疫苗制造技术

在此公开了如下作用剂作为免疫调节剂用于抗感染性疾病疫苗的用途：（ｉ）无全毒素的ＥｔｘＢ，ＣｔｘＢ或ＶｔｘＢ；（ｉｉ）具有ＧＭ１－结合活性、不同于ＥｔｘＢ或ＧｘＢ的作用剂，或者是具有Ｇｂ３－结合活性、不同于ＶｔｘＢ的作用剂；或（ｉｉｉ）对于由ＧＭ－结合或Ｇｂ３结合介导的细胞内信号事件具有影响的作用剂。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本专利技术涉及一种用于疫苗的免疫调节剂，并计划将这种疫苗用于对抗多种传染性病原体。进而，本专利技术还涉及一种包含这种免疫调节剂的疫苗组合物，以及应用此免疫组合物进行免疫接种的方法，优选地是这种免疫调节剂与抗原组合在一起。霍乱毒素(Ctx)和与之密切相关的大肠杆菌热不稳定性肠毒素(Etx)是强有力的免疫原和粘膜佐剂。但是，它们固有的毒性致使它们不适合用于人。例如，虽然对于实验动物Ctx是最常用的粘膜佐剂，但是由于它强有力的诱发腹泻的特性而不适合用于人。已试图使毒性与佐剂活性分离开，例如通过使用Ctx和Etx的成份作为其全毒素本身的替换物。大肠杆菌Vero细胞毒素(Vtx)是另一种已知的细菌毒素。Ctx和Etx是由酶活性亚单位A及五聚体亚单位B组成的异六聚体蛋白。已知CtxB和EtxB结合于GM1-神经节苷脂(GM1)，这是一种被发现普遍存在于哺乳动物细胞表面的糖神经鞘脂。Vtx结合于与GM1相似类型的受体Gb3。在试图防止疫苗研制的毒性问题时，先前已对非毒性亚单位B的佐剂活性进行了研究。但是，许多报告描述的是用CtxB或CtxB的商品制剂进行的实验。这些制剂不可避免地被小量的但生物有效量的活性毒素所污染。因此，不能将归因于亚单位B的佐剂活性与全毒素的佐剂活性区分开(Wu和Rwssell(1993)，感染与免疫61314-322，US-518 2109)。随后使用重组CtxB(xCtxB)进行的研究已表明，CtxB是不良的粘膜佐剂，只有加入天然全毒素才能诱发强旁观性应答(bystander responses)(Tamnra等(1994)疫苗12419-426)。另一些研究已表明，rctxB缺乏全毒素的ADP-核糖基化活性和cAMP-刺激活性，并且表明，因为佐剂机制与这些能力相关联，所以CtxB不适合用作佐剂(Vaidy和Lycke(1992)，免疫学75488-492，Lycke等(1992)，欧洲免疫学杂志222277-2281，Douce等(1997)。盛染与免疫652821-2828)。在另一个研究中，鼻内给予使用rCtxB作佐剂的卵清蛋白导致了不良的抗体应答。在亚单位A中具有突变的CtX非毒性衍生物也对旁观抗原(bystander antigens)产生微弱的应答，而存在活性亚单位A却显著地提高了佐剂活性，表明活性亚单位A是必不可少的(Douce等(1997)同上)。还已显示，可以用rCtxB和rEtxB增进对异源性抗原的耐受性(Sum等(1994)国家科学院学报914610-4614，Sum等(1996)国家科学院学报937196-7201，Bergerot等(1997)国家科学院学报944610-4614，Williams等(1997)国家科学院学报945290-5295)，表明这些分子可能不适合于用作佐剂。本专利技术的基础尽管本领域一般认为CtxB和EtxB具有不良的佐剂活性，并且实际上可以用作耐受原，但是，本专利技术者仍然在鼠模型中研究了rEtxB(因此不含有残留的全毒素或亚单位A)在鼻内HSV疫苗中的用途，并且惊人地发现，它能够刺激对病毒攻击的保护性免疫应答。