，购自Alexis公司，货号 是ALX-804-849。 最后显色。结果如图1B所示，表明25-HC可以诱导RIG-1蛋白 的表达。IL-8 RNA水平检测方法为RT-PCR。用trizol提取RNA， 反转录得到cDNA，再 用PCR检测RIG-I的表达。所用引物序列为IL-8:正义链，5， TGTGG本文档来自技高网...
【技术保护点】
视磺酸诱导基因Ⅰ及其编码蛋白介导的信号通路在设计和／或筛选药物中的应用。
【技术特征摘要】
1、视磺酸诱导基因I及其编码蛋白介导的信号通路在设计和/或筛选药物中的应用。2、 以视磺酸诱导基因I及其编码的蛋白介导的信号通路为靶点的物质在制备 药物中的应用。3、 根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于所述药物为用于预防和/或治疗炎症相关疾病的药物。4、 根据权利要求3所述的应用，其特征在于所述药物为用于预防和/或治疗动脉粥样硬化疾病的药物。5、 根据权利要求4所述的应用，其特征在于所述药物为用于抑制白细胞介素-8因子表达的药物。6、 根据权利要求2-5中任一所述的应用，其特征在于所述以视磺酸诱导基因I及其编码蛋白介导的信号通路为靶点的物质为核酸。7、 根据权利要求6所述的应用，其特征在于所述核酸为抑制所述视磺酸诱 导基因I表达的小干扰RNA、表达所述小干扰RNA的载体、表达抑制所述视磺酸诱 导基因I表达的shRNA的载体、与所述视磺酸诱导基因I发生同源重组且抑制所述 视磺酸诱导基因I表达的同源序列或含有所述同源序列的载体。8、 根据权利要求7所述的应用，其特征在于所述shRNA由茎I、环和茎II 构成的茎环结构；所述茎I的序列为5， AGUGGAAUCACGGAUUAGCTT3，，所述茎II的 序列为5' GCUAAUCCGUGAUUCCACU3'。9、 一种以视磺酸诱导基因I及其编石马蛋白介导的信号通路为靶点的用于预防 和/或治疗炎症相...
【专利技术属性】
技术研发人员：顾军，王锋，
申请(专利权)人：北京大学，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]
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