使用反义寡核苷酸治疗肺病的方法技术

一种给需要治疗的患者治疗呼吸道疾病的方法，包括： 将有效治疗所述疾病剂量的反义寡核苷酸局部用于患者的呼吸道上皮； 所述反义寡核苷酸基本不含有腺苷。（*该技术在2016年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

此申请涉及用基本不含腺苷的反义寡核苷酸治疗肺病的方法。
技术介绍
反义寡核苷酸作为治疗人类疾病的潜在有用的药物制剂，在理论上受到了相当的重视。R.Wagner，《自然》372，333-335(1994)。然而，有关这些分子对现实人类疾病模型的实际应用尚不明了。对这些分子的药理学应用，值得重要考虑的是它们的给药途径。大部分在体应用反义寡核苷酸的实验均涉及直接应用它到脑(参见C.Wahlestedt，《药理科学进展》15，42-46(1994)；J.Lai等，《神经报告》5，1049-1052(1994)；K.Standifer等，《神经元》12，805-810(1994)；A.Akabayashi等，《脑研究》21，55-61(1994))或脊髓液(参见L.Tseng等，《欧洲药理学杂志》258，R1-3(1994)；R.Raffa等，《欧洲药理学杂志》258，R5-7(1994)；F.Gillardon等，《欧洲神经科学杂志》6，880-884(1994))的有限区域。鉴于这些方法的侵入性，在临床上存在应用局限。全身性给予反义寡核苷酸也引起药理学应用的明显问题，不只是难以到达疾病侵害的组织。相反，肺脏是应用反义寡核苷酸的极好的潜在靶器官，因为它的进入方式是非侵入性的并且具有组织特异性。另外，可能由于肺脏布满主要由阳离子脂类构成的表面活性剂，而众所周知阳离子脂类在其它系统中可促进细胞对ODN的摄取，所以与其它活体靶器官或组织相比，肺脏可作为反义ODN治疗的极合适的靶器官。然而，输送反义制剂到达肺部的技术有待发展，而在肺部应用反义制剂可能存在的问题尚有待探索。腺苷是参与中间代谢和调节生理活性的一种嘌呤，被认为是一种神经调节因子。这种核苷参与多种局部调节机制，尤其是在CNS的突触和外周神经元效应器的连接部。在CNS，腺苷被认为可抑制多种神经递质(去甲肾上腺素，5-羟色胺，GABA，乙酰胆碱，多巴胺，谷氨酸盐等)的释放，抑制神经传导，减弱神经元放电，诱导脊髓痛觉缺失，并且具有抗焦虑的特性(E.S.Ben-Soreket等，《内科学文献》153，2701-2702(1993))。在心脏中，已知腺苷可降低房室(AV)传导，抑制起搏活性，具有抗心律失常效应，调节自主控制，并且触发前列腺素的合成与释放。M.K.Church等，《变态反应和临床免疫学杂志》92，190-194(1993)。它还具有很强的血管舒张效应，并可调节血管的紧张性。S.T.Holgate等，《纽约科学院年鉴》629，227-236(1991)。作为治疗用药，腺苷用作治疗室上型心动过速的抗心律失常剂近来取得了相当成功。参见C.G.Degroff和M.J.Silka，《儿科杂志》125，822-823(1994)；I.Drake等，《人体实验毒理学》13，263-265(1994)。然而，有文献报道腺苷治疗存在许多副作用。参见A.Aggarwal等，《麻醉学》79，1132-1135(1993)；K.K.Burkhart，《美国急诊医学杂志》11，249-250(1993)；S.K.Srinivasan和P.J.Iversen，《临床实验分析杂志》9，129-137(1995)；C.A.Stein等，《药理和治疗》52，365-384(1991)；B.B.Fredholm等，《药理学综述》46，143-156(1994)；H.Saito等，《血液》66，1233-1240(1985)。特别是哮喘患者显示对腺苷和腺苷单磷酸非常敏感。