还原酶、其基因及其利用方法技术

本发明专利技术提供能够将邻位取代的苯乙醛酸化合物不对称还原而在工业上有利地制造对应的光学活性的邻位取代的苯乙醇酸的酰胺或酯化合物的蛋白质、编码该蛋白质的ＤＮＡ、从该ＤＮＡ制造该蛋白质的方法以及使用该蛋白质将邻位取代的苯乙醛酸化合物不对称还原从而制造对应的光学活性的邻位取代的苯乙醇酸化合物的方法等。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及新型还原酶和编码该还原酶的DNA、包含该DNA的重组载体、和用该重组载体进行转化的转化体等。本专利技术还涉及使用了新型还原酶或该转化体的作为光学活性 醇的光学活性的苯乙醇酸化合物等的制造方法。
技术介绍
光学活性的邻位取代的苯乙醇酸化合物是在医农药等的制造中有用的化合物，迄 今为止提出了使用不对称还原试剂的制造方法等，在国际公开编号W00210101号记载的方 法中，为了提高光学纯度在反应后进一步进行重结晶等，在有机快报(Organic Letters), 2005，第7卷，24号，5425-5427页中记载的反应中，反应的光学收率也未必可以称为充分。 另外，迄今为止还不知道使用微生物等将邻位上具有取代基的立体上处于复杂环境的苯乙 醛酸化合物的酮基还原，从而不对称还原为光学活性的苯乙醇酸化合物的方法。
技术实现思路
本专利技术提供以良好的光学收率将邻位上具有取代基的苯乙醛酸化合物还原为光 学活性的苯乙醇酸化合物的方法。更具体而言，本专利技术提供能够将邻位取代的苯乙醛酸化合物不对称还原并在工业 上有利地制造对应的光学活性的邻位取代的苯乙醇酸的酰胺或酯化合物的蛋白质、编码该 蛋白质的DNA(以下简称为本专利技术DNA)、包含该DNA的转化体、从该DNA制造该蛋白质的方 法、以及使用该蛋白质来将邻位取代的苯乙醛酸化合物不对称还原从而制造对应的光学活 性的邻位取代的苯乙醇酸化合物的方法。S卩，本专利技术提供1.由下述a) d)中的任何碱基序列构成的DNA，a)编码用序列编号1表示的氨基酸序列的碱基序列；b)i)相对于由编码序列编号1所示的氨基酸序列的碱基序列构成的DNA具有至少 90%序列同源性的DNA的碱基序列，并且ii)是对如下所述蛋白质的氨基酸序列进行编码 的碱基序列，所述蛋白质具有将邻位取代的苯乙醛酸化合物不对称还原来生产对应的光学 活性的邻位取代的苯乙醇酸化合物的能力；c)i)在严格条件下与由编码序列编号1所示的氨基酸序列的碱基序列构成的DNA 杂交的DNA的碱基序列，并且ii)是对如下所述蛋白质的氨基酸序列进行编码的碱基序列， 所述蛋白质具有将邻位取代的苯乙醛酸化合物不对称还原来生产对应的光学活性的邻位 取代的苯乙醇酸化合物的能力；和d)用序列编号2表示的碱基序列。2. 一种DNA，其特征在于，以能够发挥功能的形式将能够在宿主细胞内发挥功能 的启动子与权利要求1所述的DNA连接而形成。3. 一种重组载体，其特征在于，包含上述第1或2项所述的DNA。4. 一种转化体，其特征在于，通过将上述第2项所述的DNA或上述第3项所述的重 组载体导入宿主细胞而形成。5.根据上述第4项所述的转化体，其特征在于，宿主细胞为微生物。6.根据上述第4项所述的转化体，其特征在于，宿主细胞为大肠杆菌。7. 一种转化体，其特征在于，包含上述第1项所述的DNA。8. 一种转化体的制造方法，其特征在于，包括将上述第3项所述的重组载体导入宿主细胞的步骤。9.