一种中药组合物中一个孕甾糖苷的提取分离方法技术

本发明专利技术公开了一种中药组合物中一个孕甾糖苷的提取方法。本发明专利技术中药组合物由黄芪、人参、丹参等１１味中药组成，临床用于治疗冠心病、高血压病所致轻、中度充血性心力衰竭等有较好疗效，本发明专利技术从其活性部位提取分离得到了一个孕甾糖苷，首次报道其来源于中药香加皮，该提取分离方法可用于质量控制或者制备新的制剂。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种中药组合物中一个孕留糖苷的提取分离方法，具体地，涉及从一 种中药组合物中提取分离 Δ 5-pregnene-3 β , 16 β，20 (R)-triol3_0- 20-0- 的方法。
技术介绍
本专利技术中中药组合物包含如下原料药黄芪、附子、人参或党参、丹参、葶苈子、香 加皮或南五加皮、泽泻、玉竹、桂枝、红花、陈皮，该中药组合物是石家庄以岭药业股份有限 公司研制的一个治疗中轻度慢性心衰的药物，临床用于治疗冠心病、高血压病所致轻、中度 充血性心力衰竭等有较好疗效魏聪，贾振华，吴以岭，刘建勋.芪苈强心胶囊对兔实验 性慢性心力衰竭心室重构的保护作用.疑难病杂志，2007，6 (3) :144-146。中国专利ZL 02146573. 8公开了该中药组合物的组方和制备工艺以及用途。化合物孕甾糖苷A5-pregnene-3 3，16β，20(R)-triol3-0_20-0-(简称 S_4a)首次 艮道 其来源于中药香力口皮Hideji Itokawa, Junping Xu and Koichi Takeya. Pregnane Glycosides from an Antitumour Fraction of Periploca sepium. Phytochemistry, 1988,27(4) :1173-1179。传统的中药质量控制技术多为经验式的主观评判和常规的理化及仪器分析，很难 从根本上解决中药质量控制中的关键问题.随着现代工程技术的发展，一些先进的中药制 药工程技术逐渐在中药质量控制中得以推广和应用，从中药中提取一些富有代表性的化合 物，为新的质量控制方法提供了可能。随着现代药剂学及有关药学科学的发展，新研究手段及现代技术应用于中药制剂 的研究和生产，使中药制剂突破了常规制剂的传统观念。中药中的化合物的确定与分离，为 中药制剂保证安全、有效、实用提供了物质依据。
技术实现思路
本专利技术目的是提供一种中药组合物中一个孕留糖苷的提取分离方法；所述中药组合物由如下重量份的原料药制成黄芪150-450份、附子40-120份、人 参或党参75-225份、丹参75-225份、葶苈子50-150份、香加皮或南五加皮60-180份、泽泻 75-225份、玉竹25-75份、桂枝30-90份、红花30-90份、陈皮25-75份，所述孕留糖苷的化δ 5-pregnene-3 β , 16 β , 20 (r) -triol3-0- 20-0-(简称 S_4a)，分离方法如下a、按比例称取其中黄芪、人参或党参、葶苈子、泽泻、香加皮，加入8倍量70%乙4醇，浸泡30分钟，回流提取3小时，滤过，再加入8倍量70%乙醇，回流提取2小时，滤过，合 并滤液，减压回收乙醇，浓缩至在60°C测定相对密度为1. 15-1. 20，得醇提浸膏；b、步骤a所得醇提浸膏冷藏过夜，板框过滤，加水稀释至密度为0. 1克药材/ml，得 中药液；C、大孔树脂加入4倍树脂体积的5%氢氧化钠，充分搅拌，浸泡，水洗至中性，加入 95%乙醇浸泡、装柱，以两倍柱体积的95%乙醇冲洗，继水洗至无醇味，备用；d、步骤b所得中药液以1倍柱体积/小时通过树脂柱，收集过柱液；e、用4倍柱体积的水进行洗脱，收集洗脱液，与过柱液合并，减压浓缩呈浓浸膏， 记为El ；继续用4倍柱体积的10%乙醇进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩呈浓浸膏，记为 E2 ；继续用4倍柱体积的30%乙醇进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩呈浓浸膏，记为E3 ；继 续用4倍柱体积的50%乙醇进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩呈浓浸膏，记为E4 ；继续用4 倍柱体积的70%乙醇进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩呈浓浸膏，记为E5 ；继续用4倍柱体 积的95%乙醇进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩呈浓浸膏，记为E6 ；f、取E4部分经硅胶柱色谱，氯仿-甲醇-水洗脱，分份收集，合并相同流份；g、将步骤f中第四个相同流份减压浓缩干燥，再经开放C18柱色谱，依次用50%甲 醇、甲醇洗脱，甲醇部分经HPLC制备纯化，即得目标化合物。其中步骤c所述大孔树脂，优选为AB-8树脂。该方法优选为如下步骤a、按比例称取其中黄芪、人参或党参、葶苈子、泽泻、香加皮，加入8倍量70%乙 醇，浸泡30分钟，回流提取3小时，滤过，再加入8倍量70%乙醇，回流提取2小时，滤过，合 并滤液，减压回收乙醇，浓缩至在60°C测定相对密度为1. 15-1. 20，得醇提浸膏；b、醇提浸膏冷藏过夜，板框过滤，加水稀释至密度为0. 