检测腺癌的蛋白标志／标记制造技术

本发明专利技术提供一种确定个体中胰腺腺癌存在的和／或确定被胰腺腺癌困扰个体存活时间的方法，该方法包括下列步骤：（ａ）提供需要测试的血清或血浆样品；和（ｂ）通过检测测试样品中一个或更多所选蛋白的存在和／或量，测定测试样品中的蛋白标志；其中在测试样品中选自表１中的群组的一个或更多蛋白的存在和／或量是胰腺腺癌存在的指征。本发明专利技术还提供适合用于本发明专利技术方法的阵列和试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及诊断胰腺腺癌的方法和用于其的生物标记和阵列。
技术介绍
在肿瘤学中一个遗留的挑战是关于患者经历肿瘤复发或药物治疗 抗性的可能性，或他们存活期望，将他们分级。胰腺导管腺癌是解剖位置上最致命的恶性肿瘤，单在美国每年有>30,000的新病例和死亡，并且5年的存活是3-5%。这种极高的死亡 率是由于缺少有效的早期诊断方法(5)和现存治疗对晚期疾病的不良 效果。甚至被诊断有手术可切除肿瘤的患者(10-20%)最终死于复发 和转移疾病。因此检测和预测癌症能力的增加对于个体患者的管理是 重要的。抗体微阵列技术(3)具有提供强大的多元分析的潜能(6,7)并且 已经建议将其作为技术平台，该平台最终将递送确定的蛋白标志 (protein signature),即从正常患者中区分癌症患者的血清蛋白组合。 微阵列技术现在已经成熟到己经克服最初的障碍并且可以分析复杂蛋 白质组中的微量蛋白(8-12)。但是癌症的基因表达图谱只在少数病例 中证明预测存活时间的能力(1，2),目前没有将血清蛋白组合与任何上 述临床参数联系起来。能预测存活时间的血清样品分析将允许更个体化的癌症治疗。这 对于例如其中没有肿瘤特异的标记存在胰腺腺癌得到强调，虽然大多 数患者在诊断时将具有升高的CA19-9，但是胰腺腺癌，已经显示单独 预测标记是非结论性的(4)。另外，非侵入性的方法，例如计算断层 摄影术(computedtomography),没有足够敏感到能检测小的癌，而例 如内窥镜超声图像检查法(endoscopic ultrasonography)可以用于观察 具有胰腺损伤危险的个体(5)。与这一背景相反，本专利技术人现在已经研制了预测性诊断癌症的蛋7白质组方法，并鉴定出用于测定胰腺癌和预测存活的第一套血清生物 标记。
技术实现思路
因此，在第一方面，本专利技术提供一种测定在个体中存在胰腺腺癌 的方法，其包括下列步骤a) 提供需要测试的蛋白样品(例如血清或血浆)；b) 通过测定在测试样品中选自表1中的群组的一个或更多蛋白的 存在和/或量而测定测试样品的蛋白标志；其中在测试样品中的选自表1中的群组的一个或更多蛋白的存在 和/或量是胰腺腺癌存在的指征。蛋白标志包括的意思是在具有癌症的个体中存在的血清蛋白 存在和/或量的组合，并且其可以区别于存在于未被癌症(例如胰腺腺 癌)困扰个体-即正常或健康的个体中的血清蛋白的存在和/或量的组 合。如在随附的实施例中所例证的，存在于测试样品中某些血清蛋白 的存在和/或量可以是个体中癌症，例如胰腺腺癌，存在的指征。例如 在单一测试样品中某些血清蛋白的相对存在和/或量可以是在个体中癌 症，例如胰腺腺癌，存在的指征。优选地，该个体是人类，但是可以是任何哺乳动物例如家养哺乳 动物〈优选地是农业或商业上重要的哺乳动物包括马、猪、牛、羊、 狗和猫)。优选地，本专利技术的第一方面的方法进一步包括下列步骤 C)提供来自未被胰腺腺癌困扰个体的对照血清或血浆样品； d)通过测定对照样品中在步骤(b)中测定的一个或更多蛋白的存在和/或量而测定对照样品的蛋白标志；其中胰腺腺癌的存在是在下面事件中鉴定的测试样品中在步骤 (b)中测定的一个或更多蛋白的存在和/或量与对照样品中步骤(b)中测定的一个或更多蛋白的存在和/或量不同。优选地，测试样品中在步骤(b)中测定的一个或更多蛋白的存在和/或量与对照样品中在步骤(b)中测定的一个或更多蛋白的存在和/8或量显著不同(即统计学上不同)。