用造血蛋白刺激红细胞生成的方法技术

提供了用造血蛋白血小板生成素并有选择地结合红细胞生成素刺激红细胞生成的方法。所提供的上述方法可用于在体外和体内、在骨髓和外周血细胞中刺激红细胞生成。另外，还披露了治疗血小板减少患者和贫血患者的方法。（*该技术在2015年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
用造血蛋白刺激红细胞生成的方法血细胞生成是由骨髓里的多能干细胞发育并分化成血细胞的过程。这一过程涉及多肽生长因子(细胞因子)的复杂的相互作用，所述因子通过靶细胞上的膜结合受体而起作用。细胞因子的作用会导致细胞增殖和分化，就特定细胞因子而言，其通常是谱系特异的和/或时间特异的。一种细胞的发育，如由干细胞生成血小板或红细胞，可能需要若干种细胞因子以正确的顺序协同作用。已知的细胞因子包括白介素，如IL-1，IL-2，IL-3，IL-6，IL-8等；和集落刺激因子，如G-CSF，M-CSF，GM-CSF，红细胞生成素(EPO)等。一般，白介素起到免疫反应和炎症反应的介体的作用。刺落刺激因子能刺激骨髓衍生细胞的增殖，激活成熟的白细胞，并且构成宿主对炎症、感染和免疫攻击反应的一个整体部分。业已研制出多种细胞因子作为治疗剂。已将几种集落刺激因子结合癌症的化疗使用，以加速患者免疫系统的恢复。白介素-2、α-干扰素和γ-干扰素被用于治疗某些癌症。能刺激红细胞发育的EPO被用于治疗因肾衰竭而发生的贫血。负责刺激巨核细胞生成和血小板生成的因子不能作特定的鉴定，部分原因是缺乏好的资源，缺乏好的分析方法，并缺乏对其生产位点的了解，尽管已用了三十年的时间来提取并鉴定这些因子，这种情况直到最近才有所改善。在文献中被称作“血小板生成素”的巨核细胞生成因子(见最近由Mc-Donald所作的综述，Exp.Hematol.16：201-205，1988；和McDon-ald，Am.J.Ped.Hematol.Qncol.14：8-21，1992)现在已被鉴定和提取(见待批的美国专利申请No.08/252,491；Lok等，Nature 369：565-568，1994；和Kaushansky等，Nature 369：568-571，1994；以上文献均被收作本文的参考)。与血小板功能异常相关的轻度出血症(MBDs)比较常见(Bach-mann，Seminars in Hematology 17：292-305，1980)，象多种先天性血-->小板功能紊乱都是，包括Bernard Soulier综合症(血小板GPIb缺损)，Glanzmann′s血小板机能不全(GPIIb和GPIIIa缺损)，先天性无纤维蛋白原血症(血浆和血小板中血纤维蛋白原含量减少或缺乏)，和灰色血小板综合症(缺乏α-颗粒)。另外，还有多种疾病与血小板分泌、贮集缺陷、血小板花生四烯酸途径异常、血小板环加氧酶和凝血恶烷合成酶缺陷以及血小板活化缺陷相关(见Rao和Holmsen的综述，Seminar in Hematology 23：102-118.1986)。目前，尚不十分了解这些缺陷中大部分的分子基础。贫血是红细胞(红细胞)生成缺陷，它会导致由血液向机体组织转运的氧气量减少。因出血而引起的大量失血、因自身抗体、辐射或化学药品的作用而引起的红细胞破裂或因高海拔或长时间丧失意识引起的氧气摄入减少都会导致缺氧。当组织出现缺氧时，EPO的产生受到刺激，并能增加红细胞的产生。EPO能促进骨髓里的原前体细胞转化成原红细胞，原红细胞随后成熟，合成血红蛋白，并作为红细胞释放到循环系统中。当循环系统中红细胞的数量多于正常组织供氧所需数量时，循环系统中EPO的含量降低。巨核细胞和红细胞含量的严重减少与通过化疗和辐射治疗各种癌症相关，并与诸如AIDS、再生障碍性贫血和脊髓发育不良这样的疾病相关。当巨核细胞和/或红细胞的含量变得太低时，例如，血小板数低于25,000～50,000，血细胞比容低于25，则容易产生明显的病态，而且，在某些场合，上述含量还会危及生命。除了治疗所述疾病外，具体治疗还包括针对血小板减少(低血小板数)的血小板输血和用EPO刺激红细胞生成，或针对贫血的红细胞输血。分子生物学的最新进展大大增进了我们对血细胞生成的了解，但同时也发现其生成过程极为复杂。虽然已鉴定了多种细胞因子，而且已证实了其中一些的临床应用价值，但本领域仍需要能刺激骨髓和淋巴前体增殖和分化及成熟血细胞生成的其它试剂。特别需要能刺激巨核细胞和红细胞谱系的细胞，包括血小板和红细胞发育和增殖的试剂。本领域还需要可用于同时治疗细胞减少症和贫血的试剂，如因骨髓中造血细胞的破裂而引起的贫血，这种现象出现在诸如-->通过化疗和辐射治疗癌症的情况和病理性情况，如脊髓发育不良、AIDS、再生障碍性贫血、自身免疫病或炎症。本专利技术能满足上述要求并具有相关的其它优点。本专利技术的一个目的是提供用于促进红细胞生成的方法，该方法是通过在有TPO和EPO的条件下培养骨髓或外周血细胞而实现的，TPO和EPO的用量足于使所产生的红细胞或红细胞前体数目比在没有TPO的条件下所培养的细胞产生的多，其中，所述TPO包括选自以下序列的一段氨基酸序列：序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基28至残基172；序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基28至残基185；序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基28至残基193；序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基28至残基198；序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基28至残基207；序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基28至残基235；序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基28至残基266；序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基22至残基185；序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基22至残基193；序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基22至残基198；序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基22至残基207；序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基22至残基235；和序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基22至残基266；本专利技术的另一个目的是提供用于促进红细胞生成的方法，该方法是通过在有一种含TPO的组合物的条件下培养骨髓或外周血细胞而实现的，TPO的用量足于使所产生的红细胞或红细胞前体数目比在没有TPO的条件下所培养的细胞产生的多，其中，所述TPO包括选自以下序列的一段氨基酸序列：序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基28至残基172；序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基28至残基185；序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基28至残基193；序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基28至残基198；序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基28至残基207；序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基28至残基235；序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基28至残基266；序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基22至残基185；-->序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基22至残基193；序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基22至残基198；序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基22至残基207；序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基22至残基235；和序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基22至残基266；本专利技术的又一个目的是提供一种通过服用一种含TPO的组合物刺激在哺乳动物中红细胞生成的方法，TPO在一种可以药用的媒介物中，该方法用于使红系细胞增殖或分化提高，其中，所述TPO包括选自下列序列的一段氨基酸序列：序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基28至残基172；序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基28至残基185；序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基28至残基193；序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于在体外刺激红细胞生成的方法，包括用一种含有一定量血小板生成素（ＴＰＯ）和红细胞生成素（ＥＰＯ）的组合物培养骨髓或外周血细胞，ＴＰＯ和ＥＰＯ的用量足于使所产生的红细胞或红细胞前体数比在没有ＴＰＯ的条件下培养的细胞所产生的多，其中，所述ＴＰＯ包括选自以下序列的氨基酸序列：序列２所示氨基酸序列，从氨基酸残基２８至残基１７２；序列２所示氨基酸序列，从氨基酸残基２８至残基１８５；序列２所示氨基酸序列，从氨基酸残基２８至残基１９３；序列２所示氨基酸序列，从氨基酸残 基２８至残基１９８；序列２所示氨基酸序列，从氨基酸残基２８至残基２０７；序列２所示氨基酸序列，从氨基酸残基２８至残基２３５；序列２所示氨基酸序列，从氨基酸残基２８至残基２６６；序列２所示氨基酸序列，从氨基酸残基２２至残基１８ ５；序列２所示氨基酸序列，从氨基酸残基２２至残基１９３；序列２所示氨基酸序列，从氨基酸残基２２至残基１９８；序列２所示氨基酸序列，从氨基酸残基２２至残基２０７；序列２所示氨基酸序列，从氨基酸残基２２至残基２３５；以及序列 ２所示氨基酸序列，从氨基酸残基２２至残基２６６。...