1克药材/ml，得中药液；c、AB-8树脂加入4倍树脂体积的5 %氢氧化钠，充分搅拌，浸泡，水洗至中性，加入 95%乙醇浸泡、装柱，以两倍柱体积的95%乙醇冲洗，继水洗至无醇味，备用；d、步骤b所得中药液以1倍柱体积/小时通过树脂柱，收集过柱液；e、用4倍柱体积的水进行洗脱，收集洗脱液，与过柱液合并，减压浓缩呈浓浸膏， 记为El ；继续用4倍柱体积的10%乙醇进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩呈浓浸膏，记为 E2 ；继续用4倍柱体积的30%乙醇进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩呈浓浸膏，记为E3 ；继 续用4倍柱体积的50 %乙醇进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩呈浓浸膏，记为E4 ；继续用4 倍柱体积的70%乙醇进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩呈浓浸膏，记为E5 ；继续用4倍柱体 积的95%乙醇进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩呈浓浸膏，记为E6 ；f、取E4部分20g溶解于60 %甲醇中，与90g薄层硅胶拌勻后烘干，上样于 10X 30cm的硅胶干柱，依次用9 1的氯仿-甲醇2000mL，18 3的氯仿-甲醇6000mL， 9 2的氯仿-甲醇7000mL，65 35 10的氯仿-甲醇-水6000mL梯度洗脱，每份收集 IOOmL,共收集150份，最后用纯甲醇洗脱2000mL ；TLC检测各流份，10%浓硫酸显色，分别将 相近斑点的流份合并，得到16个部分分别标记为Frl-Frie ；g、Fr4溶解于50%甲醇中，上样于50%甲醇平衡的3 X 32cm的C18柱色谱，依次 用50%甲醇洗脱2000mL，甲醇洗脱500mL，分份收集，每份80mL ；HPLC-ELSD检测，合并相同 流份，其中甲醇洗脱部分再经制备HPLC即得目标化合物。本专利技术中所述中药组合物组方中的其它药味的提取和浓缩等制备工艺在中国专 利ZL 02146573. 8均已公开，本专利技术中化合物S-如仅是从本专利技术中药组合物中醇提部分分 离得到，但该中药组合物密不可分，缺少某些药味可能会丧失临床价值。本专利技术所述中药组合物原料药的重量份比例优选为黄芪450份、附子112. 5份、人参或党参225份、丹参225份、葶苈子150份、香加皮或南五加皮180份、泽泻225份、玉竹75份、桂枝90份、红花90份、陈皮75份。或者黄芪250份、附子112. 5份、人参或党参200份、丹参120份、葶苈子135份、香加皮或南五加皮150份、泽泻200份、玉竹60份、桂枝75份、红花75份、陈皮60份。或者黄芪150份、附子40份、人参或党参225份、丹参225份、葶苈子50份、香加皮或南五加皮180份、泽泻75份、玉竹75份、桂枝30份、红花90份、陈皮25份。为阐明本专利技术提取本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种中药组合物中一个孕甾糖苷的提取分离方法，该中药组合物由如下重量份的原料药制成：黄芪１５０－４５０份、附子４０－１２０份、人参或党参７５－２２５份、丹参７５－２２５份、葶苈子５０－１５０份、香加皮或南五加皮６０－１８０份、泽泻７５－２２５份、玉竹２５－７５份、桂枝３０－９０份、红花３０－９０份、陈皮２５－７５份，该孕甾糖苷的结构为Δ↑［５］－ｐｒｅｇｎｅｎｅ－３β，１６β，２０（Ｒ）－ｔｒｉｏｌ　３－Ｏ－［２，－Ｏ－ａｃｅｔｙｌ－β－Ｄ－ｄｉｇｉｔａｌｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ－（１→４）－β－Ｄ－ｃｙｍａｒｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ］２０－Ｏ－［β－Ｄ－ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ－（１→６）－β－Ｄ－ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ－（１→２）－β－Ｄ－ｄｉｇｉｔａｌｏｐｙｒａｎｏｓｌｄｅ］，其特征在于该孕甾糖苷是经如下步骤制得的：ａ、按比例称取其中黄芪、人参或党参、葶苈子、泽泻、香加皮，加入８倍量７０％乙醇，浸泡３０分钟，回流提取３小时，滤过，再加入８倍量７０％乙醇，回流提取２小时，滤过，合并滤液，减压回收乙醇，浓缩至在６０℃测定相对密度为１．１５－１．２０，得醇提浸膏；ｂ、步骤ａ所得醇提浸膏冷藏过夜，板框过滤，加水稀释至密度为０．１克药材／ｍｌ，得中药液；ｃ、大孔树脂加入４倍树脂体积的５％氢氧化钠，充分搅拌，浸泡，水洗至中性，加入９５％乙醇浸泡、装柱，以两倍柱体积的９５％乙醇冲洗，继水洗至无醇味，备用；ｄ、步骤ｂ所得中药液以１倍柱体积／小时通过树脂柱，收集过柱液；ｅ、用４倍柱体积的水进行洗脱，收集洗脱液，与过柱液合并，减压浓缩呈浓浸膏，记为Ｅ１；继续用４倍柱体积的１０％乙醇进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩呈浓浸膏，记为Ｅ２；继续用４倍柱体积的３０％乙醇进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩呈浓浸膏，记为Ｅ３；继续用４倍柱体积的５０％乙醇进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩呈浓浸膏，记为Ｅ４；继续用４倍柱体积的７０％乙醇进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩呈浓浸膏，记为Ｅ５；继续用４倍柱体积的９５％乙醇进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩呈浓浸膏，记为Ｅ６；ｆ、取Ｅ４部分经硅胶柱色谱，氯仿－甲醇－水洗脱，分份收集，合并相同流份；ｇ、将步骤ｆ中第四个相同流份减压浓缩干燥，再经开放Ｃ１８柱色谱，依次用５０％甲醇、甲醇洗脱，甲醇部分经ＨＰＬＣ制备纯化，即得目标化合物。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：马百平，康利平，刘奕训，余河水，邹鹏，贾继明，王宏涛，郑亚杰，吴以岭，
申请(专利权)人：河北以岭医药研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：13[中国|河北]