本发明专利技术化学合成的ＨＳＶ２病毒ｇＤ糖蛋白胞外区基因片段及其表达、应用涉及基因工程技术、疫苗和诊断试剂领域。本发明专利技术通过计算机分析，筛选出含强抗原表位的ＨＳＶ２病毒ｇＤ糖蛋白胞外区片段，第１个氨基酸至第２８６个氨基酸，共２８６个氨基酸，选择真核和原核生物均偏爱的密码子，化学合成抗原表位的全新基因序列，利用基因工程技术表达该基因片段、制备ＨＳＶ２病毒ｇＤ糖蛋白的强抗原表位片段及ＨＳＶ２病毒ｇＤ糖蛋白的抗血清。表达的ＨＳＶ２病毒ｇＤ糖蛋白可用于疫苗、ＨＳＶ２病毒抗体或抗原的检测及用于免疫制备抗ＨＳＶ２病毒单抗和多抗等。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术化学合成的HSV2病毒gD糖蛋白胞外区基因片段及其表达、应用涉及的是 化学合成的HSV2病毒gD糖蛋白胞外区的全新基因片段，利用基因工程技术，制备重组HSV2 病毒gD糖蛋白。通过计算机分析，筛选出含强抗原表位的HSV2病毒的gD糖蛋白胞外区片段，选择真核和原核生物均偏爱的密码子，化学合成全新的基因序列，利用基因工程技术表 达，表达的蛋白可用于疫苗及HSV2病毒抗体或抗原的检测等，本专利技术涉及基因工程技术、 疫苗和诊断试剂领域。
技术介绍
单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus, HSV)是最早发现的人类疱疹病毒，容易导 致复发性感染和潜伏感染，对人体危害严重，分为HSV-1及HSV-2两个血清型。1型单纯疱 疹病毒主要引起口面部感染、眼部感染和疱疹性脑炎等；而2型主要引起生殖器感染，并且 和女性宫颈癌的发生密切相关。近年HSV2的感染显著增多，约占该病的10% 40%。目 前药物治疗HSV感染时常出现相应耐药性，所以研制疫苗是切实可行的有效方法，它能使 机体在抗HSV感染免疫中，发挥体液免疫和细胞免疫功能来消除HSV感染。至今已研制了 多种HSV疫苗，已有两种HSV糖蛋白疫苗进入III期临床试验，即Chiron公司研制的重组 gD2/gB2糖蛋白与MF59佐剂配伍而成的疫苗以及Glaxo Smith Kline (GSK)公司开发的重 组gD2糖蛋白与另一佐剂(3-de-0-酰化单磷酸类脂A和明矾)配伍而成的疫苗，这两种疫 苗均有一定的保护作用，但临床效果有限。国内目前对HSV疫苗的研究，主要集中在DNA核 酸疫苗的探索研究方面。 目前认为HSV基因组有34个基因，编码70多种蛋白质，其中胞膜糖蛋白正式命名 的有12种，它们以独特或复合体的形式在HSV复制循环及病毒的感染致病中发挥不同的作 用。其中gD由HSV的US6基因编码，是病毒胞膜的主要成分，对于病毒与细胞稳定结合具 有重要意义，促进病毒胞膜和细胞间的溶解，介导病毒的胞间扩散、释放。同时gD蛋白在病 毒的复制和剌激中和抗体的产生中起重要作用，也是宿主细胞免疫和体液免疫反应的主要 耙标之一，因此HSV2gD糖蛋白是构建HSV基因疫苗理想的目的基因。 HSV2病毒gD糖蛋白基因全长1185bp，编码312个氨基酸序列的胞外区、54个氨基 酸序列的跨膜区、28氨基酸序列的胞内区。研究表明，为增强编码抗原蛋白的免疫原性，可 去除其部分功能性编码序列，特别在完整抗原蛋白对宿主具有毒性或免疫抑制作用的情况 下，对抗原蛋白进行截短表达就尤其重要。而截短后的gD基因构建的疫苗，与用完整gD基 因构建的疫苗对HSV2病毒攻击具有相同的保护作用。
技术实现思路