【技术特征摘要】
US 1994-11-7 08/335566;US 1994-12-1 08/347,748;US 1.一种用于在体外刺激红细胞生成的方法，包括用一种含有一定量血小板生成素(TPO)和红细胞生成素(EPO)的组合物培养骨髓或外周血细胞，TPO和EPO的用量足于使所产生的红细胞或红细胞前体数比在没有TPO的条件下培养的细胞所产生的多，其中，所述TPO包括选自以下序列的氨基酸序列：序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基28至残基172；序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基28至残基185；序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基28至残基193；序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基28至残基198；序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基28至残基207；序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基28至残基235；序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基28至残基266；序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基22至残基185；序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基22至残基193；序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基22至残基198；序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基22至残基207；序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基22至残基235；以及序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基22至残基266。2.一种用于在体外刺激红细胞生成的方法，包括用一定量的TPO培养骨髓或外周血细胞，TPO的用量足于使所产生的红细胞或红细胞前体数比在没有TPO的条件下培养的细胞所产生的多，其中，所述TPO包括选自以下序列的氨基酸序列：序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基28至残基172；序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基28至残基185；序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基28至残基193；序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基28至残基198；序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基28至残基207；序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基28至残基235；序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基28至残基266；序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基22至残基185；序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基22至残基193；序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基22至残基198；序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基22至残基207；序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基22至残基235；以及序列2所示氨基酸序列，从氨基酸残基22至残基266 。3.一种用于刺激红细胞生成的方法，包括给需要用药的哺乳动物服用一种含有与一种可以药用的媒介物组合的TPO的组合物，TPO的用量足于产生红系细胞增殖或分化的增加，其中...

【专利技术属性】
技术研发人员：K阔杉斯基，
申请(专利权)人：华盛顿大学，
类型：发明
国别省市：US[美国]