调节烟碱代谢的方法技术

调节个体体内烟碱代谢的方法，包括选择性抑制ＣＹＰ２Ａ６。（*该技术在2017年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及调节个体体内烟碱代谢的方法；调节个体体内烟碱代谢的组合物；治疗个体需要调节烟碱代谢的病情之方法；筛选调节个体烟碱代谢的物质之方法；及评估个体烟碱代谢的方法。
技术介绍
烟碱是存在于烟草内起维持烟草依赖性作用的主要生物硷。若干研究显示抽烟者调整抽烟行为尝试维持烟碱血中浓度因而维持脑中烟碱浓度恒定。使用不同烟碱含量的香烟(Finnegan等，1945)，烟碱替代疗法[Lucchesi等(静脉输注)，1967年；Jarvik等，1970年(摄取)，Kaslowski等，1975年；Russell等，1976年；Ebert等，1984年(烟碱口香糖)；Levin等，1994年(烟碱贴片)]，烟碱阻断(Stolerman等，1973年，Nemeth-Coslett等，1986年；Rose等，1994年)，及尿液pH改变(Benowitz等，1983年；1985年；Rosenburg等，1980年)的研究，显示可调节烟碱的摄取以防典型抽烟者血中烟碱浓度过高。研究提供明白证据显示抽烟者改变抽烟行为来调节烟碱血中浓度。因此，烟碱从体内清除率的变化，例如代谢变化，显著影响抽烟行为。过去数十年来已经广泛研究烟碱及其代谢产物。烟碱大部分在肝脏代谢(80％)，而较少在肺脏及肾脏代谢(Schielvelbein,1982年；Tuener,1975年)。烟碱的主要代谢产物为可替宁(cotinine)(Benowitz等，1994年)。烟碱主要经由二步骤式方法代谢成可替宁(附图说明图1)。该方法的第一步骤产生中间产物烟碱-△-1′(5′)亚铵离子(Peterson及Castagnoli,1988年，W1lliams等，1990年)，然后于肝脏微粒体，O2及NADPH存在下，经由胞质溶胶醛氧化酶反应进一步氧化(Hill等，1972年；Peterson等，1987年；Brandage等，1979年；Gorrod等，1982年)。细胞色素P450(CYP)系统参与烟碱代谢。CYP参与烟碱代谢的证据来自大鼠肝脏研究，其中重组纯化的CYP，显示特定抗体可抑制烟碱代谢。特别是，大鼠研究显示苯巴比妥可诱生CYP(亦即CYPs；,-2B1,-2B2,-2C6及-3A2)涉及烟碱代谢(Nakayama等，1982年，Hibberd及Gorrod1985年；Foih等J990年；Seaton等，1991及1993年)。12种接受试验的人类CYP形式中，CYP2B6显示最高烟碱氧化侮活性，而CYP2E1及CYP2C9显示中间活性(Flammang等，1992年)。McCracken等(1992年)证明人类CYP2B6及CYP2D6呈现烟碱转成可替宁的高度代谢速率，而CYP2E1对烟碱的催化活性未经捡测。有关CYP2E1及CYP2D6的结果与Flammang等(1992年)结果不吻合。因此，有关CYP对烟碱的亲和力仍有争议。CYP2B蛋白质于全部动物体及人体肝脏以低度表达(低于总肝脏CYP含量5％)，但其含量可藉暴露于多种不同化学品，包含原型CYP2B诱生剂苯巴比妥高度诱生(Ryan等，1990年；Guengerich等，1982b年)。人CYP2B6菌以不等浓度于不同个体表达。CYP2B6对班若派芮(benzopyere)，7-乙氧基香豆素，香豆素，乙氧基试卤灵(ethoxyresorufin)，戊氧基试卤灵(pentoxyresorufin)，乙基吗啡，班飞特明(benphetamine)，及苯胺的氧化活性不佳(Mimura等，1993年)。发现奥芬那君(Orphenadrine)，一种抗巴金森氏剂，为CYP2B6的特异性抑制剂(Reidy等，1992年；Chang等，1993年)。