一种ＨＥＲ２／ＮＥＵ基因的原位杂交检测试剂盒及其检测方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种ＨＥＲ２／ＮＥＵ基因的原位杂交检测试剂盒，包括杂交探针、标记物，所述的杂交探针序列如ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ．１所示。本发明专利技术还提供了一种ＨＥＲ２／ＮＥＵ基因原位杂交检测方法。另外，本发明专利技术还提供了试剂盒在制备检测乳腺癌疾病药物中的应用。本发明专利技术优点在于：本发明专利技术提供的试剂盒具有灵敏度高、特异性强的特点。本发明专利技术的检测方法操作方便、简单，能在区级以上医院普遍使用和推广。

【技术实现步骤摘要】
一种HER2/NEU基因的原位杂交检测试剂盒及其检测方法和应用
本专利技术涉及一种试剂盒，具体地说关于一种HER2/NEU基因的原位杂交检测试剂 盒及其检测方法和应用
技术介绍
乳腺癌是一种严重危害妇女健康的恶性肿瘤，近年来发病率稳定上升且趋年轻 化，发病率在女性肿瘤中居第三位。据世界范围统计，全球每年约有120多万人患乳腺癌， 每年死于乳癌人数20万，工业发达国家乳腺癌进一步增加，根据美国癌症协会(ACS)的报 告，美国每年超过20万人接受乳癌治疗，其中约四万人被夺去生命。从2006中国乳腺癌内 分泌治疗高峰论坛上了解到，中国是乳腺癌发病率增长最快的国家之一，我国每年有约20 万名妇女患乳腺癌，中国乳腺癌发病率每年约增长3% ；在京、津、沪等大中城市，乳腺癌已 跃居女性恶性肿瘤之首。研究显示，乳腺癌发病与家族遗传有密切关系，特别是犹太人妇女 有一种特殊的BRCAl基因变异与家族性乳癌密切相关，家族遗传导致的乳癌大约占所有病 例的5%-10，有乳癌家族史同时有BRCAl基因变异的妇女，她们一生中有85%机率患乳癌， 而且有50%的机率患妊巢癌。同时发现，BRCAl基因无变异的大部分妇女患乳癌，各国乳癌 的发病率都在升高。乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，据资料统计，发病率占全身各种 恶性肿瘤的7-10%，在妇女仅次于子宫癌。它的发病常与遗传有关，以及40-60岁之间，绝 经期前后的妇女发病率较高。仅约1-2%的乳腺患者是男性。通常发生在乳房腺上皮组织 的恶性肿瘤。是一种严重影响妇女身心健康甚至危及生命的最常见的恶性肿瘤之一。乳腺癌从癌前变到形成癌症，需要几年时间，如何做到早期检测、诊断、预后的检 测及诊治后的复发、转移早期检出是降低发病率和死亡率的关键。HER2/neu是由癌基因ErbB2/neu编码的具有酪氨酸蛋白激酶活性的跨膜糖蛋白， 分子量为185ku，属表皮生长因子受体(epidermal growth factorreceptor, EGFR)家族， 具有自动磷酸化作用.乳腺癌、非小细胞肺癌(nonsmall celllung cancer,NSCLC)等恶性 肿瘤存在HER2/neU过表达，与肿瘤的发生、转移、血管形成及化疗耐药等有关。大量的研究 文献报道，在多数癌症(卵巢癌、乳癌、肺癌、肾癌、结肠癌、胃癌等)，常有HER2/neU基因大 量表达的现象。HER2/neU大量表现的癌症常伴随着较强的转移能力、血管新生能力、抗药性 及较差治愈率等特性，因此HER2/neU成为癌症诊断和治疗上一个重要的标的。特别是乳腺 癌，约有15-40%的病人HER2/neu基因表达增高。(随着分子生物技术日益完善，功能基因组学，癌症基因组学等研究的深入展开， 至今，我们已有可能在基因水平上做更精确的早期诊断，在癌变前期或癌细胞形成(单克 隆时)就能做到早期预测诊断。本专利技术采用核酸原位杂交技术检测HER2/NEU基因，对乳 癌的早期基因水平的预测有非常重要的临床意义。HER2/NEU 序列号NM-001005862， 4816BP,17q21. 1“，cds :521…·4198bp。本专利技术的原位杂交技术(in situ hybridization)是将分子生物学与细胞化学技术结合起来，以标记的核酸分子为探针，在组织细胞原位检测特异性核酸分子的技术。其原 理是使含有特异序列、经过标记的核酸单链(即探针)，在适宜条件下与组织细胞中的互补 核酸单链即靶核酸发生杂交，再以放射自显影或免疫细胞化学方法对标记探针进行探测， 从而在细胞原位显示特异的DNA或RNA分子。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术中的不足，提供一种HER2/NEU基因的原位杂交检 测试剂盒的用途。本专利技术的再一的目的是，提供一种HER2/NEU基因的原位杂交检测试剂盒。本专利技术的另一的目的是，提供一种HER2/NEU基因的原位杂交检测方法。