一种Ｍａｓｐｉｎ基因的原位杂交检测试剂盒及其检测方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种Ｍａｓｐｉｎ基因的原位杂交检测试剂盒，包括杂交探针、标记物，所述的杂交探针序列如ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ．１所示。本发明专利技术还提供了一种Ｍａｓｐｉｎ基因原位杂交检测方法。另外，本发明专利技术还提供了试剂盒在制备检测乳腺癌疾病药物中的应用。本发明专利技术优点在于：本发明专利技术提供的试剂盒具有灵敏度高、特异性强的特点。本发明专利技术的检测方法操作方便、简单，能在区级以上医院普遍使用和推广。

【技术实现步骤摘要】
一种Maspin基因的原位杂交检测试剂盒及其检测方法和应用
本专利技术涉及一种试剂盒，具体地说关于一种Maspin基因的原位杂交检测试剂盒 及其检测方法和应用
技术介绍
乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，据资料统计，发病率占全身各种恶性肿瘤 的7-10%，在妇女仅次于子宫癌。它的发病常与遗传有关，以及40-60岁之间，绝经期前后 的妇女发病率较高。仅约1-2%的乳腺患者是男性。通常发生在乳房腺上皮组织的恶性肿 瘤。是一种严重影响妇女身心健康甚至危及生命的最常见的恶性肿瘤之一，乳腺癌是一种 严重危害妇女健康的恶性肿瘤，近年来发病率稳定上升且趋年轻化，发病率在女性肿瘤中 居第三位。据世界范围统计，全球每年约有120多万人患乳腺癌，每年死于乳癌人数20万， 工业发达国家乳腺癌进一步增加，根据美国癌症协会(ACS)的报告，美国每年超过20万人 接受乳癌治疗，其中约四万人被夺去生命。从2006中国乳腺癌内分泌治疗高峰论坛上了 解到，中国是乳腺癌发病率增长最快的国家之一，我国每年有约20万名妇女患乳腺癌，中 国乳腺癌发病率每年约增长3% ；在京、津、沪等大中城市，乳腺癌已跃居女性恶性肿瘤之 首。研究显示，乳腺癌发病与家族遗传有密切关系，特别是犹太人妇女有一种特殊的BRCA1、 BRCA2基因变异与家族性乳癌密切相关，家族遗传导致的乳癌大约占所有病例的5% -10， 有乳癌家族史同时有BRCAl和BRCA2基因变异的妇女，她们一生中有85%机率患乳癌，而且 有50 %的机率患妊巢癌。同时也发现，BRCAl和BRCA2基因无变异的大部分妇女患乳癌，亚 洲的大部分女性乳癌的发病与BRCAl和BRCA2基因变异无关，各国乳癌的总发病率都在升 高，由此可见，乳癌的发病机制是多因素参与而致。乳腺癌从癌前变到形成癌症，需要几年时间，如何做到早期检测、诊断、预后的检 测及诊治后的复发、转移早期检出是降低发病率和死亡率的关键。Maspin基因表达于人正常乳腺上皮细胞中，但在大多数乳癌细胞中不表达，并且 Maspin基因在乳癌发生过程中起着重要的作用，国内邵志敏等研究表明乳腺上皮细胞分泌 大量的Maspin蛋白，去除该蛋白的人类肌上皮细胞不再具有抑制乳癌细胞体外浸润的能 力。提高Maspin蛋白在乳腺肌上皮细胞抑制乳癌细胞体的浸润能力方面起重要作用。随着分子生物技术日益完善，功能基因组学，癌症基因组学等研究的深入展开，至 今，我们已有可能在基因水平上做更精确的早期诊断，在癌变前期或癌细胞形成(单克隆 时)就能做到早期预测诊断。这一技术的实施可能是肿瘤诊治方法的一次革命。做到更科 学的早期诊断、早期预防、早期治疗，希望彻底治愈癌症。本专利技术采用吓哪位杂交技术检测 Maspin基因，对乳腺癌地早期基因水平的诊断有十分重要的临床意义。本专利技术的原位杂交技术(in situ hybridization)是将分子生物学与细胞化学技 术结合起来，以标记的核酸分子为探针，在组织细胞原位检测特异性核酸分子的技术。其原 理是使含有特异序列、经过标记的核酸单链(即探针)，在适宜条件下与组织细胞中的互补核酸单链即靶核酸发生杂交，再以放射自显影或免疫细胞化学方法对标记探针进行探测， 从而在细胞原位显示特异的DNA或RNA分子。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术中的不足，提供一种Maspin基因的原位杂交检测 试剂盒的用途。本专利技术的再一的目的是，提供一种Maspin基因的原位杂交检测试剂盒。本专利技术的另一的目的是，提供一种Maspin基因的原位杂交检测方法。为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案是一种Maspin基因的原位杂交检测试剂盒在制备检测乳腺癌疾病药物中的应用， 所述的试剂盒包括杂交探针、标记物，所述的杂交探针序列如Maspin基因SEQ ID 基因序 列号:NM_002639,2633bp, 18q21. 3，cds :143…1270bp。所述的杂交探针序列如SEQ ID NO. 1所示的RNA序列。