以细菌的菌体成分为有效成分的癌免疫治疗用制剂制造技术

提供一种水包油型乳剂及其制造方法，水包油型乳剂的特征是：将具有免疫强化作用的细菌的菌体成分作为有效成分，以含有油状物质、表面活性剂、以及稳定剂为基础，可以作为癌免疫治疗药来使用。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本专利技术是关于将具有免疫活性作用的细菌的菌体成分作为有效成分，含有以油状物质、表面活性剂、以及稳定剂为基础的、能够作为癌免疫治疗法药物使用的水包油型乳剂以及它的制造方法。可是上述水包油型乳剂由于在以下叙述的理由，商业化的生产有困难，最近尽管它的有用性被越来越高地评价(Proc.Japan Acad.,70,Ser.B205-209(1994)；Proc.Japan Acad.,74,Ser.B20550-55(1998))，可是有着不能稳定供给市场这样的问题。本专利技术克服了水包油型乳剂的商业化生产的各种阻碍，解决了上述问题。以下依次叙述存在的阻碍和克服它们的手段。一般的，水包油型乳剂经时性的变化较大，最终导致油相、水相2相分离的结果。对此，以前为了乳剂的稳定性，采用①微粒化、②缩小分散溶剂与分散溶质的比重差、③添加高分子等物质使分散溶剂的粘度提高等的方法。可是因为只是延长变化所需要的时间，所以最终仍然会分离成油相、水相的2相。特别是以菌体成分为有效成分的水包油型乳剂的时候，发现由于含有CWS致使乳剂不稳定，因为几天内就有不溶性凝聚物的生成，所以最终只能制备成临用时调制成水包油型乳剂，除此没有其它的方法。为了解决这个问题，进行了使用糖醇及糖类的冷冻干燥制剂的尝试(特公昭63-1291号)，在这个现有技术的制剂产品中，发现刚冷冻干燥完以及保存1个月左右的平均粒子直径、粒度分布的变化较大，能够达到实用化的稳定性的大幅度的改善仍然不能达到。即，与本专利技术有关的第一个课题解决方法的要点如下所示。(1)将含有细菌的菌体成分、油状物质、表面活性剂以及稳定剂，具有下述特征的水包油型乳剂进行冷冻干燥处理得到的稳定化冷冻干燥制剂(a)在油滴中含有细菌的菌体成分；(b)油滴以单峰型的粒径分布在水溶液中分散；(c)冷冻干燥前后的水溶液中的油滴的粒径分布以及浊度的变化不大。(2)上述(1)记载的稳定化冷冻干燥制剂，其水溶液浊度的变化是冷冻干燥前浊度的50％以下。(3)上述(1)或(2)记载的稳定化冷冻干燥制剂，细菌的菌体成分是BCG-CWS，油状物质是角鲨烷。(4)从上述(1)到(3)的任何一个记载的稳定化冷冻干燥制剂，稳定剂是氨基酸或尿素。(5)从上述(1)到(3)的任何一个记载的稳定化冷冻干燥制剂，稳定剂是甘氨酸。(6)包括将含有细菌的菌体成分、油状物质、表面活性剂以及稳定剂的具有下述特征的水包油型乳剂进行冷冻干燥处理工艺的稳定化冷冻干燥制剂的制造方法(a)在油滴中含有细菌的菌体成分；(b)油滴以单峰型的粒径分布在水溶液中分散；(c)冷冻干燥前后的水溶液中的油滴的粒径分布以及浊度的变化不大。(7)上述(6)记载的稳定化冷冻干燥制剂的制造方法，其水溶液浊度的变化是冷冻干燥前浊度的50％以下。(8)上述(6)或(7)记载的稳定化冷冻干燥制剂的制造方法，细菌的菌体成分是BCG-CWS，油状物质是角鲨烷。(9)从上述(6)到(8)的任何一个记载的稳定化冷冻干燥制剂制造方法，稳定剂是氨基酸或尿素。(10)从上述(6)到(8)的任何一个记载的稳定化冷冻干燥制剂的制造方法，稳定剂是甘氨酸。以菌体成分为有效成分的水包油型乳剂的商业上生产有困难的另一个障碍，是在保持它的免疫强化作用不变的同时、又要大量生产，这是极其困难的事情。即，改良水包油型乳剂以往公知的临用时调制的制剂方法(J.Nat.Cancer Inst.48,831-835(1972)、J.Bacteriol,92,869-879(1966)、Gann,69,619-626(1978))，可以确立工业上的制造方法，首先在最初，为了解决由于使用的油状物质的量与水相相比极其少所导致的菌体成分向油状物质中均一地分散的困难性，尝试了使BCG-CWS的原粉末分散在等渗液中；然后加油状物质、进行分散，加表面活性剂使其进行乳化的水包油型乳剂的制造方法。对于这个初期研究制品，尽管粒度分布及在显微镜下的状态同已知的临用时调制的制剂相比几乎相同，可是生物活性(小鼠的抑制肿瘤增殖活性)却失活了。另外，除去了油状物质的制品，生物活性同样地失去。如此地，以细菌的菌体成分为有效成分制剂的生物学上的有效性，与制剂内容及制造方法有关联，受其的影响较大。对此，即使将细菌的菌体成分的水溶液或水混悬液单独给予，也不能得到显示出免疫强化作用的抗肿瘤效果及预防感染效果，但细菌的菌体成分通过均质器等的分散机使其分散在油状物质中，进一步用表面活性剂使其乳化，被制剂化形成水包油型乳剂的时候，抗肿瘤效果及预防感染效果被发挥出来(Cancer Resarch,33,2187-2195(1973)、J.Nat.CancerInst.,48,831-835(1972)、J.Bacteriol.,94,1736-1745(1967)、Gann,69,619-626(1978)、J.Bacteriol.,92,869-879(1966))，由此也能够确证。本专利技术者们发现对于维持有效的免疫强化作用、并且以大规模制造上述水包油型乳剂来说，有必要将菌体成分用油状物质充分覆盖，为此使用有机溶剂作为分散辅助溶剂是适宜的。即，在本专利技术中，通过将具有免疫强化作用的菌体成分在油状物质和由有机溶剂组成的分散辅助溶剂的混合液中进行分散，可以克服因使用的油状物质的量少所至的分散步骤的困难性。如此，通过在分散步骤中使用由有机溶剂组成的辅助溶剂，使制造工艺中的全体容量的控制成为可能；另外将补助溶剂的容量达到最终制剂的容量程度，使在制造的全部过程之中，用一种分散乳化机器制造成为可能。据此，对于以菌体成分为有效成分的水包油型乳剂的制造，能够容易地按比例放大，为医药品的开发铺平了道路。另外，在以后详细叙述的那样，菌体成分能否被油状物质充分地覆盖，可以通过添加外源凝集素所致的凝聚反应的有无来确定。即，与本专利技术有关的第二个课题解决方法的要点表示如下。(1)含有以下的步骤为其特征的、细菌的菌体成分被油状物质覆盖，使用外源性凝集素的凝聚反应显示阴性的水包油型乳剂的制造方法(a)搅拌细菌的菌体成分、油状物质、以及由有机溶剂组成的分散辅助溶剂的混合液，分散细菌的菌体成分；(b)通过除去分散辅助溶剂，使细菌的菌体成分被油状物质覆盖后的油滴形成后；(c)加入含有表面活性剂的水溶液使其乳化。(2)上述(1)记载的水包油型乳剂的制造方法，细菌的菌体成分是BCG-CWS或者红色诺卡氏菌的CWS。(3)上述(1)记载的水包油型乳剂的制造方法，细菌的菌体成分是BCG-CWS，油状物质是角鲨烷。(4)上述(1)、(2)、或(3)记载的水包油型乳剂的制造方法，分散辅助溶剂是乙醇或甲苯。(5)上述(1)、(2)、(3)或(4)记载的水包油型乳剂的制造方法，油滴被良好地分散成约100μm以下的粒径。通过上述的第二个问题的解决方法，既保持免疫强化作用、又使以细菌的菌体成分为有效成分的水包油型乳剂的大量生产成为了可能；但是在它的制造过程中，可见到无法忽略的量的菌体成分不能被乳化，以不溶性物质付着在乳化·分散机器等上。从菌体成分的有效利用方面来看，这是较严重的问题。本专利技术者们，对用油状物质来充分覆盖的细菌的菌体成分，具体地说使用BCG-CWS进行乳化、制剂化的深入研究的结果，发现在制备水包油型乳剂后，本文档来自技高网...

