本发明专利技术涉及一种新的有利的纯化方法，其保证了虫卵悬浮液的胚胎化能力和成活力。首先在非胚胎化条件下于ｐＨ值约为≤２的硫酸溶液中处理猪鞭虫卵。由此成功地杀死细菌和病毒。酵母菌和真菌的萌芽数减少。在第二步中，增加ｐＨ值并加入可以口服的防腐剂。由此成功地杀死了酵母菌和真菌。然后，在第二步纯化步骤中使用的悬浮介质可被用作附加的生产（胚胎化）和储存的培养介质。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】活的、可储存的虫卯悬浮液的制备本专利技术涉及用于制备活的(viable)含有寄生蠕虫卵的悬浮液时的纯化方 法，其中该悬浮液可以发育且适于治疗应用。寄生物感染对动物宿主的免疫系统的激活的影响是已知的(Review, D.M. McKay, Parasitology 2006, 132: 1-12)。这种激活还会影响免疫系统 疾病的发生和发展。流行病学的研究表明，在虫感染(Wurminfektionen)比率域。患克罗恩氏病(Morbus Crohn)(—种慢性炎症性肠部疾病)患者的细胞因 子曲线(Cytokinprofile)显示蠕虫感染会刺激Th2-免疫细胞。克罗恩氏病，一 种Thl支配的自身免疫疾病，可以受到蠕虫感染的抑制或影响(Summers等 人，Am J Gastroenterol 2003, 98:2034-2041)。其他Thl-免疫细胞引起的疾 病，如螺杆菌属(Helicobacter)引起的胃炎和自身免疫脑脊髓炎，也会受到影 响。早在1973年，Beer (Parasitology 1973， 67: 253-262)就已经报道猪鞭虫 (7Wc/zw^ wzX)可能是一种实现人类免疫而不产生线虫病原体感染的合适线 虫。猪鞭虫是人鞭虫(7Wc/m^ /mmam; )的近亲，生活在人类的胃肠道中， 但是其自身不繁殖。对于这种自身限制的感染，不需要采取治疗措施。因 此，通过辨鞭虫感染可以产生免疫。R丄S. Beer (Parasitology 1972, 65: 343-350)记载了 一种收集和纯化虫卵 的方法。在0.2。/。的重铬酸钾溶液中在32。C下培养胚胎化阶段的虫卵，并每 天换气。在DE 101 63 115中记载了一种相似的纯化方法。借助羟基自由基 或氧自由基引起的化学反应从虫卵中将全部微生物和病毒除去。具体描述 了这种所谓的芬顿反应(Fenton-Reaktion)。反应时，FeCl2可以与H202反应 生成初生态氧(Sauerstoff in statu nascendi)，其消毒作用得到利用。Boes等人(Veterinary Parasitology (1998)，第181—190页)描述了从猪蛔 虫(Aca^ www)雌虫中获取并在硫酸中进行了胚胎化的卵的胚胎化 (Embryonierung)和感染性。Summers和其同事(GUT 2005, 54: 87-90)首先在含抗生素(青霉素/链霉素/两性霉素B)的緩沖溶液中胚胎化猪鞭虫卵5~6周后，使用了在pH为6~7 的磷酸盐緩冲液中的0.2%重铬酸盐溶液纯化了猪鞭虫卵。使用这些杀死细菌和病毒的试剂具有下列各种缺点无论是在使用重铬酸盐溶液还是使用芬顿溶液的情况下，都必须在短 时间后弃去这些溶液，以避免危害虫卵。此外，研究显示在纯化后的胚胎 化过程(3个月，在22。C 25。C下)中微生物会大量繁殖，尽管有在先的纯化 步骤，但在后续的在2 8。C下储存胚胎化的卵时，也无法避免孩t生物的繁殖。 因此很有可能发生的是， 一旦除去了这些杀死微生物和病毒的试剂后，在 猪鞭虫卵悬浮液中微生物又会重新生长。此外，从溶液中彻底除去重铬酸盐是绝对必须的。然而这个步骤是非 常复杂的。