所述的标记物选自放射性核素或非放射性标记物。所述的放射性核素选自3H、35S、125I或32P中的一种。所述的非放射性标记物选自生物素、地高辛、碱性磷酸酶、辣根过氧化酶或荧光素 中的一种。所述的非放射性标记物优选自地高辛。所述的试剂盒还包括增效剂，所述的增效剂是碱性磷酸酶抗体。为实现上述第二个目的，本专利技术采取的技术方案是一种Maspin基因的原位杂交检测试剂盒，包括杂交探针、标记物，其中所述的杂 交探针序列如SEQ ID NO. 1所示，所述的标记物选自放射性核素或非放射性标记物。为实现上述第三个目的，本专利技术采取的技术方案是一种Maspin基因的原位杂交检测方法，该方法包括以下步骤a、将试剂盒中的杂交探针与底物中待测RNA接触，形成杂交复合体；b、检测a步骤得到的杂交复合体。本专利技术的诊断试剂盒的组份是由杂交探针，杂交液，显色剂，增效剂等组成。本试 剂盒的核酸杂交原理是分子生物学业内人士均熟知，具体操作步骤是标本处理、预杂交、杂 交、免疫组化染色、镜下进行定量分析、结果报告，其中杂交的具体步骤包括仪器操作1).将待测标本放入反应槽中；2).仪器自动弃去液体，自动加消化液；3).仪器自动弃去液体，自动后固定；4).仪器自动弃去液体，自动预杂交(42°C )；5).仪器自动弃去液体，自动清洗；6).仪器自动弃去液体，自动杂交(42°C )；7).仪器自动弃去液体，自动清洗；8).仪器自动弃去液体，自动与DIG抗体培养(室温)9).仪器自动弃去液体，自动清洗，显色；10).取出封片镜检。本专利技术优点在于1、本专利技术提供的试剂盒具有灵敏度高、特异性强的特点。2、本专利技术的检测方法操作方便、简单，能在区级以上医院普遍使用和推广。3、本专利技术的临床意义是更早期跟踪检测乳腺癌发生动态过程，以及用于乳腺癌预 防医学的检测和筛选工具。本专利技术的诊断试剂盒与临床上其它检测癌胚蛋白标志物，以及 影像医学检查有显著不同。本专利技术可以在基因水平上检测Maspin异常表达，在影像医学检 查及其它检查未发现占位性乳腺癌病灶之前，癌症生化指标未产生异常之前，亦未形成肿 块之前，能及早做到以上基因表达异常的信息采集，给临床乳腺癌病患一个真正的预后早 期诊断。这样才有可能实施乳腺癌的早期诊断、早期预防、早期治疗，有可能从源头上彻底 根治乳腺癌恶疾。附图说明图1是本专利技术实施例中乳腺癌症病人Maspin基因表达图片。图2是正常乳腺Maspin基因表达图片。具体实施方式下面结合附图对本专利技术具体实施方式作详细说明。实施例1一种Maspin基因的原位杂交检测试剂盒，包括杂交探针、标记物、增效剂，其中， 所述的杂交探针序列如SEQ ID NO. 1所示。杂交探针用地高辛标记。试剂盒中的其它液体和标本组成如下消化液100 μ 1/管1管/盒无色透明液体保护液100 μ 1/管1管/盒无色透明液体预杂交液1300 μ 1/ 管2管/盒无色透明液体正义杂交液10μ 1/管1管/盒无色透明液体反义杂交液10μ 1/管1管/盒无色透明液体封闭液1000 μ 1/ 管1管/盒无色透明液体碱性磷酸酶抗体 μ /管1管/盒无色透明液体显色剂A175 μ 1/ 管1管/盒黄色液体显色剂B320 μ 1/ 管1管/盒无色透明本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种Ｍａｓｐｉｎ基因的原位杂交检测试剂盒在制备检测乳腺癌疾病药物中的应用，所述的试剂盒包括杂交探针、标记物，所述的杂交探针序列如ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ．１所示。

【技术特征摘要】
一种Maspin基因的原位杂交检测试剂盒在制备检测乳腺癌疾病药物中的应用，所述的试剂盒包括杂交探针、标记物，所述的杂交探针序列如SEQ ID NO.1所示。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的杂交探针序列如SEQID NO. 1所 示的RNA序列。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于所述的标记物选自放射性核素或非 放射性标记物。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于所述的放射性核素选自3H、35S、125I或32P 中的一种。5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于所述的非放射性标记物选自生物素、地高 辛、碱性磷酸酶、辣根过氧化酶或荧光素中的一种。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于所述的非放射性标记物优选自地高辛...

【专利技术属性】
技术研发人员：张云福，裘建英，
申请(专利权)人：芮屈生物技术上海有限公司，
类型：发明
国别省市：31