特别是本专利技术者发现i)作用剂如EtxB和CtxB可刺激产生高水平的局部(粘膜)抗体(虽然使用rEtxB的免疫接种比使用Ctx/CtxB组合刺激产生了较低水平的全血清抗体)；ii)所产生抗体的分布偏移向非补体性固定抗体，特别是S-IgA和IgG1；iii)作用剂如EtxB和CtxB还可刺激局部和全身的T-细胞增殖性应答；iv)作用剂如CtxB和EtxB有助于使免疫应答从Th1-相关性应答转变为Th2-相关性应答；v)当使用作用剂如CtxB和EtxB作免疫调节剂时，可避免Th2-相关性应答的某些有害作用，如产生IgE；vi)与rCtxB相比较，rEtxB是更有效的免疫调节剂；vii)作用剂如EtxB和CtxB能够改变抗原呈递细胞用于内在化和加工处理抗原的方式，增加抗原的持续性；viii)如果使作用剂如BtxB和CtxB连接于一种抗原，那末可能通过改变对此免疫调节剂的连接而改变对该抗原的加工处理途径；以及ix)VtxB在体外对白细胞群行使类似于由EtxB和CtxB行使的免疫调节作用。这些重要的发现是本专利技术诸方面的基础，并且使本专利技术者能够预料到，可结合于GM1或Gb3的，或者可模拟对GM1或Gb3结合作用的纯EtxB，CtxB和VtxB以及其它作用剂作为免疫调节剂是有用的，可在疫苗中用于对抗HSV-1感染以及其它感染的预防和治疗性免疫接种，对这些感染的预防和治疗将从上面列举的免疫调节作用类型获得益处。对免疫应答的刺激作用能够结合于GM1或Gb3的，或者能够模拟对GM1或Gb3结合作用的EtxB，CtxB，VtxB和其它作用剂，可以起免疫调节剂的作用并刺激针对抗原攻击的特异性免疫应答。根据本专利技术的第一方面，在此提供了下列作用剂作为对抗感染性疾病疫苗的免疫调节剂的用途(i)无全毒素的EtxB，CtxB或VtxB；(ii)具有GM1-结合活性，不同于EtxB或CtxB的作用剂，或者是具有Gb3-结合活性、不同于VtxB的作用剂；或(iii)对由GM1-结合或Gb3-结合介导的细胞内信号传输过程具有影响的作用剂。根据本专利技术的第二方面。在此提供了一种用于针对感染性疾病的疫苗组合物，这些感染性疾病是由感染性病原体引起的，其中疾疫苗组合物包含一种抗原决定因子和选自如下作用剂的免疫调节剂；(i)无全毒素的EtxB，CtxB或VtxB；(ii)具有GM1-结合活性、不同于EtxB或CtxB的作用剂，或者是具有Gb3-结合活性、不同于VtxB的作用剂；或(iii)对由GM1-结合或Gb3-结合介导的细胞内信号传输过程具有影响的作用剂；其中的抗原决定因子是所述感染性病原体的抗原决定因子。可以使该抗原和疫调节剂连接，例如共价地或遗传地连接，形成单一的有效作用剂。在本专利技术的特定实施方案中，是使抗原和免疫调节剂化学偶联。例如，可使用异型双功能交联试剂将抗原和免疫调节剂化学偶联。在本专利技术此方面的大多数应用中，优选地是分别给药(其中的抗原和免疫调节剂没有被这样连接)，因为这样能够分别给予不同的部分。根据本专利技术的第三方面，在此提供了一种试剂盒，用于对哺乳动物对象如人或兽医对象接种疫苗，对抗感染性疾病，此试剂盒包含a)如下作用剂中的一种(i)无全毒素的EtxB，CtxB或VtxB；(ii)具有GM1-结合活性、不同于EtxB或CtxB的作用剂，或者是具有Gb3-结合活性、不同于VtxB的作用剂；或(iii)对由GM1-结合或Gb3-结合介导的细胞内信号传输过程具有影响的作用剂；以及b)一种抗原决定因子，它是感染性疾病的抗原决定因子，用于与所述疫苗的免疫调节剂一起共同给药。可按照预防或治疗性疫苗接种方法使用本专利技术第二方面的疫苗组合物和本专利技术第三方面的试剂盒，在此是将“预防性疫苗”给予未免疫的个体以便防止疾病发生，而将治疗性疫苗给予已存在感染的个体，以便使感染减少或降低至最少或者消除疾病的免疫病理学后果。一旦感染发生，作用剂如EtxB具有改变免疫应答性质的能力。可能发现，含有这种作用剂的治疗性疫苗(即不需要含有抗原的疫苗)在免疫应答已不能消除感染的情况下特别有用。这种应用对于治本文档来自技高网...