由下述a) e)中的任何氨基酸序列构成的蛋白质，a)用序列编号1表示的氨基酸序列；b) i)相对于由序列编号2所示的碱基序列构成的DNA具有至少90%序列同源性 的DNA的碱基序列所编码的氨基酸序列，并且ii)是如下所述的蛋白质的氨基酸序列，所述 蛋白质具有将邻位取代的苯乙醛酸化合物不对称还原来生产对应的光学活性的邻位取代 的苯乙醇酸化合物的能力；c) i)在严格条件下与由序列编号2所示的碱基序列构成的DNA杂交的DNA的碱基 序列所编码的氨基酸序列，并且ii)是如下所述的蛋白质的氨基酸序列，所述蛋白质具有 将邻位取代的苯乙醛酸化合物不对称还原来生产对应的光学活性的邻位取代的苯乙醇酸 化合物的能力；d) i)用序列编号1表示的氨基酸序列中缺失、置换或附加1个或多个氨基酸的氨 基酸序列，并且ii)是如下所述的蛋白质的氨基酸序列，所述蛋白质具有将邻位取代的苯 乙醛酸化合物不对称还原来生产对应的光学活性的邻位取代的苯乙醇酸化合物的能力；和e) i)与序列编号1所示的氨基酸序列的序列同源性至少为90%的氨基酸序列，并 且ii)是如下所述的蛋白质的氨基酸序列，所述蛋白质具有将邻位取代的苯乙醛酸化合物 不对称还原来生产对应的光学活性的邻位取代的苯乙醇酸化合物的能力。10. 一种重组载体，其特征在于，包含上述第1项所述的DNA和具有对如下所述蛋 白质的氨基酸序列进行编码的碱基序列的DNA，所述蛋白质具有将氧化型β -烟酰胺腺嘌 呤二核苷酸或氧化型β“烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸转换为还原型的能力。11.根据上述第10项所述的重组载体，其特征在于，具有将氧化型β -烟酰胺腺嘌 呤二核苷酸或氧化型β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸转换为还原型的能力的蛋白质，为葡 萄糖脱氢酶。12.根据上述第11项所述的重组载体，其特征在于，具有葡萄糖脱氢酶活性的蛋 白质为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)来源的葡萄糖脱氢酶。13. 一种转化体，其特征在于，通过将上述第10 12项所述的重组载体导入宿主 细胞而得到。14.根据上述第13项所述的转化体，其中，宿主细胞为微生物。15.根据上述第13项所述的转化体，其中，宿主细胞为大肠杆菌。16. 一种转化体，其特征在于，包含上述第1项所述的DNA和具有对如下所述蛋白 质的氨基酸序列进行编码的碱基序列的DNA，所述蛋白质具有将氧化型β -烟酰胺腺嘌呤 二核苷酸或氧化型β“烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸转换为还原型的能力。17. 一种光学活性醇的制造方法，其特征在于，使上述第9项所述的蛋白质、或上述第4 7、13 16项中任一项所述的转化体、或其处理物，与前手性羰基化合物反应。18.根据上述第17项所述的制造方法，其中，前手性羰基化合物为邻位取代的苯 乙醛酸的酰胺或酯化合物，对应的光学活性的醇化合物为光学活性的邻位取代的苯乙醇酸 的酰胺或酯化合物。19.根据上述第18项所述的制造方法，其中，邻位取代的苯乙醛酸的酰胺或酯化 合物为式(1)所示的化合物，光学活性的邻位取代的苯乙醇酸的酰胺或酯化合物为式(2) 所示的光学活性化合物， (1)式(1)中，R1表示可被取代的氨基或可被取代的烷氧基，R2表示可被取代的C1-8烧基， (2)式(2)中，R1和R2表示与上述相同的含义，带*标记的碳原子为手性碳原子。20.寡养单胞菌(Stenotrophomonas sp.) SC-I (FERM BP-10785)。根据本专利技术，能够以良好的光学纯度制造作为医农药或其制造中间体等有用的光 学活性的邻位取代的苯乙醇酸的酰胺或酯化合物。具体实施例方式首先，对本专利技术DNA进行说明。本专利技术DNA可以从具有将邻位取代的苯乙醛酸化合物不对称还原为对应的 光学活性的邻位取代的苯乙醇酸化合物的能力的微生物中获得，例如从寡养单胞菌 (Stenotrophomonas sp.) SC-1菌株(FERM BP-10785)等归属于寡养单胞菌属的微生物中获 得。本专利技术的DNA可以是所述天然的DNA，或者也可以是通过以下说明的方法在所述天然的 DNA中导入变异(位点定向诱变法、突变处理等)而制成的DNA。