本专利技术目的针对上述不足之处提供一种化学合成的HSV2病毒gD糖蛋白胞外区基 因片段及其表达、应用，是化学合成的HSV2病毒gD糖蛋白胞外区的全新基因片段，利用基3因工程技术，制备重组HSV2病毒gD糖蛋白胞外区片段。通过计算机分析，筛选出含强抗原 表位的HSV2病毒gD糖蛋白胞外区片段，第1个氨基酸到第286个氨基酸，共286个氨基酸，选择真核和原核生物均偏爱的密码子，化学合成全新的基因序列，利用基因工程技术表 达该基因。表达的蛋白可用于疫苗、HSV2病毒抗体或抗原的检测及用于免疫制备抗HSV2病毒单抗和多抗等。 化学合成的HSV2病毒gD糖蛋白胞外区基因片段及其表达、应用是采取以下步骤 实施的 1. HSV2病毒gD糖蛋白胞外区抗原表位的筛选及其基因片段的化学合成 利用ANTHEWIN等软件，通过计算机分析HSV2病毒gD糖蛋白的氨基酸序列，发现 gD糖蛋白的N端(第l氨基酸到第286氨基酸)含有较强的抗原决定簇。选择真核和原 核生物均偏爱的密码子，化学合成全新的基因序列，并且在5'端增加了 Hind III酶切位点 (下画线部分)，转录调控序列(GCCGCCACC)，起始密码子(ATG)，人IgG k轻链信号肽(波 浪线部分)，8XHis标签及TEV蛋白酶酶切位点(gaaaacctgtacttccagggt)，在3'端增加了 终止密码子(TAA)和BamH I酶切位点(下画线部分)，使该基因片段易于克隆至质粒pCEP4 内的Hind III和BamH I酶切位点内，并且使gD蛋白更易于表达和纯化。筛选的HSV2病毒gD糖蛋白内的抗原表位氨基酸序列(第l个氨基酸到第286个氨基酸):LysTyr Ala Leu Ala Asp Pro Ser Leu Lys Met Ala AspProAsnArgPheArg GlyLysAsnLeu Pro Val Leu Asp Gin Leu Thr Asp Pro Pro GlyValLysArgValTyr HislieGinProSer Leu Glu Asp Pro Phe Gin Pro Pro Ser lieProlieThrValTyr TyrAlaValLeuGluArg Ala Cys Arg Ser Val Leu Leu His AlaProSerGluAlaPro GinlieValArgGly AlaSer Asp Glu Ala Arg Lys His Thr TyrAsnLeuThrlieAla TrpTyrArgMetGly Asp AsnCys Ala lie Pro lie Thr Val MetGluTyrThrGluCys ProTyrAsnLysSer Leu Gly ValCys Pro lie Arg Thr Gin ProArgTrpSer TyrTyr AspSerPheSerAla Val Ser Glu AspAsn Leu Gly Phe Leu MetHisAlaProAlaPhe GluThrAlaGlyThr Tyr Leu Arg Leu ValLys lie Asn Asp TrpThrGlulieThrGin PhelieLeuGluHis Arg Ala Arg Ala Ser CysLys Tyr Ala LeuProLeuArgliePro ProAlaAlaCysLeu Thr Ser Lys Ala Tyr Gin GlnGly Val ThrValAspSerlieGly MetLeuProArgPhe lie Pro Glu Asn Gin Arg Thr ValAla LeuTyrSerLeu Lyslie AlaGlyTrpHisGly Pro Lys Pro Pro Tyr Thr