含有神经鞘糖脂的冷冻干燥组合物及其制造方法技术

＊＊＊ （Ａ） 本发明专利技术的目的是提高一种水溶性低的神经鞘糖脂的溶解性，为此，制备一种由其组成的冷冻干燥组合物。这种冷冻干燥组合物包含一种通式（Ａ）代表的α－糖基神经酰胺或其盐，一种聚氧脱水山梨糖醇脂肪酸酯，和一种二糖或单糖，且较好进一步含有脱氧胆酸或组氨酸。在所述通式上，Ｒ↓［１］是Ｈ或ＯＨ；Ｘ是７～２５的整数；Ｒ↓［２］是－ＣＨ↓［２］（ＣＨ↓［２］）↓［ｙ］ＣＨ↓［３］，－ＣＨ（ＯＨ）（ＣＨ↓［２］）↓［ｙ］ＣＨ↓［３］，－ＣＨ（ＯＨ）（ＣＨ↓［２］）↓［ｙ］ＣＨ（ＣＨ↓［３］）↓［２］，－ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ↓［２］）↓［ｙ］ＣＨ↓［３］，或－ＣＨ（ＯＨ）（ＣＨ↓［２］）↓［ｙ］ＣＨ（ＣＨ↓［３］）ＣＨ↓［２］ＣＨ↓［３］（式中Ｙ是５～１７的整数）；Ｒ↓［３］和Ｒ↓［４］之一是Ｈ，且另一个是Ｈ、ＯＨ、ＮＨ↓［２］、或ＮＨＣＯＣＨ↓［３］；Ｒ↓［５］和Ｒ↓［６］之一是Ｈ，且另一个是ＯＨ；Ｒ↓［７］和Ｒ↓［８］之一是Ｈ，且另一个是ＯＨ；且Ｒ↓［９］是Ｈ、ＣＨ↓［３］、或ＣＨ↓［２］ＯＨ。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及含有神经鞘糖脂的冷冻干燥组合物，更详细地说，涉及提高了本来对水溶解性低或者难溶性的神经鞘糖脂在水中的溶解性的、含有神经鞘糖脂的冷冻干燥组合物及其制造方法。
技术介绍
α-神经鞘糖脂在生物体内显示各种有用的生理活性，因而可用于抗肿瘤剂、免疫赋活性、骨髓细胞增殖促进剂等许多医药中。神经鞘糖脂中，糖部分由单糖类组成的神经鞘糖脂对水溶解性低或者难溶性者居多。为了提高这样的糖脂的溶解性，已经有人探讨了种种方法，但不能得到令人满意的溶解性，而且即使曾经溶解也会在保存时析出沉淀，有溶解性随着时间推移而下降这样的问题。专利技术公开鉴于以上情况，本专利技术的目的是要提供一种含有糖部分由单糖类构成的溶解性低或难溶性的神经鞘糖脂、长期保存后也能维持高再溶解性的冷冻干燥组合物。本专利技术者等人发现，当在有糖部分由单糖类组成的α-糖基键结构、对水溶解性低的神经鞘糖脂(α-糖基神经酰胺)中配入聚氧脱水山梨糖醇脂肪酸酯和蔗糖、甘露糖醇或葡萄糖、或者进一步配入脱氧胆酸钠或组氨酸，并在溶剂中溶解之后冷冻干燥时，即使在长期保存后其再溶解性也是极高的，终于完成以这一发现为基础的本专利技术。即，本专利技术涉及一种冷冻干燥组合物，其中包含作为下式(A)所示活性成分的α-糖基神经酰胺或其盐、聚氯脱水山梨糖醇脂肪酸酯和蔗糖、甘露糖醇或葡萄糖，或者进一步包含脱氧胆酸钠或组氨酸 〔式中，R1～R9和X分别表示后述的特定基团和特定范围的整数〕。此外，本专利技术也涉及冷冻干燥组合物的制造方法，其特征在于把上述组合物的配合成分溶解在加温的水基溶剂中，冷却后进行冷冻干燥步骤。附图简单说明第1图是一幅显示本专利技术中使用的α-糖基神经酰胺化合物的代表例(KRN7000)的合成反应路线的说明图。反应路线中，pyr表示吡啶，BrPPh3(CH2)12CH3表示溴化十三烷三苯鏻，n-BuLi表示正丁基锂，MsCl表示甲磺酰氯，BnBr表示苄基溴，l-PrOH表示丙醇。第2图是一幅显示附图说明图1后续的合成反应路线的说明图。反应路线中，WSC-HCl是1-乙基-3-(3′-二甲胺基丙基)碳化二亚胺·盐酸盐，MS4A是分子筛4A，Hex4NBr是溴化四己铵。专利技术实施的最佳形态〔式(A)所示的化合物〕本专利技术组合物中使用的化合物，如上所述，是有式(A)所示α-半乳糖神经酰胺结构的化合物，上述式(A)中的X和R1～R9有如下所述的定义〔式中，R1是H或OH；X是7～25中任何一个整数；R2是下列(a)～(e)定义的取代基中任何一个(其中，Y是5～17中任何一个整数)，(a)-CH2(CH2)YCH3(b)-CH(OH)(CH2)YCH3(c)-CH(OH)(CH2)YCH(CH3)2(d)-CH＝CH(CH2)YCH3(e)-CH(OH)(CH2)YCH(CH3)CH2CH3；R3和R4中任意一个是H，另一个是H、OH、NH2或NHCOCH3；R5和R6中任意一个是H，另一个是OH；R7和R8中任意一个是H，另一个是OH；R9是H、CH3、或CH2OH〕。