组合物及其用途制造技术

一种用于药品的、一种蛋白与多个表位的合成缀合物，其中，所述表位能够结合于异种天然抗体。（*该技术在2016年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及移植领域，具体地讲，涉及预防异种移植物的超急性排斥或至少降低排斥的强度或速度。将猪器官(例如，心脏、肾脏)移植到灵长类体内，会在受体内触发快速的(短于10分钟)超急性排斥，从而损坏供体组织。超急性排斥的第一步被视为是受体预形成的“异种天然抗体”(XNA)与供体组织血管的结合，后者又激活受体的补体系统。已有有力的证据表明所述抗体的主要目标是半乳糖α1，3半乳糖(Galα1，3Gal)(Sandrin等，Prac，Natl.Acad.Sci USA 9011391(1993))。这是一种在猪的组织中被普遍表达的糖，但人体中缺乏(Galili等，Prac Natl Acad SciUSA 841369-1373(1987))。这种二糖是由细胞表面糖蛋白和糖脂生成的寡糖链的末端修饰形式。已鉴定了多种能结合XNA，并因此可能携带Galα1，3Gal的猪内皮蛋白(Platt等，Transplantation 57327-335(1994))。已知大部分针对猪组织的XNAs能特异结合Galα1，3Gal。含有该结构的寡糖(B-三糖Galα1，3Galβ1，4GlcNAc；B-二糖Galα1，3Gal)是人血清对猪内皮细胞细胞毒性作用的最佳抑制剂(Neethling等，Transplantation 57959-963(1994))。其它α-半乳糖基化糖类(非1，3-连接的)也能抑制，但效果差得多。Cooper及其同事研究了输注α-半乳糖基化糖类阿拉伯半乳聚糖和蜜二糖至狒狒中是如何影响获自所述动物的血清体外杀伤猪内皮细胞的能力(Ye等，Transplantation 58330-337(1994))。产生了一定程度的保护，但不足以达到显著延长异型猪心异种移植物寿命的程度。另外，输注大量糖类可能会使动物生病(多尿、呼吸困难)。Cooper等研究组还试图用由Syntesome GmbH，FineBiochemicals，(Heimdall Str.4，D-81739 Munich，Germany)出售的B-二糖-聚丙烯酰胺(PAA)在体外抑制由抗体介导的猪细胞裂解(Riebin等，Xenotransplantation 298-106(1995))。所述二糖能以一定的取代密度结合于聚丙烯酰胺上，各自保护猪组织免受侵袭的能力不同。然而，尚没有对PAA缀合物和游离二糖的保护能力进行直接比较的报导。WO 93/03735披露了各种据说可用于减轻抗体介导的异种移植排斥的方法和组合物。在一种实施方案中，将异种抗原结合在固相支持体上，并证明可用于患者血液的灌注，以便除去异种抗体。据说合适的固相支体的例子有硅石、合成硅酸盐如多孔玻璃、生物硅酸盐如硅藻土，含有硅酸盐的矿物如高岭土，以及合成聚合物如聚苯乙烯、聚丙烯和多糖。按照本专利技术，提供了一种用于药品的、一种蛋白和多个表位的合成缀合物；其中，所述表位能被异种天然抗体结合。本文所用“蛋白”一词包括具有肽键的组分，如肽(例如聚赖氨酸)、多肽和完全蛋白。因此，不能以过于局限的方式理解这一术语。如果必要，可以对用于本专利技术的蛋白的特性(例如电荷特性)加以修饰。例如，在聚(L-赖氨酸)中的赖氨酸ε-氨基的甲氧基乙氧基乙酰化所产生的多肽阳离子电荷会减弱它与组织之间的非特异相互作用(Gasho，A.，等，Biol.Pharm.Bull.17275-282)1994))。本文所用“合成的”一词是指该缀合物不是天然存在的。“缀合物”一词是指蛋白与表位连接在一起。