肺活素制造技术

本发明专利技术涉及一种从动物肺脏中提取出生物活性成分用于预防和治疗呼吸系统疾病的组合物。含有分子量小于２０ＫＤａ的组合物，主要成分为多肽、核酸，生物活性特征能够在内外刺激单核细胞和巨噬细胞吞噬功能；能够调节ＩＬ－１和ＩＬ－２等淋巴因子产生。本发明专利技术提供一种能够激活巨噬细胞的物质，其目的在于调节机体免疫功能，改善肺功能指标。（*该技术在2017年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种从动物肺脏中提取出生物活性成分用于预防和治疗呼吸系统疾病的组合物，原名肺细胞活化素，简称肺活素，其英文名称Pulmonary Cell Active Fartor(简称PCAF)。在治疗哮喘等呼吸系统疾病中，以往单独使用支气管舒张药物进行治疗是不够全面的，对于中、重度哮喘，仅依靠规律地使用支气管舒张剂(如β2激动剂)甚至是有害的，因为β2激动剂无抗炎作用，单纯对症治疗会掩盖炎症发展，使AHR加重，因而必须联合应用抗炎药物治疗。在应用抗炎药物治疗后，虽然哮喘得到缓解或预防措施得以暂时控制，但大多数患者存在轻重度或间隔长短不等的复发，这主要是由于抗菌素对肺组织没有修复和促再生作用，所以复发率居高不下，出现停药犯病现象，专家普遍认为哮喘病人的疗效与巨噬细胞对各种药物的易感程度有关。针对以上提出的问题，本专利技术提供一种能够激活巨噬细胞的物质，其目的在于调节机体免疫功能，改善肺功能指标。本专利技术是通过以下技术方案来实现的用于预防和治疗呼吸系统疾病的肺活素，含有分子量小于20KDa的组合物，并且具有下列特性1.1 可从哺乳动物肺脏组织提取；1.2 组合物的主要成份多肽、核酸；1.3 生物活性特征1.3.1能够在体内外刺激单核细胞和巨噬细胞吞噬功能；1.3.2能够调节IL-1和IL-2等淋巴因子产生。此外，肺活素的技术特征还有2.1 大分子蛋白质试验—磺柳酸法测试其蛋白定性为阴性。2.2 本组合物的水溶液经190-400nm紫外分光扫描可见两个峰，即205±10nm，260±10nm处，两峰中间的谷位在235±10nm处。2.3 本组合物的水溶液经高效液相色谱法分析，有三、四个主要吸收峰，其主峰的相对面积百分比在40％以上。肺活素能够保护动物和人的肺与支气管；能够修复动物和人的肺与支气管的损伤；促进人肺和支气管组织细胞的再生，从而增强抗菌素疗效；能在体外促进组织细胞生长。肺活素从新生小牛的肺脏组织中提取，并能预防和治疗慢性支气管炎、哮喘、肺癌、肺气肿、肺结核、肺炎、呼衰、支气管扩张、肺脓肿等呼吸系统疾病。制备肺活素的方法，其特征在于1.清洗新鲜或冰冻保存的哺乳动物肺脏；2.将肺脏组织细胞进行破碎；3.然后加入肺重量0.5-3.0倍的蒸馏水；4.分离及澄清；5.将分离及澄清后的产物提取；6.除菌、分装；7.将肺活素制成水针或冻干粉针。制备方法采用高速组织捣碎机、胶体磨等机械和超声方法进行肺脏组织破碎。制备方法在破碎后加入蒸馏水的产物可反复冻融。制备方法采用超滤方法将分离及澄清后的产物提取，超滤分子量截留20KDa以下的物质。制备方法的成品标示量采用多肽含量标示法、核酸含量标示法和生物活性单位标示法。本专利技术的优点是1、肺活素作为肺细胞生长因子成份的一部分，补充了哮喘病人生长细胞因子的缺如，中医学理论以脏补脏；现在医学观点以某种动物脏内的细胞因子可以补充人该种脏器内的细胞因子是十分理想的，因为它重建了细胞因子网络的完整，这是现有技术所达不到的。2、肺活素可增强肺内巨噬细胞吞噬功能和分泌功能—这是肺内最重要的防御和保护体系，如此促进吞噬和消灭引起肺部疾病的致敏原和致炎细菌及病毒，既控制了I型变态反应的发生，减轻了气道慢性炎症的发展，又减少了支气管平滑肌的收缩与痉挛。3、动物实验和临床应用未见任何毒副反应。下面通过实施方式对本专利技术加以具体描述肺活素为新生小牛的肺脏提取液，新鲜的胎肺经清洗、破碎，破碎采用高速组织捣碎机、胶体磨等机械或超声方法进行肺脏组织破碎，然后加入肺重量0.5-3.0倍的蒸馏水，可反复冻融，然后进行分离及澄清；分离的方法可采用布过滤、筛网过滤、滤纸过滤、滤斗过滤、滤板过滤；澄清采用离心、甩干等方法。