cDNA研究指示CTP2B6,CYP2C9,CYP206及CYP2E1可能有关的且提供CYP2A6于离体表达系统用于烟碱代谢可能起的作用(Flammang等，1992年；McCracken等，1992年)。CYP2A6也具有遣传多形性，因此某些个体含有灭活酶(Daly等，1994年；Fernandez-Salguero等，1995年)。CYP2A6为人体的主要(即使非唯一)香豆素7-羟基酶(Pearce等，1992年)。CYP2A6可催化天然存在于植物及精油的香豆素的羟基化反应(Pelkonan等，1985年；Raunio等，1988年；Yamano等，1990年；Pearce等，1992年)。用于灵长类，例如人类及狒狒，香豆素代谢成7-羟基香豆素(约80％)(Cjolerton等，1992年Shilling等，1969年；Moran等，1987年)。但于啮齿类，如大鼠，小鼠及仓鼠，3-羟基香豆素为主要代谢产物(Shilling等，1969年；Egan等，1990年)。人类肝脏微粒体对香豆素7-羟基酶活性的早期研究证明CYP2A6之表达程度于个体间有显著差异(KapiiuInik等，1977年；Pelkonen等，1985年)。CYP2A6 mRNA在人类肝脏的表达程度也发现有变化(Miles等，1990年；Yamano等，1990年；Yun等，1991年)。特别，CYP2A6在人肝微粒体的蛋白质浓度变化超过100倍(Yun等，1991年)。CYP2A6也可代谢若干致癌因子原，如NNK(Crespi等，1991年)，黄曲霉毒素B1(Yun等，1991年)；六甲基磷酰胺(Ding等，1988年)，及亚硝基二甲基胺(Davies等，1989年；Fernandez等，1995年)。专利技术揭示专利技术人发现个体间的烟碱代谢变化原因为CYP2A6而非CYP2D6的表达差异。CYP2A6为人肝的主要烟碱代谢酶。香豆素为CYP2A6的特异性酶底物，在受试肝脏发现可特异性选择性抑制烟碱代谢成可替宁84％±11％，而添加奥芬那君(CYP2B6抑制剂)可增进抑制作用。还发现甲氧沙林(Methoxsalen)(亦名9-甲氧基-7H-呋喃并[3,2-g][1]苯并吡喃-7-酮；6-羟基-7-甲氧基-5-苯并呋喃丙烯酸δ-内酯；9-甲氧基补骨脂；8-甲氧基-4′5′:6,7-呋喃并-香豆素；8-甲氧基[呋喃并-3′2′:6,7-香豆素]；爱莫丁(ammoidin)；花椒毒素；8-甲氧基补骨脂；8-MOP；8-MP；甲氧呋豆素(Meladinine)；遇罗林(Meloxine)；甲氧基呋喃苯并吡喃酮(Oxsoralen))为强力CYP2A6抑制剂，因此为烟碱代谢成可替宁的强力抑制剂。抗CYP2A6的单克隆抗体也可抑制可替宁形成；但其它CYPs抗体无法显著抑制可替宁形成。如Western印迹试验验证，CYP2A6数量与Vmax(r=0.83,p＜0001)高度相关且受香豆素高度抑制(r=0.80,p＜0.001)。资料指示CYP2A6表达变化导致个体间烟碱代谢的变化，而该变化又出现行为结果，例如抽较多或较少根香烟。因此，CYP2A6的选择性特异性抑制剂可用来调节烟碱代谢，尤其是明显地减少烟碱代谢，因而影响烟草的使用。如本说明书使用“抑制剂”及“抑制”等词具有广义定义，包括可直接或间接(例如经由反应性中间物，代谢产物等)作用于CYP2A6而抑制或以其它方式调节CYP2A6催化烟碱代谢本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1．调节个体体内烟碱代谢的方法，包括选择性抑制CYP2A6。2．如权利要求1所述的方法，其中使用下列一种或几种物质选择性抑制CYP2A6:(ⅰ)可抑制CYP2A6活性的物质；或(ⅱ)可抑制CYP2A6编码基因转录及/或翻译的物质。3．如权利要求1所述的方法，其中通过对个体投予至少一种具有带羰基的内酯结构的化合物而选择性抑制CYP2A6。4．