多价人—牛轮状病毒疫苗制造技术

本发明专利技术提供用于防止人轮状病毒疾病而且没有明显的反应原性的疫苗组合物。在多价制剂中联合包括四种临床上最重要的ＶＰ７血清型的人轮状病毒的每一种的人ｘ牛重排列轮状病毒，该制剂提供高度感染性和免疫原性而不产生暂时发热症状。还提供了产生免疫原性应答而不产生暂时发热症状的方法。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
多价人一牛轮状病毒疫苗的制作方法
技术介绍
轮状病毒是婴幼儿急性脱水腹泻的一个主要原因。在发展中国家，轮状病毒疾病导致婴幼儿胃肠炎死亡的25％至30％和在美国大约50000至100000的小于5岁的住院儿童。因为这个原因，需要安全有效的疫苗来预防婴幼儿严重的轮状病毒疾病。开发轮状病毒疫苗的主要策略以“Jennerian”方法为基础，其具利用人和动物轮状病毒的抗原相关性和动物轮状病毒株在人中的减小的毒性。Kapikian等，疫苗，Chanock等编著，冷泉港实验出版社，冷泉港，纽约，pp.151-159(1987)。使用该方法已经开发出了几种候选的活口服轮状病毒疫苗，其中从非人宿主得到的抗原相关的活病毒被用作抗其人病毒对应物的免疫接种疫苗。已经用来对人接种的动物轮状病毒的例子包括牛轮状病毒株NCDV(RIT4237,Vesikari等，Lancet,2:870-811(1983)),牛轮状病毒株WC3(Clark等，美国儿童疾病杂志(Am.J.Dis.Child.),140:350-356(1986))和猕猴轮状病毒(RRV)株MMU 18006(美国专利4571385,Kapikian等，疫苗85,Lerner等，冷泉港实验出版社，冷泉港，纽约，pp.357-367(1985))。证明了不同一价牛和一价猿猴轮状病毒疫苗之间的保护效力是不同的(Vesikari，肠胃道病毒感染(Kapikian编著，Marel Dekker,Inc.,pp.419-442(1994)；Kapikian，出处同上，pp.443-470(1994))。而且，在人中产生令人满意的免疫应答要求高浓度的牛轮状病毒(107-108噬斑形成单位(pfu))(Yesikari等，儿科传染病(Ped.Inf.Dis.)4:622-625(1985)；Bernstein等，传染病杂志(J.Infect.Dis.)162:1055-1062(1990))。这些组合物的不同效应可能部分归因于2至5个月大的婴儿的目标人群在接种之后特征性产生同型免疫应答的事实(Kapikian等，药物生物学实验进展(Adv.Exp.Med.Biol.),327:59-69(1992)；Bernstein等，感染病杂志(J.Infect.Dis.),162:1055-1062(1990)；Green等，感染病杂志(J.Infect.Dis.),161:667-679(1990)；和Vesikari，疫苗11:255-261(1993))。临床相关人轮状病毒是A群轮状病毒的成员。这些病毒都有共同的VP6介导的群抗原，一种位于病毒中间壳上的蛋白。而且，血清型特异性取决于位于病毒外壳(通常也称之为病毒壳体)上的VP4(蛋白酶敏感的或P型)和VP7(糖蛋白或G型)蛋白质的存在，这两种蛋白质独立地诱导中和抗体，Kapikian等，病毒学，Fields,ed.pps.1353-1404(1995)。通过中和试验将感染人的A群轮状病毒分类为10种不同的VP7血清型。氨基酸序列分析表明每一种血清型中两个主要可变区中氨基酸同一性很高(85-100％)；但是不同血清型的病毒株之间的氨基酸同一性显著降低(Green等，病毒学(Virol.),168:429-433(1989)；Green等，Virol.,161:153-l59(1987)；和Green等，病毒学杂志(J.Virol.),62:1819-1823(1988))。证实了通过病毒中和试验或VP7的序列分析测定的轮状病毒相关性之间的一致性。因此，参考病毒株通常可以在临床研究中用作其血清型中的轮状病毒株的代表。为了实现抗每一流行病学和临床上重要的4种G血清型(VP7)(标记为1,2,3和4)的保护，通过产生重排列轮状病毒来改进Jennerian方法。通过用动物源的轮状病毒(即猕猴或牛轮状病毒)和人轮状病毒株共感染组织培养细胞来构建重排列的轮状病毒株。通过使共感染的子代与一组抗动物病毒株的VP7的单克隆抗体接触来选择共感染期间产生的包含编码来自人病毒株的VP7的单一人轮状病毒基因和10个保留的来自动物病毒株的轮状病毒基因的重排列病毒(参见，例如，美国专利4571385；Midthun等，临床微生物杂志(J.Clin.Microbiol.)24:822-826(1986)；和Midthun等，J.Virol,53:949-954(1985))。对包含来自人病毒株的VP7基因的人x猕猴轮状病毒重排列和人×牛重排列的研究证明动物轮状病毒亲本的VP4中和蛋白在用这些人×动物轮状病毒重排列接种的婴儿中免疫应答占优势。这可能反映出在子宫内从母体转移给婴儿的抗体中没有动物轮状病毒VP4抗体。不过，对通过母体产生的VP7抗体部分减弱的人轮状病毒VP7的免疫应答足以提供保护作用，因此，VP7抗体形成改进的Jennerian方法的基础(Flores等，临床微生物学杂志(J.Clin.Microbiol.)27:512-518(1989)；Perez-Schzel等，临床微生物学杂志(J.Clin.Microbiol.)28:553-558(1990)；Flores等，临床微生物学杂志(J.Clin.Microbiol.)31:2439-2445(1993)；Christy等，传染病学杂志(J.Infect.Dis.)168:1598-1599(1993)；Clark等，疫苗(Vaccine)8:327-332(1990)；Treanor等，Pediatr.Infect.Dis.J.14:301-307(1995)；Madore等，传染病学杂志(J.Infect.Dis.)166:235-243(1992)；和Clark等，传染病学杂志(J.Infect.Dis.)161:1099-1104(1990))。用携带单一人轮状病毒基因，即编码VP7的基因，的单一猕猴轮状病毒重排列的研究中，发现这样一种重排列的保护性免疫应答在小于6个月的婴儿中特征性同型(Green等，流行病学杂志(J.Inf.Dis.)161:667-679(1990))。该发现为抗轮状病毒疾病的免疫中VP7-相关的免疫性的重要性提供了进一步的证据。使用一价和四价人×猕猴轮状病毒重排列疫苗的一般性实验证明在接种后3-4天大约1/3的婴幼儿发生暂时低水平发热事件。Bernstein等，JAMA 273:1191-1196(1995)；Flores等，Lancet336:330-334(1995)；Perez-Schael等，临床微生物学杂志(J.Clin.Microbiol.)28:553-558(1990)；Flores等，临床微生物学杂志(J.Clin.Microbiol.),31:2439-2445(1993)；Halsey等，传染病学杂志(J.Infect.Dis.)158:1261-1267(1988)；Taniguichi等，临床微生物学杂志(J.Clin.Microbiol.)29:483-487(1991)；Simasathien等，儿科传染病(Pediatr.Infect.Dis.)J.13:590-596(1994)；Madore等，传染病学杂志(J.Infec本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种包括至少四种人ｘ牛株重排列轮状病毒和生理可接受载体的多价免疫原性组合物，其中各人ｘ牛重排列轮状病毒包括抗原性不同的人ＶＰ７血清型，并且当以小于１０↑［６．０］噬斑形成单位的剂量施用各轮状病毒重排列成分时，其中所述组合物诱导对各抗原性不同的人轮状病毒ＶＰ７血清型的免疫原性反应而不引起暂时低水平发热。

