监测视网膜病的方法技术

本发明专利技术提供一种在活的转基因的非人类的动物中监测视网膜病的方法，该方法包括：提供活的转基因的非人类的动物，该动物具有视网膜病或具有易患视网膜病的体质，其中在ＧＦＡＰ助催化剂的控制下对荧光蛋白质编码的核酸分子被整合到所述转基因的非人类的动物的基因组中；以及在所述转基因的非人类的动物的视网膜神经胶质中活体检测所述荧光蛋白质的荧光水平。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及在活体视网膜内。
技术介绍
对于对"初级"视网膜病(源于眼睛障碍)和对"次级，，视网膜病(源 于在除了眼晴之外的器官的系统障碍)的活体临床前期筛查，以及对于候 补治疗剂的功效和可能的毒性的监测，在视网膜病的实验模型的视网膜中 的gliotic反应的无创伤性荧光分子成像受到关注。各种眼部条件以及在眼睛外部的众多系统可引起视网膜病，而视网膜 病是导致视场损失或致盲的视网膜非炎性变性疾病。利用视网膜检查和/或视神经检查可诊断多种视网膜障碍。这种障碍的 例子包括高血压、与外围细动脉收缩相关联的系统血压的慢性增加(Tien Yin Wong， 2004; Hammond S， 2006; Topouzis F， 2006 )、血管病 (Yamakawa K, 2001; McCulley TJ， 2005)、先天性心脏病 (Mansour 等人，2005)、自身免疫性疾病(例如风湿性关节炎，其引起关节和其他身 体部位的慢性炎症)(Giordano N, 19卯；Aristodemou P, 2006 )、多发性 硬化症(其包括对中枢神经系统(CNS )中的神经元髓鞘的破坏)(Lucarelli MJ， 1991; Kenison JB, 1994; Lycke J， 2001 )、神经纤维瘤病(Chan CC, 2002; Karadimas P， 2003; Ruggieri M， 2004 )、莱姆神经疏螺旋体病5(Burkhard等人，2001 )、唐氏综合症(Satge D， 2005; Liza-Sharmini AT, 2006 )、孤独症(Ek等人，1998 )、镰状细胞贫血(Sandstrom H， 1997; Chalam KV, 2004; Shakoor A， 2005; Lima C S， 2006 )、传染病例如HIV( A R Irvine, 1997; Kozak 1， 2005; V T Phaml， 2005 )和细胞巨化病毒(Vogd JU， 2005; Zhang M， 2005a; Zhang M5 2005b )、糖尿病(Antonetti DA， 2006; Takahashi H， 2006; Vujosevic S， 2006 )、甲状腺障碍症(Bahceci UA， 2005; Mader MM, 2006; Roberts MR5 2006 )、肝脏障碍症(Heidrun Kuhrt, 2004; Coiakogiu Onder, 2005 )、眼部疾病例如视网膜襞裂症(Kirsdi等人，1996 )、 老年性黄斑变性(Guidry等人，2002)和青光眼(Wang L, 2002)、以 及坤申经组织变性疾病(Blanks JC， 1996a; Helmlinger D， 2002 )。视网膜的活体成像方法通常为反射成像或造影注射荧光血管造影术(Hawes NL, 1999; Bruce E. Cohan, 2003 )，但这些方法不允许看到分子 级的改变。此外，在注射造影剂时可能导致疤痕、渗漏和发炎反应，影响 所获得的效果(Ritter等人，2005 )。因此，存在对这样的视网膜病模型的需求，该视网膜病模型允许活体、 无创伤性地监测视网膜病的状态，用于与疾病t艮、预后、以及对潜在的 治疗功效和毒性的评估有关的应用。
技术实现思路