例如，如在随附的实施例中讨论的， 在测试样品和对照样品中特定蛋白的存在和/或量之间的显著不同可以被归类为那些其中p<0.05的差异。通常，第一方面的方法包括测定在测试样品中在表1中定义的所 有蛋白-即在表1中所有19个蛋白的存在和域量。或者，第一方面的方法可以包括测定在测试样品中在表1中定义 的1或2或3或4或5或6或7或8或9或10或11或12或13或14 或15或16或17或18或19个蛋白的存在和/或量。在优选的具体实施方式中，第一方面的方法包括测定在测试样品 中Rante和/或嗜酸细胞活化趋化因子(Eotaxin)和/或EI禾卩/或TNF-b(l) 和/或TNF-b(2)和/或GLP-1和/或VEGF和/或IL-13和/或CD40的存在 和/或量。在第二方面，本专利技术提供确定被胰腺腺癌困扰个体的存活时间的 方法，其包括下列步骤i) 提供需测试样品的血清或血浆；ii) 通过测定在测试样品中选自表2中的群组的一个或更多蛋白的 存在和/或量而测定测试样品的蛋白标志；其中个体的存活时间是在下列事件中鉴定的在测试样品中选自表2中的群组的一个或更多蛋白的存在和/或量是存活时间在12个月以 下或在12个月以上或在24个月以上的指征。优选地，根据第二方面，该方法进一步包括下列步骤iii) 提供来自存活时间在12个月以下的个体的第一对照血清或血 浆样品和/或来自存活时间在12个月以上和/或24个月以上的个体的第 二对照血清或血浆样品；iv) 通过测定在步骤(ii)中测定的一个或更多蛋白的存在和/或量，测定第一和/或第二对照样品的蛋白标志；其中个体的存活时间是通过比较下列两者鉴定的在测试样品中在步骤(ii)中测定的一个或更多蛋白的存在和/或量与在第一和/或第 二对照样品中在步骤(iv)中测定的一个或更多蛋白的存在和/或量比 较。通过比较在测试样品和对照样品中选定的一个或更多蛋白的存在和/或量，可能确定被胰腺腺癌困扰个体的存活时间。例如，如果测试样品与来自已知具有存活时间在24个月以上的患者的对照样品具有相 同(即同一的)或基本上相似或显著相似的一个或更多选定蛋白的存 在和/或量，则测试样品将被确定为来自具有存活时间在24个月以上患 者的样品。其它这样的比较将会被诊断领域中的技术人员所理解。通常，第二方面的方法包括测定在测试样品中在表2中定义的所 有蛋白-即在表2中的所有22个蛋白的存在和/或量。或者，第一方面的方法可以包括测定在测试样品中在表2中定义 的1或2或3或4或5或6或7或8或9或10或11或12或13或14 或15或16或17或18或19或20或21或22个蛋白的存在和/或量。在优选的具体实施方式中，第一方面的方法包括测定在测试样品 中CD40配体和/或粘液蛋白(mucine)和/或IL-16和/或Rantes禾口/或 嗜酸细胞活化趋化因子和/或MCP-4和/或IL-ll和/或TNF-b和/或 IL-lra和/或MCP-3禾口/或IL-la和/或IL-3和/或C3禾口/或LDL (1)和/或 LDL (2)和/或Lewis Y的存在和/或量。优选地，本专利技术的第一方面提供一种方法，其中使用能够结合一 个或更多蛋白的第一结合试剂完成步骤(b)和/或步骤(d)。优选地， 本专利技术的第二方面提供一种方法，其中使用能够结合一个或更多蛋白 的第一结合试剂完成步骤(ii)和/或步骤(iv)。-根据其结合给定基序的能力，如下面讨论的，结合试剂(也称结 合分子)可以选自文库。 ，至少一种结合分子的类型，更通常的是所有结合分子的类型可以 是抗体或片段或其变体。因此，片段可以含有一个或更多可变重(VH)结构域或可变轻(Vl) 结构域。