上述化合物的较好形态是下式(A′)所示的α-糖基神经酰胺 〔式中，R1、R2和X同上述定义，R3～R9是下列i)～v)定义的取代基i)R3、R6和R8是H时，R4是H、OH、NH2或NHCOCH3；R5是OH；R7是OH；R9是H、CH3或CH2OH；ii)R3、R6和R7是H时，R4是H、OH、NH2或NHCOCH3；R5是OH；R8是OH；R9是H、CH3或CH2OH；iii)R4、R6和R7是H时，R3是H、OH、NH2或NHCOCH3； R5是OH；R8是OH；R9是H、CH3或CH2OH；iv)R4、R5和R7是H时，R3、R6和R8是OH；R9是H、CH3或CH2OH；v)R3、R5和R7是H时，R4、R6和R8是OH；R9是H、CH3或CH2OH〕。本专利技术中可以使用的较好的α-糖基神经酰胺化合物，是式(A)的糖部分中R3、R6和R8表示H，R4、R5和R7表示OH，R9表示CH2OH的化合物，而且是神经酰胺部分中R2表示有OH的取代基(b)、(c)或(e)、尤其(b)的化合物。在上述的较好化合物中，神经酰胺部分的R1是H、R2是(b)的化合物是更好的。进而，神经酰胺部分的烷基中亚甲基的X较好的是11～25的整数、更好的是21～25，基团R2中的Y较好的是9～17的整数、更好的是11～15。本专利技术中可以使用的α-糖基神经酰胺中，(2S，3S，4R)-1-(α-D-吡喃半乳糖氧基)-2-二十六烷酰胺基-3，4-十八烷二醇是特别好的化合物，这种化合物以下称KRN7000(其结构式请参照图2)。式(A)所示的化合物可以是酸加成盐。本专利技术中可以使用的化合物也包含这些加成盐。作为能形成酸加成盐的酸，可以列举诸如无机酸，例如盐酸、硫酸、硝酸、磷酸等，或有机酸，例如乙酸、丙酸、马来酸、油酸、棕榈酸、柠檬酸、琥珀酸、酒石酸、富马酸、谷氨酸、泛酸、月桂基磺酸、甲磺酸和邻苯二甲酸等。要说明的是，在酸加成盐作为医药使用的情况下，当然必须是医药上可接受的。本专利技术中可以使用的活性成分化合物，可以用适合于合成的α-糖基神经酰胺之目的的任意方法制备。上述α-糖基神经酰胺化合物中有一部分连同其合成方法一起记载于WO93/5055号、WO94/2168号和WO94/9020号等各公报中，按照这些方法就可以制备。而且，作为较好的方法，可以列举后述实施例中化合物KRN7000的合成方法，即以来苏糖为起始物质合成神经酰胺部分，并在这个神经酰胺上结合糖部分的半乳糖的方法(细节请参照后述实施例和图1～2)，按照这种方法就可以合成目的化合物。此外，关于α-糖基神经酰胺的一般合成方法，可以参照诸如J.Med.Chem.，38，2176(1995)。〔冷冻干燥组合物及其制造方法〕按照本专利技术的冷冻干燥组合物可以用于以水、缓冲液等水基介质为溶剂的注射用和细胞医疗用培养基等用途。作为本专利技术组合物中可以使用的活性成分的α-糖基神经酰胺化合物有种种生理活性，而且本专利技术组合物可以作为抗肿瘤剂、免疫赋活剂(参照WO93/5055号公报)、骨髓细胞增殖促进剂(参照特开昭WO94/2168号公报)、自免疫疾病治疗剂和末梢血干细胞增加剂等医药用于注射用(含点滴用)。此外，按照本专利技术的冷冻干燥组合物也可以用作细胞医疗用，例如在抗原提示细胞或癌细胞等离体培养、活化后再返回生物体内的抗原提示细胞疗法(Yamaguchi，Y.等，Oncol，Res.，8，399(1997))或肿瘤疗法等中用作细胞大容量悬浮液或培养介质用。按照本专利技术的冷冻干燥组合物配合了上述α-糖基神经酰胺或其盐、聚氧缩水山梨糖醇脂肪酸酯和二糖或单糖(含并用)，冷冻干燥后和长期保存后对水的溶解性优异。而且在上述配合中，通过进一步配合脱氧胆酸钠或组氨酸(含并用)，还可以进一步提高长期保存后的再溶解性。