将分离及澄清后的产物提取；提取采用超滤方法和其它物理及化学方法，超滤分子量截留20KDa以下的物质。然后进行除菌、分装；将肺活素制成水针或冻干粉针。成品标示量方法采用多肽含量标示法、核酸含量标示法和生物活性单位标示法。所得的肺活素，具有以下技术特征1.大分子蛋白质试验—磺柳酸法测试其蛋白定性为阴性。2.本组合物的水溶液经190-400nm紫外分光扫描可见两个峰，即205±10nm，260±10nm处，两峰中间的谷位在235±10nm处。3.本组合物的水溶液经高效液相色谱法分析，有三个主要吸收峰，其主峰的相对面积百分比在40％以上。下面通过各项实验对本专利技术作进一步阐述一、药理、药效、毒理研究1、一般药理本品对猫进行了一般药理试验，试验表明肺活素对动物的神经系统、心血管系统(心率、心电图、血压等)和呼吸系统(频率、深度等)均无明显影响。2、药效学试验肺活素增强大白鼠肺支气管灌洗液中巨噬细胞吞噬功能。肺活素有促进小白鼠IL-1生成的功能。肺活素有促进小白鼠IL-2生成的功能。3、毒理研究热原质试验严格按《中华人民共和国药典》二部进行，合格。异常毒性试验小白鼠尾静脉注射本品0.5ml，无异常，合格。安全性试验豚鼠腹腔注射本品5ml，健康增重，合格。过敏试验按《中华人民共和国药典》二部细胞色素C溶液过敏试验方法进行试验，合格。延长一倍时间攻击试验亦合格。降压物质检查严格按《中华人民共和国药典》二部进行的，不含降压物质。急性毒性试验两种动物(小白鼠、大白鼠)进行三种途径(即肌注、静注、腹腔注)给药，证明625以上倍于人体用量，无任何毒性反应，安全可靠。长期毒性试验80只大白鼠、12只狗，分别以三种剂量，两种途径给药十二周，观察一般体征、体重、外观、行为、尿常规、血常规、肝肾功能，肉眼观察和病理检查，未发现毒性反应，证明长期用本品无毒性反应，安全可靠。局部刺激性观察大白鼠局部刺激试验未发现注射部位皮肤异常。毒理结论经各种毒理试验证明，肺活素安全范围极大，短、长期应用不会有明显毒性反应。总结 肺活素安全性 </tables>二、肌注肺活素对小白鼠慢性支气管炎疗效的实验研究(摘要)目的本研究以小白鼠为实验对象，经肌肉注射给药，研究了肺活素对小白鼠慢性支气管炎的疗效。1、慢性气管炎模型小白鼠吸入SO2300-400ppm，每天2小时，每周5天，共6周，用病理方法确定气管炎的形成。2、给药方法分预防性给药和治疗性给药。预防性给药染毒开始即肌肉注肺活素，设2个剂量组，即高剂量组和低剂量组，每周5天，给药共6周。治疗性给药动物染毒6周后，气管炎模型已经建立，给予肺活素治疗，亦分为高剂量组和低剂量组，每周5天，共给药4周。此时SO2浓度降至100-200ppm的维持量。另设中毒对照(染毒不给治疗)和空白对照组(不作任何处理在同样条件下饲养)。3、实验结果无论是预防性给药还是治疗性给药。给药组动物在体重增长、平均咳嗽次数和肺脏器系数等项指标均比中毒对照组有明显改善；用光学显微镜对肺组织作病理检查，治疗组肺组织炎症病程度较轻；对气管作透射电镜和扫描电镜观察显示，治疗组气管粘膜上皮纤毛细胞的损伤亦较轻。综上所述，肺活素对小白鼠吸入SO2所致的气管炎均有较好的预防和治疗作用1、气管的扫描电镜观察正常小鼠气管扫描电镜观察结果如附图说明图1所示，可见细胞饱满，纤毛清晰自然。而中毒对照组气管的扫描电镜如图2所示，见细胞收缩、纤毛脱落且纤毛少而短。图3、4、5、6为给药组小鼠气管扫描电镜图，与图2本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于预防和治疗呼吸系统疾病的肺活素，含有分子量小于２０ＫＤａ的组合物，并且具有下列特性：１．１ 可从哺乳动物肺脏组织提取；１．２ 组合物的主要成份：多肽、核酸；１．３ 生物活性特征：１．３．１ 能够在体内外刺激单核细胞和 巨噬细胞吞噬功能；１．３．２ 能够调节ＩＬ－１和ＩＬ－２等淋巴因子产生。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘柏宏，杜群君，皮建新，
申请(专利权)人：刘柏宏，
类型：发明
国别省市：89[中国|沈阳]