例如，术语抗体片段包括Fab-样分子(B本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种在个体中测定胰腺腺癌存在的方法，包括下列步骤：　ａ）提供需要测试的血清或血浆样品；　ｂ）通过测定在测试样品中一个或更多蛋白的存在和／或量，测定测试样品的蛋白标志，所述蛋白选自表１中的群组；　其中在测试样品中一个或更多蛋 白的存在和／或量是胰腺腺癌存在的指征，所述蛋白选自表１中的群组。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】GB 2007-3-27 0705876.1;GB 2007-6-25 0712181.71、一种在个体中测定胰腺腺癌存在的方法，包括下列步骤a)提供需要测试的血清或血浆样品；b)通过测定在测试样品中一个或更多蛋白的存在和/或量，测定测试样品的蛋白标志，所述蛋白选自表1中的群组；其中在测试样品中一个或更多蛋白的存在和/或量是胰腺腺癌存在的指征，所述蛋白选自表1中的群组。2、 根据权利要求1所述的方法，进一步包括下列步骤C)提供来自未被胰腺腺癌困扰个体的对照血清或血浆样品；d)通过检测在对照样品中在步骤(b)中检测的一个或更多蛋白的存在和/或量，测定对照样品的蛋白标志； .其中胰腺腺癌的存在是通过下列事件鉴定的在测试样品中在步骤(b)中检测的一个或更多蛋白的存在和/或量与在对照样品中在步骤 (b)中检测的一个或更多蛋白的存在和/或量是不同的。3、 根据权利要求1或2所述的方法，其中步骤(b)包括检测在 测试样品中在表1中定义的所有蛋白的存在和/或量。4、 一种确定被胰腺腺癌困扰个体存活时间的方法，包括下列步骤i) 提供需要测试的血清或血浆样品；ii) 通过检测在测试样品中一个或更多蛋白的存在和/或量，测定测 试样品的蛋白标志，所述蛋白选自表2中的群组；其中个体的存活时间是在下列事件中鉴定的在测试样品中一个或更多选自表2中的群组的蛋白的存在和/或量，是存活时间在12个月 以下或长于12个月或长于24个月的指征。5、 根据权利要求4所述的方法，进一步包括下列步骤iii) 提供来自存活时间在12个月以下个体的第一对照血清或血浆 样品禾n/或来自存活时间长于12个月和域长于24个月个体的第二对照血清或血浆样品；iv)通过检测在步骤(ii)中检测的一个或更多蛋白的存在和/或量，测定第一和/或第二对照样品的蛋白标志；其中个体的存活时间是通过比较在测试样品中在步骤(ii)中检测的一个或更多蛋白的存在和/或量与在第一和/或第二对照样品中在步骤(iv)中检测的一个或更多蛋白的存在和/或量鉴定的。6、 根据权利要求4或5所述的方法，其中步骤(ii)包括检测在测试样品中在表2中定义的所有蛋白的存在和/或量。7、 根据权利要求1至3中任一项的方法，其中步骤(b)和/或步骤(d)是使用能够结合一个或更多蛋白的第一结合试剂完成的。8、 根据权利要求4至6中任一项的方法，其中步骤(ii)和/或步骤(iv)是使用能够结合一个或更多蛋白的第一结合试剂完成的。9、 根据权利要求7或8所述的方法，其中第一结合试剂是抗体或其片段。10、 根据权利要求9所述的方法，其中抗体或其片段是重组抗体或其片段。11、 根据权利要求9或10所述的方法，其中抗体或其片段选自scFv、 Fab、免疫球蛋白分子的结合结构域。12、 根据权利要求1至11中任一项的方法，其中在测试样品中的一个或更多蛋白用可检测部分标记。13、 根据权利要求2或3、 7或9至12中任一项的方法，其中在对照样品中的一个或更多蛋白通过可检测部分标记。14、 根据权利要求5至6或8至12中任一项的方法，其中在第一和/或第二对照样品中的一个或更多蛋白通过可检测部分标记。15、 根据权利要求13或14所述的方法，其中可检测部分选自荧光部分、发光部分、化学发光部分、放射性部分、酶的部分。16、 根据权利要求1至3、 7或9至13或15中任一项的方法，其中步骤(b)和/或步骤(d)使用阵列完成。17...

【专利技术属性】
技术研发人员：CAK博雷贝克，LBC温格伦，
申请(专利权)人：伊缪诺维亚公司，
类型：发明
国别省市：SE[瑞典]