【技术保护点】
将含有细菌的菌体成分、油状物质、表面活性剂以及稳定剂，具有下述特征的水包油型乳剂进行冷冻干燥处理得到的稳定化冷冻干燥制剂： （ａ）在油滴中含有细菌的菌体成分； （ｂ）油滴以单峰型的粒径分布在水溶液中分散； （ｃ）对于冷冻干燥前后的水溶液中的油滴的粒径分布以及浊度的变化不大。

【技术特征摘要】
JP 1998-7-16 202366/98;JP 1998-8-21 236148/98;JP 11．将含有细菌的菌体成分、油状物质、表面活性剂以及稳定剂，具有下述特征的水包油型乳剂进行冷冻干燥处理得到的稳定化冷冻干燥制剂(a)在油滴中含有细菌的菌体成分；(b)油滴以单峰型的粒径分布在水溶液中分散；(c)对于冷冻干燥前后的水溶液中的油滴的粒径分布以及浊度的变化不大。2．权利要求第1项记载的稳定化冷冻干燥制剂，水溶液浊度的变化是冷冻干燥前浊度的50％以下。3．权利要求第1或2项记载的稳定化冷冻干燥制剂，其中细菌的菌体成分是BCG-CWS，油状物质是角鲨烷。4．权利要求第1到3项的任何一个记载的稳定化冷冻干燥制剂，其中稳定剂是氨基酸或尿素。5．权利要求第1到3项的任何一个记载的稳定化冷冻干燥制剂，其中稳定剂是甘氨酸。6．包括将含有细菌的菌体成分、油状物质、表面活性剂以及稳定剂、具有下述特征的水包油型乳剂进行冷冻干燥处理步骤的稳定化冷冻干燥制剂的制造方法(a)在油滴中含有细菌的菌体成分；(b)油滴以单峰型的粒径分布在水溶液中分散；(c)对于冷冻干燥前后的水溶液中的油滴，其粒径分布以及浊度的变化不大。7．权利要求第6项记载的稳定化冷冻干燥制剂的制造方法，溶液浊度的变化是冷冻干燥前浊度的50％以下。8．权利要求第6或7项记载的稳定化冷冻干燥制剂的制造方法，其中细菌的菌体成分是BCG-CWS，油状物质是角鲨烷。9．权利要求第6到8项的任何一个记载的稳定化冷冻干燥制剂的制造方法，其中稳定剂是氨基酸或尿素。10．权利要求第6到8项的任何一个记载的稳定化冷冻干燥制剂的制造方法，其中稳定剂是甘氨酸。11．包括以下的步骤为其特征的、细菌的菌体成分被油状物质...

【专利技术属性】
技术研发人员：东市郎，滨松典郎，藤永稔夫，
申请(专利权)人：东市郎，林昭，住友制药株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]