水蛭素与亲脂化合物的水蛭素结合物制造技术

由水蛭素和一种或多种亲脂化合物形成的水蛭素结合物，其中，所述亲脂化合物的辛醇／水分配系数大于１．８，而且与水蛭素共价相连。２．根据权利要求１的水蛭素结合物，其特征在于在氨基酸２７－３７区域内发生亲脂化合物的键合。（*该技术在2014年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及由水蛭素和亲脂化合物形成的新水蛭素结合物，其制备方法及其作为药物的应用。水蛭素是一种已经知道了很长时间的而且具有抗凝血特性的天然产生的蛋白质。它是到目前为止已知的最强的和最有选择性的凝血酶抑制剂(Naturwissenschaften，42，537，(1955)；Hoppe-Seylers Z.für Biol.Chemie 366，379，(1985))。天然水蛭素是具有分子量为6,900-7,000道尔顿，64-66个氨基酸的化学性质类似的肽的混合物。迄今为止，已经描述了约20种天然存在水蛭素变异体(Scharf et al.FEBS-Letters 255，105-110，(1989))。EP 345616描述了由与聚合物载体相连的水蛭素组成的产物。所提及的载体是可溶的和不可溶的聚合物，例如葡聚糖，琼脂糖(凝胶)，肝素，果聚糖和明胶部分水解产物。据认为载体-修饰的水蛭素具有改善的药物学特性，例如较长的半衰期。DE 40 14 260描述了水蛭素/聚乙二醇结合物，与天然水蛭素相比，所述结合物具有更好的药物学作用图谱，例如延长的生物活性和较好的生物获得性。上述两个公开的专利申请均描述了通过用高分子量聚合物修饰水蛭素而得到具有延长活性的水蛭素衍生物。在这些情况下，所述聚合物的分子量达数千道尔顿，以致于多肽水蛭素的分子量显著增加。然而，这些类型的高分子量聚合物是化学特性上未精确限定的；相反它们含有在一定分子量范围内的各种分子群。因此，由其制备的水蛭素结合产物不是由单一化合物组成的，相反它们由分子量彼此不同的分子群组成。但是，按要求来说作为药物的活性物质在化学上应是尽可能精确地定义的，以便在体内可以更好地控制其行为。本专利技术的目的之一是提供具有好于正常水蛭素的药物学特性的水蛭素衍生物，而且所述衍生物克服了用高分子量聚合物修饰的水蛭素的上述缺陷。我们已经发现，通过由水蛭素和一个或多个亲脂化合物形成的水蛭素结合物可达到该目的，其中所述亲脂化合物的辛醇/水分配系数大于1.8，而且与水蛭素共价相连。根据本专利技术适用于水蛭素结合物的是所有天然产生的水蛭素以及由其得到的变异体，称为水蛭素突变蛋白，以及具有凝血酶抑制作用的片段。在例如EP 171 024，EP 158 986，DE 38 055 406，WO 92/1712，GB 2 247 239，EP557 199，WO 92/5748，DE 40 14 260中公开了这些类型的水蛭素及其制备方法。很适于制备本专利技术水蛭素结合物的是从水蛭素的结构衍生的并具有如EP 333356中所述的水蛭素活性的肽或肽衍生物。优选使用的水蛭素是其中与亲脂化合物的键合不会导致活性丧失的那些水蛭素。这样的情况例如，在经氨基酸27-37的侧链发生键合的水蛭素情况。特别有利于键合的是氨基酸位置27和33(以天然水蛭素HVI为基础)，原因在于这些化合物位于手指样区的顶端，而且不会影响水蛭素与凝血酶之间的相互作用。亲脂化合物的键合(带有亲脂化合物的适当的间隔基)可发生在水蛭素的氨基上，例如游离N-末端氨基，赖氨酸侧链的氨基，组氨酸的氨基，精氨酸的酰胺基或水蛭素的羟基，例如酪氨酸，丝氨酸或苏氨酸侧链的羟基。赖氨酸侧链的氨基特别适于亲脂化合物的键合。另外通过硝化作用和还原作用可以将亲脂化合物与水蛭素的修饰的酪氨酸相连(Meth.Ebzymol.25，515-521，(1972))。还可以通过熟知的偶联方法将亲脂化合物与形成的芳基氨基酪氨酸相连。