本文所用“异种天然抗体”一词包括(a)已存在于宿主中并能参与该宿主中的异种移植物排斥作用的抗体(这种抗体被认为与异种移植物超急性排斥有关。)和(b)由于异种移植物在宿主中的出现而在该宿主中新合成的抗体(这种抗体有时被称为“异种反应激发的抗体”，并被视为与异种移植物急性排斥有关)。本专利技术人业已发现，本专利技术的缀合物在结合异种天然抗体方面是高效的，而且在结合IgM方面特别有效。这一发现十分重要，因为IgM参与了排斥的初期阶段，而且通常被认为是这一过程中最重要的一类免疫球蛋白。因此，阻止IgM与表达在异种移植物上的表位的结合在预防或缓解排斥方面是一个重大进展。由于在一个蛋白分子上可以结合大量的表位，相对于应用单个表位而言，为患者免疫系统呈递特定数量表位所需的总分子数量可明显减少。该缀合物可用于避免患者体内的渗透扰动或产生较少的渗透扰动(与游离的糖比较)，因为渗透性直接与溶液中分子的浓度相关。理想的是，所述表位可结合于参与取自猪体内的异种移植物的排斥(例如，急性或超急性排斥)的人异种天然抗体上。不过，所述表位也可结合于参与取自其它动物体内的异种移植物的排斥的人异种天然抗体上。因此，优选的表位通常不存在于成人中。随后将讨论可以使用的具体表位。本专利技术包括一种通过给异种移植物受体服用所述缀合物来预防异种移植物排斥或至少减弱排斥的强度或速度的方法。(可以在植入异种移植物之前、之中和/或之后服用所述缀合物。最好是在植入之前服用，例如，在移植手术前24小时内服用。随后再服用加强剂量)。该缀合物可结合存在于受体内的异种天然抗体，因此，可以阻止这些抗体与存在于异种移植物上的表位结合。这种阻止作用可从受体的循环系统中除去很多游离的异种天然抗体，因而这些抗体不能通过与异种移植物上的表位结合而自由地激活补体。补体激活被认为是异种移植物超急性排斥的一个重要因素，因此，可用本专利技术的缀合物获得的阻止作用是一个重要方面。实际上，即使这种阻止作用是短暂的(例如，仅持续几天)，但在本领域中已经证实它仍是十分有效的，因为可能发生接纳异种移植物的现象。Rieben等提到过这一点(同上文)，其中，用ABO系统描述了一种类似情况。在任何情况下均可监测受体，并在必要时提供额外的本专利技术缀合物。本专利技术缀合物可以作为耐受原，即作为可以减弱对随后的半抗原攻击的免疫原性的分子。因此，在植入猪异种移植物之前服用本专利技术缀合物，可以通过耐受性而抑制对移植物本身的抗体反应。当移植物已经植入后，可以服用该缀合体通过抑制作用(即减少抗半抗原抗体的产生)来抑制对移植物的抗体反应。 作为
技术介绍
，可以参考Dintzis有关多价聚丙烯酰胺缀合物的著作(例如，Dintzis，R.Z.等，J.Immunol.1312196-2203(1983))。已证实呈递多个半抗原基团的缀合物可以是免疫原性的(即可刺激抗半抗原抗体产生)或抑制性的(在免疫原性缀合物存在的条件下减少抗半抗原抗体的产生)。该缀合物是免疫原性的还是抑制性的取决于缀合物大小和半抗原密度。如果在用免疫原性缀合物攻击之前服用一种抑制性缀合物可以降低免疫原性缀合物的免疫原性，则该抑制分子被称为耐受原性的。上述所有作用(免疫原性、抑制、和耐受原性)被认为是通过竞争B-细胞上的半抗原受体而实现的。耐受原性抑制分子被设计成即使在从周围环境中清除后仍能结合在B-细胞受体上。用于本专利技术的缀合物可以任何适当技术给患者服用，但优选通过输注服用(滴注法)。剂量水平可由本领域技术人员确定，并要依据以下因素，如患者体重、异种移植物大小、缀合物中蛋白的大小、缀合物中表位的数量、表位的间距等。在不受任何理论约束的情况下，在实施例中所涉及到的B-三糖-HSA的典型剂量可本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：R·G·沃纳，
申请(专利权)人：艾姆特兰有限公司，
类型：发明
国别省市：