【技术保护点】
以如下作用剂作为免疫调节剂用于抗感染性疾病疫苗的用途：（ｉ）无全毒素的ＥｔｘＢ，ＣｔｘＢ或ＶｔｘＢ；（ｉｉ）具有ＧＭ１结合活性、不同于ＥｔｘＢ或ＣｔｘＢ的作用剂，或者是具有Ｇｂ３－结合活性、不同于ＶｔｘＢ的作用剂；或（ｉｉｉ）对 于由ＧＭ１－结合或Ｇｂ３结合介导的细胞内信号传输过程有影响的作用剂。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】GB 1998-5-8 9809958.3;GB 1998-6-3 9811954.8;GB 1991.以如下作用剂作为免疫调节剂用于抗感染性疾病疫苗的用途(i)无全毒素的EtxB，CtxB或VtxB；(ii)具有GM1结合活性、不同于EtxB或CtxB的作用剂，或者是具有Gb3-结合活性、不同于VtxB的作用剂；或(iii)对于由GM1-结合或Gb3结合介导的细胞内信号传输过程有影响的作用剂。2.权利要求1的用途，其中的免疫调节剂是无全毒素的EtxB。3.权利要求1或2的用途，其中的感染性疾病是其感染性病原体是疱疹病毒家族一个成员的疾病。4.权利要求3的用途，其中的感染性疾病是由感染性病原体引起的，并且此感染性病原体是选自HSV-1，HSV-2，EBV，VZV，CMV，HHV-6，HHV-7和HHV-8。5.权利要求4的用途，其中的感染性病原体是选自HSV-1，HSV-2，CMV或EBV。6.权利要求1或2的用途，其中的感染性疾病是由感染性病原体引起的，并且此感染性病原体是流感病毒。7.权利要求1或2的用途，其中的感染性疾病是由感染性病原体引起的，并且此感染性病原体是付流感病毒。8.权利要求1或2的用途，其中的感染性疾病是由感染性病原体引起的，并且此感染性病原体是呼吸合胞体病毒。9.权利要求1或2的用途，其中的感染性疾病是由感染性病原体引起的，并且此感染性病原体是肝炎病毒。10.权利要求9的用途，其中的感染性病原体是选自甲型，乙型，丙型和丁型肝炎病毒。11.权利要求10的用途，其中的感染性病原体是甲型肝炎病毒或丙型肝炎病毒。12.权利要求1或2的用途，其中的感染性疾病是脑膜炎。13.权利要求12的用途，其中的感染性疾病是由感染性病原体引起的，并且此感染性病原体是选自脑膜炎奈瑟氏菌，B型流感嗜血杆菌，和肺炎链球菌。14.权利要求1或2的用途，其中的感染性疾病是肺炎或呼吸道感染。15.权利要求14的用途，其中的感染性疾病是由感染性病原体引起的，并且此感染性病原体是选自肺炎链球菌，嗜肺军团菌，和结核分支杆菌。16.权利要求1或2的用途，其中的感染性疾病是性传播疾病。17.权利要求16的用途，其中的感染性疾病是由感染性病原体引起的，并且此感染性病原体是选自淋病奈瑟氏菌，HIV-1，HIV-2和沙眼衣原体。18.权利要求1或2的用途，其中的感染性疾病是胃肠道疾病。19.权利要求18的用途，其中的感染性疾病是由感染性病原体引起的，并且此感染性病原体是选自致肠病的，产肠毒素的，肠侵入性的、致肠出血性的和肠聚生性大肠杆菌，轮状病毒，肠炎沙门氏菌，伤寒沙门氏菌，幽门螺杆菌，蜡状芽孢杆菌，空肠弯曲杆菌和霍乱弧菌。20.权利要求1或2的用途，其中的感染性疾病是表面感染。21.权利要求20的用途，其中的感染性疾病是由感染性病原体引起的，并且此感染性病原体是选自金黄色葡萄球菌，化脓链球菌和变异链球菌。22.权利要求1或2的用途，其中的感染性疾病是寄生虫疾病。23.权利要求22的用途，其中的感染性疾病是由感染性病原体引起的，并且此感染性病原体是选自疟原虫，锥体虫属种，冈氏弓形虫，杜氏利什曼原虫和盘尾丝虫属种。24.一种用于针对感染性疾病的疫苗组合物，该感染性疾病是由感染性病原体引起的，其中该疫苗组合物包含一种抗原决定因子和一种选自如下的免疫调节剂(i)无全毒素的EtxB，CtxB或VtxB；(ii)具有GM1-结合活性、不同于EtxB或CtxB的作用剂，或者是具有Gb3-结合活性、不同于VtxB的作用剂；或(iii)对于由GM1-结合或Gb3结合介导的细胞内信号传输过程具有影响的作用剂；其中该抗原决定因子是所述感染性病原体的抗原决定因子。25.权利要求24的疫苗组合物，其中的感染性疾病是HSV-1感染，并且其中的抗原决定因子是HSV-1...

【专利技术属性】
技术研发人员：TR希尔斯特，NA威廉斯，A莫尔甘，AD威尔逊，LA比尔德，
申请(专利权)人：布里斯托尔大学，
类型：发明
国别省市：GB[英国]