【技术特征摘要】
US 1998-7-28 60/094,4251．一种包括至少四种人×牛株重排列轮状病毒和生理可接受载体的多价免疫原性组合物，其中各人×牛重排列轮状病毒包括抗原性不同的人VP7血清型，并且当以小于106.0噬斑形成单位的剂量施用各轮状病毒重排列成分时，其中所述组合物诱导对各抗原性不同的人轮状病毒VP7血清型的免疫原性反应而不引起暂时低水平发热。2．权利要求1的组合物，其中由亲本人轮状病毒提供人×牛轮状病毒的VP7血清型抗原。3．权利要求2的组合物，其中亲本人轮状病毒选自人轮状病毒VP7血清型1,VP7血清型2,VP7血清型3,VP7血清型4,VP7血清型5和VP7血清型9。4．权利要求2的组合物，进一步包括VP7血清型10的牛轮状病毒×牛轮状病毒重排列。5．权利要求1的组合物，其中牛×牛重排列轮状病毒包括来自牛轮状病毒株KC-1的VP7血清型10抗原。6．权利要求1的组合物，其中除了VP7外的所有轮状病毒蛋白质由其中牛轮状病毒是UK株的亲本牛轮状病毒提供。7．权利要求1的组合物，其是包括VP7血清型1,VP7血清型2,VP7血清型3和VP7血清型4的人×牛重排列轮状病毒的四价免疫原性组合物。8．权利要求1的组合物，其是包括VP7血清型1,VP7血清型2,VP7血清型3,VP7血清型4和VP7血清型5的人×牛重排列轮状病毒的多价组合物。9．权利要求1的组合物，其是包括VP7血清型1,VP7血清型2,VP7血清型3,VP7血清型4,和VP7血清型9的人×牛重排列轮状病毒的多价组合物。10．权利要求1的组合物，其是包括VP7血清型1,VP7血清型2,VP7血清型3,VP7血清型4,VP7血清型5,和VP4血清型1A的人×牛重排列轮状病毒的多价组合物。11．权利要求1的组合物，其是包括VP7血清型1,VP7血清型2,VP7血清型3,VP7血清型4,VP7血清型9，和VP4血清型1A的人×牛重排列轮状病毒的多价组合物。12．权利要求1的组合物，其是包括VP7血清型1,VP7血清型2,VP7血清型3,VP7血清型4,VP7血清型5，和VP7血清型9的人×牛重排列轮状病毒的多价组合物。13．权利要求1的组合物，其是包括VP7血清型1,VP7血清型...

【专利技术属性】
技术研发人员：AH卡比奇安，RM查诺克，星野安孝，
申请(专利权)人：由卫生与公众服务部代表的美利坚合众国，
类型：发明
国别省市：US[美国]