Ser Thr LeuLeuProProGluLeuSer AspThrThrAsnAla Thr Gin Pro Glu Leu Val Pro Glu Asp ProGluAspSerAlaLeu LeuGluAspProAla Gly Thr Val化学合成的含HSV2病毒gD糖蛋白胞外区抗原表位基因的DNA序列(987bp)AAGCTT GCC GCCACCATG GAA ACC CCA GCG CAG CTT CTC TTC CTC CTG CTA CTC TGG CTC CCA GAT ACC ACC GGACAT CAT CAC CAT CAC本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种化学合成的ＨＳＶ２病毒ｇＤ糖蛋白胞外区基因片段，该基因片段编码含强抗原表位的ＨＳＶ２病毒的ｇＤ糖蛋白胞外区片段，即第１个氨基酸至第２８６个氨基酸，共２８６个氨基酸，化学合成的基因序列全长８５８ｂｐ，序列如下： ＡＡＧ ＴＡＣ ＧＣＴＣＴＧ ＧＣＣ ＧＡＴ ＣＣＴ ＡＧＣ ＣＴＧ ＡＡＧ ＡＴＧ ＧＣＴ ＧＡＴ ＣＣＴ ＡＡＣ ＣＧＣ ＴＴＣ ＡＧＡＧＧＴ ＡＡＧ ＡＡＣ ＣＴＧ ＣＣＴ ＧＴＧ ＣＴＧ ＧＡＣ ＣＡＧ ＣＴＧ ＡＣＣ ＧＡＣ ＣＣＴ ＣＣＴ ＧＧＣ ＧＣＴＧ ＣＴＧ ＧＡＧ ＧＡＣ ＣＣＴ ＧＣＴ ＧＧＴ ＡＣＣ ＧＴＧ。ＴＧ ＡＡＧ ＡＧＡＧＴＧ ＴＡＣ ＣＡＣ ＡＴＴ ＣＡＧ ＣＣＴ ＡＧＣ ＣＴＧ ＧＡＧ ＧＡＣ ＣＣＴ ＴＴＣ ＣＡＧ ＣＣＴ ＣＣＴ ＡＧＣ ＡＴＴ ＣＣＴＡＴＣ ＡＣＣ ＧＴＧ ＴＡＣ ＴＡＣ ＧＣＣ ＧＴＧ ＣＴＧ ＧＡＧ ＡＧＡＧＣＣ ＴＧＴ ＣＧＣ ＡＧＣ ＧＴＧ ＣＴＧ ＣＴＧ ＣＡＣＧＣＴ ＣＣＴ ＡＧＣ ＧＡＧ ＧＣＴ ＣＣＴ ＣＡＧ ＡＴＣ ＧＴＧ ＡＧＡ ＧＧＴ ＧＣＴ ＡＧＣ ＧＡＣ ＧＡＡ ＧＣＣ ＡＧＧ ＡＡＧＣＡＣ ＡＣＣ ＴＡＣ ＡＡＣ ＣＴＧ ＡＣＣ ＡＴＣ ＧＣＣ ＴＧＧ ＴＡＣ ＡＧＧ ＡＴＧ ＧＧＴ ＧＡＣ ＡＡＣ ＴＧＴ ＧＣＴ ＡＴＣＣＣＴ ＡＴＣ ＡＣＣ ＧＴＧ ＡＴＧ ＧＡＧ ＴＡＣ ＡＣＣ ＧＡＧ ＴＧＴ ＣＣＣ ＴＡＣ ＡＡＣ ＡＡＧ ＡＧＣ ＣＴＧ ＧＧＣ ＧＴＧＴＧＴ ＣＣＴ ＡＴＣ ＣＧＣ ＡＣＣ ＣＡＧ ＣＣＴ ＡＧＧ ＴＧＧ ＡＧＣ ＴＡＣ ＴＡＣ ＧＡＣ ＡＧＣ ＴＴＣ ＡＧＣ ＧＣＴ ＧＴＧＡＧＣ ＧＡＧ ＧＡＣ ＡＡＣ ＣＴＧ ＧＧＣ ＴＴＣ ＣＴＧ ＡＴＧ ＣＡＣ ＧＣＴＣＣＴ ＧＣＣ ＴＴＣ ＧＡＧ ＡＣＣ ＧＣＴ ＧＧＣＡＣＣ ＴＡＣ ＣＴＧ ＡＧＧ ＣＴＧ ＧＴＧ ＡＡＧ ＡＴＣ ＡＡＣ ＧＡＣ ＴＧＧ ＡＣＣ ＧＡＧ ＡＴＣ ＡＣＣ ＣＡＧ ＴＴＣ ＡＴＣＣＴＧ ＧＡＧ ＣＡＣ ＡＧＡ ＧＣＣ ＡＧＡ ＧＣＣ ＡＧＣ ＴＧＴ ＡＡＧ ＴＡＣ ＧＣＴ ＣＴＧ ＣＣＴ ＣＴＧ ＡＧＡ ＡＴＣ ＣＣＴＣＣＴ ＧＣＣ ＧＣＴ ＴＧＴ ＣＴＧ ＡＣＣ ＴＣＣ ＡＡＧ ＧＣＣ ＴＡＣ ＣＡＧ ＣＡＡ ＧＧＣ ＧＴＧ ＡＣＣ ＧＴＧ ＧＡＣ ＡＧＣＡＴＣ ＧＧＴ ＡＴＧ ＣＴＧ ＣＣＴ ＣＧＣ ＴＴＣ ＡＴ...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李越希，王正茂，王忠灿，管文燕，李琳，李素芹，潘英，潘明洁，
申请(专利权)人：李越希，
类型：发明
国别省市：84[中国|南京]
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