在一个方面，本专利技术提供一种，其包括提供活 的转基因的非人类的动物，该动物具有视网膜病或具有易患视网膜病的体 质，其中在GFAP助催化剂的控制下对荧光蛋白质编码的核酸分子被整合 到所述转基因的非人类的动物的基因组中；以及在所述转基因的非人类的 动物的视网膜神经胶质中在第一时刻活体检测所述荧光蛋白质的第一焚光 水平，并且在第二时刻活体检测所述荧光蛋白质的第二荧光水平。在另一方面，本专利技术还提供一种，其包括提供 活的第一转基因的非人类的动物，该动物具有视网膜病或具有易患视网膜 病的体质，其中在GFAP助催化剂的控制下对荧光蛋白质编码的核酸分子被整合到所述第一转基因的非人类的动物的基因组中；提供活的第二转基 因的非人类的动物，该动物不具有视网膜病或不具有易患视网膜病的体质， 其中在GFAP助催化剂的控制下对荧光蛋白质编码的核酸分子被整合到所 述第二转基因的非人类的动物的基因组中；以及在所述第一转基因的非人类的动物的视网膜神经胶质中活^测所述荧光蛋白质的第一荧光水平， 并且在所述第二转基因的非人类的动物的视网膜神经胶质中活体检测所述 荧光蛋白质的第二荧光水平。在结合附图阅览了对本专利技术的具体实施例的以下描述之后，对于本领 域普通技术人员而言，本专利技术的其他方面和特征将变得明显。附图说明在通过实例示例本专利技术的实施例的附图中图1:成年鼠视网膜的视神经盘中的经盐水处理的和神经毒物KA诱 导的GFP提高的荧光分子成像。GFP荧光在第7天在视神经盘的边缘附 近达到最大值；图2:在单次ip注射之后7天视网膜的神经纤维层(NFL )中的显示 出KA诱导的神经M增生的整个视网膜的平铺图像。在经盐水处理的受 控鼠的整个视网膜中可看到GFP和GFAP表示的基准水平；尺度条 =200/tnr，图3:在单次神经毒物ip注射(箭头所示)之后7天通过反应星形胶 质细胞的突起和细胞体而被包膜的经KA处理的鼠(右侧合并的图像)的 gliotic视网膜中的视网膜脉管系统。用转基因GFP标示星形M细胞体和 突起，但GFAP标示通常被限定为突起(箭头所示)。在经盐水处理的受 控鼠(左侧合并的图像)的整个视网膜中可看到GFP和GFAP (红色)表 示的基准水平；尺度条-50/un;图4:聚焦在以贯穿整个视网膜的深度等间距设置的经KA处理的鼠 的视神经盘处的一系列共焦图像表明在神经毒物的单次ip注射之后7天诱 导的神经胶质增生。在从神经纤维层(NFL)和神经节细胞层开始进入内部丛状层(15-20/on)的约0-15/tm处的星形胶质细胞体和突起中显示出神 经胶质增生的程度。另外，在20gm处清楚示出的是在浮见神经盘附近区域 中Mtiller细胞的反应性突起的横断图显著的位置。在经盐水处理的受控鼠 的整个视网膜中也可看到有关转基因GFP表示水平的各种深度信息；尺度 条=100/*111;图5:在神经毒物的施用之后7天在整个海马的星形胶质细胞(绿色， 10Am的大小)中的神经毒物KA诱导的严重神经胶质增生，如通过转基 因GFP荧光和GFAP抗体着色(红色)所揭示的。经盐水处理的受控鼠 大脑的海马中可看到GFP和GFAP表示的基准水平；尺度条=200^11。在 合并图像中以黄色指示由GFP和GFAP双重标示的细胞；图6:在神经毒物的施用之后7天在海马的CA1区域中的神经毒物 KA诱导的神经胶质增生。在经盐水处理的受控鼠大脑的CA1区域中可看 到GFP和GFAP表示的基准线水平；尺度条-100/im;图7:在神经毒物的施用之后7天在海马的CA3区域中的神经毒物 KA诱导的神经月交质增生。在经盐水处理的受控鼠大脑的CA3区域中可看 到GFP和GFAP表示的基准线水平；尺度条=100/*111;图8:在神经毒物的施用之后7天在海马的齿状脑回区域中的神经毒 物KA诱导的神经胶质本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种监测视网膜病的方法，包括：　提供活的转基因的非人类的动物，该动物具有视网膜病或具有易患视网膜病的体质，其中在ＧＦＡＰ助催化剂的控制下对荧光蛋白质编码的核酸分子被整合到所述转基因的非人类的动物的基因组中；以及　在所述转基因的非人类的动 物的视网膜神经胶质中在第一时刻活体检测所述荧光蛋白质的第一荧光水平，并且在第二时刻活体检测所述荧光蛋白质的第二荧光水平。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：L卓，G何，S库马尔，
申请(专利权)人：新加坡科技研究局，
类型：发明
国别省市：SG[新加坡]