寡养单胞菌(Stenotrophomonas sp. ) SC-I菌株保藏于独立行政法人产业技术综 合研本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种由下述ａ）～ｄ）中的任何碱基序列构成的ＤＮＡ，ａ）编码用序列编号１表示的氨基酸序列的碱基序列；ｂ）ｉ）相对于由编码序列编号１所示的氨基酸序列的碱基序列构成的ＤＮＡ具有至少９０％序列同源性的ＤＮＡ的碱基序列，并且ｉｉ）是对如下所述蛋白质的氨基酸序列进行编码的碱基序列，所述蛋白质具有将邻位取代的苯乙醛酸化合物不对称还原来生产对应的光学活性的邻位取代的苯乙醇酸的酰胺或酯化合物的能力；ｃ）ｉ）在严格条件下与由编码序列编号１所示的氨基酸序列的碱基序列构成的ＤＮＡ杂交的ＤＮＡ的碱基序列，并且ｉｉ）是对如下所述蛋白质的氨基酸序列进行编码的碱基序列，所述蛋白质具有将邻位取代的苯乙醛酸的酰胺或酯化合物不对称还原来生产对应的光学活性的邻位取代的苯乙醇酸的酰胺或酯化合物的能力；和ｄ）用序列编号２表示的碱基序列。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】JP 2007-3-22 074376/2007;JP 2008-1-22 011299/2008一种由下述a)～d)中的任何碱基序列构成的DNA，a)编码用序列编号1表示的氨基酸序列的碱基序列；b)i)相对于由编码序列编号1所示的氨基酸序列的碱基序列构成的DNA具有至少90％序列同源性的DNA的碱基序列，并且ii)是对如下所述蛋白质的氨基酸序列进行编码的碱基序列，所述蛋白质具有将邻位取代的苯乙醛酸化合物不对称还原来生产对应的光学活性的邻位取代的苯乙醇酸的酰胺或酯化合物的能力；c)i)在严格条件下与由编码序列编号1所示的氨基酸序列的碱基序列构成的DNA杂交的DNA的碱基序列，并且ii)是对如下所述蛋白质的氨基酸序列进行编码的碱基序列，所述蛋白质具有将邻位取代的苯乙醛酸的酰胺或酯化合物不对称还原来生产对应的光学活性的邻位取代的苯乙醇酸的酰胺或酯化合物的能力；和d)用序列编号2表示的碱基序列。2.—种DNA，其特征在于，以能够发挥功能的形式将能够在宿主细胞内发挥功能的启 动子与权利要求1所述的DNA连接而形成。3.一种重组载体，其特征在于，包含权利要求1或2所述的DNA。4.一种转化体，其特征在于，通过将权利要求2所述的DNA或权利要求3所述的重组载 体导入宿主细胞而形成。5.根据权利要求4所述的转化体，其特征在于，宿主细胞为微生物。6.根据权利要求4所述的转化体，其特征在于，宿主细胞为大肠杆菌。7.一种转化体，其特征在于，包含权利要求1所述的DNA。8.一种转化体的制造方法，其特征在于，包括将权利要求3所述的重组载体导入宿主 细胞的步骤。9.一种由下述a) e)中的任何氨基酸序列构成的蛋白质，a)用序列编号1表示的氨基酸序列；b)i)相对于由序列编号2所示的碱基序列构成的DNA具有至少90%序列同源性的DNA 的碱基序列所编码的氨基酸序列，并且ii)是如下所述的蛋白质的氨基酸序列，所述蛋白 质具有将邻位取代的苯乙醛酸化合物不对称还原来生产对应的光学活性的邻位取代的苯 乙醇酸化合物的能力；c)i)在严格条件下与由序列编号2所示的碱基序列构成的DNA杂交的DNA的碱基序列 所编码的氨基酸序列，并且ii)是如下所述的蛋白质的氨基酸序列，所述蛋白质具有将邻 位取代的苯乙醛酸化合物不对称还原来生产对应的光学活性的邻位取代的苯乙醇酸化合 物的能力；d)i)用序列编号1表示的氨基酸序列中缺失、置换或附加1个或多个氨基酸的氨基酸 序列，...

【专利技术属性】
技术研发人员：朝子弘之，
申请(专利权)人：住友化学株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]