为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案是一种HER2/NEU基因的原位杂交检测试剂盒在制备检测乳腺癌疾病药物中的应 用，所述的试剂盒包括杂交探针、标记物，所述的杂交探针序列如SEQ ID NO. 1所示。所述的杂交探针序列如SEQ ID NO. 1所示的RNA序列。所述的标记物选自放射性核素或非放射性标记物。所述的放射性核素选自3H、35S、125I或32P中的一种。所述的非放射性标记物选自生物素、地高辛、碱性磷酸酶、辣根过氧化酶或荧光素 中的一种。所述的非放射性标记物优选自地高辛。所述的试剂盒还包括增效剂，所述的增效剂是碱性磷酸酶抗体。为实现上述第二个目的，本专利技术采取的技术方案是一种HER2/NEU基因的原位杂交检测试剂盒，包括杂交探针、标记物，其中所述的 杂交探针序列如SEQ ID NO. 1所示，所述的标记物选自放射性核素或非放射性标记物。为实现上述第三个目的，本专利技术采取的技术方案是一种HER2/NEU基因的原位杂交检测方法，该方法包括以下步骤a、将试剂盒中的杂交探针与底物中待测RNA接触，形成杂交复合体；b、检测a步骤得到的杂交复合体。本专利技术的诊断试剂盒的组份是由杂交探针，杂交液，显色剂，增效剂等组成。本试 剂盒的核酸杂交原理是分子生物学业内人士均熟知，具体操作步骤是标本处理、预杂交、杂 交、免疫组化染色、镜下进行定量分析、结果报告，其中杂交的具体步骤包括仪器操作1).将待测标本放入反应槽中；2).仪器自动弃去液体，自动加消化液；3).仪器自动弃去液体，自动后固定；4).仪器自动弃去液体，自动预杂交(42°C )；5).仪器自动弃去液体，自动清洗；6).仪器自动弃去液体，自动杂交(42°C )；7).仪器自动弃去液体，自动清洗；8).仪器自动弃去液体，自动与DIG抗体培养(室温)9).仪器自动弃去液体，自动清洗，显色；10).取出封片镜检。本专利技术优点在于1、本专利技术提供的试剂盒具有灵敏度高、特异性强的特点。2、本专利技术的检测方法操作方便、简单，能在区级以上医院普遍使用和推广。3、本专利技术的临床意义是更早期跟踪检测乳腺癌发生动态过程，以及用于乳腺癌预 防医学的检测和筛选工具。本专利技术的诊断试剂盒与临床上其它检测癌胚蛋白标志物，以及 影像医学检查有显著不同。本专利技术可以在基因水平上检测HER2/NEU异常表达，在影像医学 检查及其它检查未发现占位性乳腺癌病灶之前，癌症生化指标未产生异常之前，亦未形成 肿块之前，能及早做到以上基因表达异常的信息采集，给临床乳腺癌病患一个真正的预后 早期诊断。这样才有可能实施乳腺癌的早期诊断、早期预防、早期治疗，有可能从源头上彻 底根治乳腺癌恶疾。附图说明图1是本专利技术实施例中乳腺癌症病人HER2/NEU基因表达图片。图2是正常乳腺HER2/NEU基因表达图片。具体实施方式下面结合附图对本专利技术具体实施方式作详细说明。实施例1一种HER2/NEU基因的原位杂交检测试剂盒，包括杂交探针、标记物、增效剂，其 中，所述的杂交探针序列如SEQ ID NO. 1所示。杂交探针用地高辛标记。试剂盒中的其它 液体和标本组成如下消化液100 μ 1/管1管/盒无色透明液体保护液100 μ 1/管1管/盒无色透明液体预杂交液1300 μ 1/ 管2管/盒无色透明液体正义杂交液10μ 1/管1管/盒无色透本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种ＨＥＲ２／ＮＥＵ基因的原位杂交检测试剂盒在制备检测乳腺癌疾病药物中的应用，所述的试剂盒包括杂交探针、标记物，所述的杂交探针序列如ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ．１所示。

【技术特征摘要】
一种HER2/NEU基因的原位杂交检测试剂盒在制备检测乳腺癌疾病药物中的应用，所述的试剂盒包括杂交探针、标记物，所述的杂交探针序列如SEQ ID NO.1所示。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的杂交探针序列如SEQID NO. 1所 示的RNA序列。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于所述的标记物选自放射性核素或非 放射性标记物。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于所述的放射性核素选自3H、35S、125I或32P 中的一种。5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于所述的非放射性标记物选自生物素、地高 辛、碱性磷酸酶、辣根过氧化酶或荧光素中的一种。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于所述的非放射性标记物优选自地高辛。...

【专利技术属性】
技术研发人员：张云福，裘建英，
申请(专利权)人：芮屈生物技术上海有限公司，
类型：发明
国别省市：31