参见J.H.Butterfield等，《白血病研究》12，345-355(1988)；CLONETICS标准人体细胞系统手册(1995)；R.W.Wagner，《自然》372，333-335(1994)。用腺苷治疗室上型心动过速的哮喘患者会诱导产生严重至几乎致命的支气管痉挛。参见S.Tabor，《当代分子生物学最新方法》卷1，Section3.10.2(JohnWiley & Sons，1987)；J.H.Weiss，同前，Section6.2.2。与之类似，使用对尘螨过敏的人类哮喘的兔模型，也对雾化吸入腺苷产生明显的支气管收缩反应；而非哮喘型兔子则对腺苷无反应。S.Ali等，《药剂与作用》37，165-176(1992)。最近采用这种模型的研究提示，哮喘过程中由腺苷诱导的支气管收缩和支气管过度应答主要是通过刺激腺苷受体来介导。S.Ali等，《药理学实验治疗杂志》268，1328-1334(1994)；S.Ali等，《美国生理杂志》266，L271-277(1994)。因此腺苷禁用于有哮喘者(占美国成年人口的10％和美国儿童人口的15％)的肺部。由于各种反义ODN一般包含所有四种碱基对，即腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶，因此在这些发生过度应答的呼吸道中，它们的降解产物会产生游离的脱氧腺苷单磷酸。脱氧腺苷单磷酸与腺苷单磷酸的差别仅在于前者含糖部分的3’碳缺失了一个氧原子。专利技术概述本专利技术第一方面是给需要治疗的患者治疗呼吸道疾病的方法。该方法包括向患者肺部给予有效治疗呼吸道疾病剂量的反义寡核苷酸，反义寡核苷酸基本不含腺苷。本专利技术第二方面是药物组合物，包括基本不含腺苷的反义寡核苷酸，其剂量足以有效治疗呼吸道疾病，同时还包括适合药用的载体。本专利技术第三方面是使用上述基本不含腺苷的反义寡核苷酸制备药物，治疗需要接受此种方法治疗的患者的呼吸道疾病。附图简述附图说明图1-4证明了反义寡核苷酸能够被利用作为治疗或预防呼吸道疾病的有效药物。图1阐明了A1腺苷受体反义寡核苷酸和错配的对照反义寡核苷酸对兔子模型中支气管道的动力顺应性的不同作用。图2以经A1腺苷受体反义寡核苷酸治疗后的呼吸道组织中A1和A2腺苷受体表达数目作为参考，阐明了A1腺苷受体反义寡核苷酸的特异性。图3用图形方式说明，雾化吸入的脱氧腺苷单磷酸盐对于过敏性兔子患有哮喘的呼吸道是一种强力的支气管收缩剂。图4以图形方式说明，雾化吸入含有腺苷的硫代磷酸脱氧寡核苷酸具有支气管收缩效应，而不含有腺苷的脱氧寡核苷酸则无此效应。专利技术详述核苷酸序列在此仅以从5’端到3’端方向、从左至右，以单链形式表示。核苷酸和氨基酸在此按照IUPAC-IUB生物化学命名委员会推荐的方式，或(对氨基酸)按照37CFR 1.822及已建立方法，以三字符表示。参见，例如《专利申请者手册》99-102(1990年11月)(美国专利与商标局，Office of the Assistant commissionerfor Patents，Washington，D.C.20231)；Hudson等的美国专利号4,871,670 Col.3 20-43行(申请人明确指出在此公开的此专利文献和所引用的其它专利文献均作为参考)。本专利技术的方法可被用于对各种原因的患者进行呼吸道疾病治疗。其目的在于反义化合物的腺苷含量被除去或减少，以防止反义化合物降解时释放出腺苷。这种释放可能会导致呼吸道过度反应的病人产生严重的、甚至是威胁生命的支气管收缩。可用于本专利技术方法治疗的呼吸道疾病的实例包括囊性纤维变、哮喘、慢性阻塞性肺病、支气管炎和其它具有炎症反应特点的呼吸道疾病。A1和A3受体的反义寡核苷酸据证明有下调细本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：J·W·尼塞，W·J·梅茨格，
申请(专利权)人：东卡罗来纳大学，
类型：发明
国别省市：