如权利要求1所述的方法，其中通过对个体投予至少一种选自下列的化合物而选择性抑制CYP2A6香豆素，呋喃并香豆素，甲氧沙林，白茅苷，补骨脂素，α-萘黄酮，异茴芹灵，β-萘黄酮，香柠檬烯，异白芷内酯，杀鼠迷，即羟基四氢萘基苯并吡喃酮，(+)-顺-3,5-二甲基-2-(3-吡啶基)-噻唑烷-4-酮，4′,5,7-三羟黄烷酮及相关的黄酮，二乙基二硫代氨基甲酸酯，N-亚硝基二烷基胺，硝基芘，甲萘醌，咪唑抗真菌剂，咪康唑，克霉唑，匹鲁卡品，六甲基磷酰胺，4-甲基亚硝基胺-3-吡啶基-1-丁醇，黄曲霉毒素B，及其类似物和衍生物。5．如权利要求1所述的方法，其中N-亚硝基二烷基胺选自N-亚硝基二乙基胺、N-亚硝基二甲基胺及其混合物。6．筛选在个体体内调节烟碱代谢成可替宁的物质的方法，其特征在于检定分析一种物质，该物质(ⅰ)可选择性抑制CYP2A6活性，或(ⅱ)可选择性抑制CYP2A6编码基因的转录及/或翻译。7．用于治疗需要调节烟碱代谢成可替宁的病情的医药组合物，其包括有效量的可选择性抑制CYP2A6的物质，及医药上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。8．如权利要求7所述的组合物，其中该物质包括至少一种具有带羰基的内酯结构的化合物。9．如权利要求7所述的组合物，其中该物质为选自下列物质中的至少一种香豆素，呋喃并香豆素，甲氧沙林，白茅苷，补骨脂素，α-萘黄酮，异茴芹灵，β-萘黄酮，香柠檬烯，异白芷内酯，杀鼠迷，即羟基四氢萘基苯并吡喃酮，(+)-顺-3,5-二甲基-2-(3-吡啶基)-噻唑烷-4-酮，4′,5,7-三羟黄烷酮及相关的黄酮，二乙基二硫代氨基甲酸酯，N-亚硝基二烷基胺，硝基芘，甲萘醌，咪唑抗真菌剂，咪康唑，克霉唑，匹鲁卡品，六甲基磷酰胺，4-甲基亚硝基胺-3-吡啶基-1-丁醇，黄曲霉毒素B，及其类似物和衍生物。10．如权利要求9所述的方法，其中该N-亚硝基二烷基胺选自N-亚硝基二乙基胺，N-亚硝基二甲基胺及其混合物。11．用于治疗个体体内需要调节烟碱代谢成可替宁的病情的方法，其特征在于对该个体投予有效量的可选择性抑制CYP2A6的物质。12．如权利要求11所述的方法，其中该物质为至少一种具有带羰基的内酯结构的化合物。13．如权利要求11所述的方法，其中该物质为选自下列物质中的至少一种香豆素，呋喃并香豆素，甲氧沙林，白茅苷，补骨脂素，α-萘黄酮，异茴芹灵，β-萘黄酮，香柠檬烯，异白芷内酯，杀鼠迷，即羟基四氢萘基苯并吡喃酮，(+)-顺-3,5-二甲基-2-(3-吡啶基)-噻唑烷-4-酮，4′,5,7-三羟黄烷酮及相关的黄酮，二乙基二硫代氨基甲酸酯，N-亚硝基二烷基胺，硝基芘，甲萘醌，咪唑抗真菌剂，咪康唑，克霉唑，匹鲁卡品，六甲基磷酰胺，4-甲基亚硝基胺-3-吡啶基-1-丁醇，黄曲霉毒素B，及其类似物和衍生物。14．如权利要求13所述的方法，其中该N-亚硝基二烷基胺选自N-亚硝基二乙基胺、N-亚硝基二甲基胺及其混合物。15．如权利要求12所述的方法，其包括对个体投予包括两种或多种所述物质的混合物。16．如权利要求11至15中任一项所述的方法，其中所述病情为依赖性或非依赖性烟草使用。17．用于增进个体体内CYP2A6抑制剂对烟碱代谢的抑制作用的方法，其特征在于对该个体投予有效量的可选择性抑制CYP2A6的物质及有效量的CYP2B6抑制剂。18．如权利要求17所述的方法，其中所述物质为至少一种具有带羰基的内酯结构的化合物。19．如权利要求17所述的方法，其中该物质为选自下列物质中的至少一种香豆素，呋喃并香豆素，甲氧沙林，白茅苷，补骨脂素，α-萘黄酮，异茴芹灵，β-萘黄酮，香柠檬烯，异白芷内酯，杀鼠迷，即羟基四氢萘基苯并吡喃酮，(+)-顺-3,5-二甲基-2-(3-吡啶基)-噻唑烷-4-酮，4′,5,7-三羟黄烷酮及相关的黄酮，二乙基二硫代氨基甲酸酯，N-亚硝基二烷基胺，硝基芘，甲萘醌，咪唑抗真菌剂，咪康唑，克霉唑，匹鲁卡品，六甲基磷酰胺，4-甲基亚硝基胺-3-吡啶基-1-丁醇，黄曲...

【专利技术属性】
技术研发人员：爱德华·M·赛勒斯，瑞雪·F·汀达尔，
申请(专利权)人：尼柯根股份有限公司，
类型：发明
国别省市：