适宜的亲脂化合物是有一个或多个官能基团，例如氨基，羟基，羧基或磺基，而且辛醇/水分配系数大于1.8的化合物。亲脂化合物可以是天然物质，例如饱和的或不饱和的脂肪酸，萜烯，前列腺素，脂溶性维生素，类胡萝卜素或类固醇，以及带一个或多个烷基，芳基，链烯基的合成的羧酸，醇，胺和磺酸，或可以是线性或支化的并且可以由卤素，硝基，氰基，烷氧基，烷硫基或卤代烷基取代的聚不饱和化合物。亲脂化合物的实例是饱和的脂肪酸己酸，辛酸，癸酸，月桂酸，肉豆蔻酸，棕榈酸，硬脂酸，花生酸和山萮酸，以及不饱和脂肪酸，棕榈油酸，油酸，亚油酸、亚麻酸，蓖麻油酸，十八碳四烯酸，二十碳烯酸，二十碳二烯酸，花生四烯酸，二十碳五烯酸或芥酸及从其可得到的脂肪醇和脂肪胺。还可以使用在天然脂类，例如椰子脂，棕榈坚果油，菜油，橄榄油，葵花油，高油的葵花油，蓖麻油或牛油的皂化基础上得到的脂肪酸混合物。亲脂化合物的其他实例是类胡萝卜素，玉米黄质，紫菌红醇或虾青素，甾族化合物胆甾醇，链甾醇，，类甾醇，脑甾醇，7-烯胆烷醇，麦角甾醇，容甾醇，豆甾醇，胆甾酸，胆酸，脱氢皮质甾醇，醛甾酮，雄甾酮，睾甾酮，速甾醇，羊毛甾烯醇或光甾醇，萜烯类，季叶醇，橙花醇，里哪醇，薄荷醇，香芹醇，冰片，法呢醇，橙花叔醇或硬尾醇，前列腺素类布雷菲得菌素，PGE2或PGF2，维生素A1或D以及合成的化合物，例如，羰基合成醇，己胺，乙基己酸，乙基己醇，乙基己胺或烷基苯磺酸。本专利技术特别适宜的亲脂化合物是具有通式I的化合物 其中R1和R2分别各自独立地是(CH2)m-C(R3)(R4)-(CH2)n-(CH＝CH-CH2)o-CH3，m是0-28，n是3-6，o是0-6，R3和R4分别各自独立地是，H，C1-6-烷基，C3-6-环烷基，芳基或苄基，未取代的或由卤素，硝基，氰基，烷基，烷氧基，烷硫基或卤代烷基取代的。式I特别优选的化合物是其中R1和R2含有4-16个碳原子，而且饱和的或单，二或三不饱和的化合物。进一步适宜的亲脂化合物是具有通式II的化合物H-Y-R1II其中R1是(CH2)m-C(R3)(R4)-(CH2)n-(CH＝CH-CH2)o-CH3，Y 是-C(O)-，-N(R5)-，-O-其中R5是H，C1-18-烷基，C3-18-链烯基，C3-6-环烷基，芳基或苄基，未取代的或由卤素，硝基，氰基，烷基，烷氧基，烷硫基或卤代烷基取代的。将水蛭素直接或经间隔基与一个或多个亲脂化合物相连制备本专利技术的水蛭素结合物。适宜的间隔基是所有二或多官能团分子，利用它们的多官能团，可以键合(经过或未经过预先的活化)水蛭素和亲脂化合物。特别适宜的间隔基是氨基酸，寡肽，单-，二-或寡糖，氨基或羟基羧酸，特别是链长为2-10个碳原子的那些，它们还可以有取代基以提高亲水性，例如C1-C4-低聚亚烷基二醇。可用于连接亲脂化合物和水蛭素的间隔基的实例是-X-CO-，-X-CO-NH-Z-NH-CO-， -X-CO-CH2-CH2-CO-，-X-CH2-CO， 其中，X是S，O，NH，N(CH3)或N(C2H5)W是H，OH，或ClZ是C2-C6-亚烷基或对-亚苯基必需使用间隔基以便在与表面，如细胞膜或合成表面结合后能够保持水蛭素结合物的生物活性。适用于本专利技术水蛭素结合物的亲脂化合物是所有有一个或多个官能团，例如氨基，羟基，羧基，或磺基的那些化合物，因为这些官能团在活化后能够与水蛭素中的反应基团反应。亲脂化合物活化的方式(若需要经间隔基进行键合)取决于官能团，而且可以用本领域专业人员熟知的方法完成。如果亲脂化合物或带有亲脂化合物的间隔基有羧基，则可以通过例如转化成链烯基酯，芳基酯，O-半缩醛，O-酰基半氨基缩醛，O-酰基半缩酮，O-酰基半氨基本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：J施维邓，P艾克斯，W霍恩伯格，T苏布科维斯基，
申请(专利权)人：BASF公司，
类型：发明
国别省市：