作为聚氧脱水山梨糖醇脂肪酸酯，可以列举吐温-20(缩聚山梨糖醇油酸酯二十)、吐温-40、吐温-60、吐温-80等，较好的是吐温-20。其配合量，相对于活性化合物1重量份而言，较好的是10～1000重量份，更好的是20～100重量份。作为二糖，可以列举蔗糖、乳糖、麦芽糖等，特别好的是蔗糖；而作为单糖，可以列举本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种冷冻干燥组合物，其中包含下式（Ａ）所示的α－糖基神经酰胺或其盐，聚氧脱水山梨糖醇脂肪酸酯、和二糖或单糖， ＊＊＊ （Ａ） ［式中，Ｒ↓［１］是Ｈ或ＯＨ； Ｘ是７～２５中任何一个整数； Ｒ↓［２］是下列（ａ）～（ｅ）定义的取代基中任何一个（其中，Ｙ是５～１７中任何一个整数）， （ａ）－ＣＨ↓［２］（ＣＨ↓［２］）↓［Ｙ］ＣＨ↓［３］ （ｂ）－ＣＨ（ＯＨ）（ＣＨ↓［２］）↓［Ｙ］ＣＨ↓［３］ （ｃ）－ＣＨ（ＯＨ）（ＣＨ↓［２］）↓［Ｙ］ＣＨ（ＣＨ↓［３］）↓［２］ （ｄ）－ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ↓［２］）↓［Ｙ］ＣＨ↓［３］ （ｅ）－ＣＨ（ＯＨ）（ＣＨ↓［２］）↓［Ｙ］ＣＨ（ＣＨ↓［３］）ＣＨ↓［２］ＣＨ↓［３］； Ｒ↓［３］和Ｒ↓［４］中任意一个是Ｈ，另一个是Ｈ、ＯＨ、ＮＨ↓［２］或ＮＨＣＯＣＨ↓［３］； Ｒ↓［５］和Ｒ↓［６］中任意一个是Ｈ，另一个是ＯＨ； Ｒ↓［７］和Ｒ↓［８］中任意一个是Ｈ，另一个是ＯＨ； Ｒ↓［９］是Ｈ、ＣＨ↓［３］、或ＣＨ↓［２］ＯＨ］。

【技术特征摘要】
JP 1997-2-5 22585/971.一种冷冻干燥组合物，其中包含下式(A)所示的α-糖基神经酰胺或其盐，聚氧脱水山梨糖醇脂肪酸酯、和二糖或单糖，〔式中，R1是H或OH；X是7～25中任何一个整数；R2是下列(a)～(e)定义的取代基中任何一个(其中，Y是5～17中任何一个整数)，(a)-CH2(CH2)YCH3(b)-CH(OH)(CH2)YCH3(c)-CH(OH)(CH2)YCH(CH3)2(d)-CH＝CH(CH2)YCH3(e)-CH(OH)(CH2)YCH(CH3)CH2CH3；R3和R4中任意一个是H，另一个是H、OH、NH2或NHCOCH3；R5和R6中任意一个是H，另一个是OH；R7和R8中任意一个是H，另一个是OH；R9是H、CH3、或CH2OH〕。2.权利要求1记载的冷冻干燥组合物，其中包含下式(A′)所示的α-糖基神经酰胺或其盐，聚氧脱水山梨糖醇脂肪酸酯、和二糖或单糖，〔式中，R1是H或OH；X是7～25中任何一个整数；R2是下列(a)～(e)定义的取代基中任何一个(其中，Y是5～17中任何一个整数)，(a)-CH2(CH2)YCH3(b)-CH(OH)(CH2)YCH3(c)-CH(OH)(CH2)YCH(CH3)2(d)-CH＝CH(CH2)YCH3(e)-CH(OH)(CH2)YCH(CH3)CH2CH3；R3～R9是下列i)～v)定义的取代基i)R3、R6和R8是H时，R4是H、OH、NH2或NHCOCH3；R5是OH；R7是OH；R9是H、CH3或CH2OH；ii)R3、R6和R7是H时，R4是H、OH、NH2或NHCOCH3；R5是OH；R8是OH；R9是H、CH3或CH2OH；iii)R4、R6和R7是H时，R3是H、OH、NH2或NHCOCH3；R5是OH；R8是OH；R9是H、CH3或CH2OH；iv)R4、R5和R7是H时，R3、R6和R8是OH；R9是H、CH3或CH2OH；v)R3、R5和R7是H时，R4、R6和R8是OH；R9是H、CH3或CH2OH〕。3.权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：丸山和俊，竹内明彦，野村英昭，
申请(专利权)人：麒麟麦酒株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]