如Summers所述加入抗生素可以避免在卯胚胎化阶^:;微生物的大量繁 殖，尽管这样可以抑制在该阶段中微生物的大量生长，但是却不能保证杀 死这些微生物。在接着的纯化和储存直到使用的过程中在除去了抗生素之 后，出现了微生物的重新大量生长。本专利技术的目的是制备一种通过纯化除去污染性病毒和微生物特别是细 菌的胚胎化虫卵悬浮液，该悬浮液在被储存的过程中能不发生真菌孢子和 酵母菌的生长。本文描述的方法保持了从虫卵至成虫的发育能力。该虫卵 悬浮液适于治疗应用。在本专利技术的范围内，出人意料的发现了 一种纯化和防腐的組合方法， 特别适合于解决上述问题，因为该方法与目前已知的方法相比，不必^使用 有毒的物质(如重铬酸钾，&20207)和消毒剂。在该纯化方法中，用pH值《2的酸溶液、优选H2S04溶液温育A^蠕虫、 优选从猪鞭虫分离的卵1 72小时(参见实施例1)。最佳温育时间为2~8小 时，优选为3小时。该温育在4。C 37。C、优选25 35。C的温度下进行。制备口服药物制剂的方法(其中所述制剂含有可储存的活虫卵的悬浮 液，该虫卵为对人不致病的寄生蠕虫的虫卵，在服用该悬浮液后，发育出包含下述步骤第一步，首先用pH值S 2的酸处理蠕虫卵悬浮液。在后续 步骤中，提高pH值至2 4，并添加药理学上可接受的防腐剂。原则上，先 加入防腐剂后再进行酸处理也是可以的。但是优选的是先进行酸处理，再加入防腐剂。优选的是通过加入好u酸进行酸处理。在进行酸处理时，加入足量的酸使pH值下降到约0.5 2的范围内。在另一个实施方式中，pH值下降到约O~<1。合适的酸是盐酸、硝酸，或优选硫酸。只允许在较短的时间范围内进 行酸处理以4更防止不适当的损害虫卵。其中，在酸浓度和酸处理时间之间也存在联系。优选将pH值降低到小于2，更优选降低到pH为0.6 0.8 。酸 处理的持续时间为数分钟到若干小时，优选为120分钟 360分钟。能够承 受的短期时间还包括虫卯的胚胎化过程(3个月，于22 25°C)。在酸处理后，通过加入合适的碱如NaOH使pH值升回到pH值〉4。接 着加入一种或多种防腐剂，其中原则上可以使用适用于防腐食品或药物的 全部物质。优选使用患有克罗恩氏病的患者耐受性确定良好的防腐剂。防腐剂优选选自山梨酸、苯曱酸、这些酸的盐，对苯曱酸酯、对羟基 苯曱酸酯、丙二醇，或这些防腐剂的组合。特别优选使用的一种或多种防腐剂选自浓度为0.01 0.2%、特别为0.1~0.2%的山梨酸，浓度为0.1 0.3重量％的苯甲酸，浓度为0.02~0.3重量％的对羟基苯曱酸酯，浓度为5~20重量°/。的丙二醇，或者上述给定浓度范围的上述防腐剂的组合。除了强酸以外，弱酸溶液如山梨酸和其盐也适于在添加上述防腐剂的 情况下使微生物和病毒快速失活。然而，使用这些溶液相比于使用强酸的 优点是由于在较弱的酸性pH下，虫卵可以在唯一的介质中经历纯化、胚 胎化(3个月，于22~25°C)、储存以及将其用于患者。长时间处理对于虫卵 的成活力(Lebens伤higkeit)没有副作用(参见实施例5)。该温和方法 (schonendes Verfahren)使用pH值> 1 、优选《2的含防腐剂的介质，并对虫 卵悬浮液的微生物纯度无任何限制。所得含防腐剂的、带有胚胎化虫卵的悬浮液适合用作患者的饮服溶液。 适当的可以向这些虫卵中加入其他药理学上可接受的添加剂，如色素、香 料或增稠剂。因此，本专利技术涉及口服药物制剂，其含有可^f渚存的活虫卵的悬浮液， 该虫卵为对人不致病的寄生蠕虫特别是猪鞭虫的虫卵，在服用该悬浮液后发育出足够数量的蠕虫，从而刺激调节性人T细胞，并且该悬浮液的每毫 升悬浮液中含有少于1000个孩史生物的集落形成单4立(cfU = colony forming unit)。优选该口服药物制剂的每毫升悬浮液中含有少于100个微生物的集落 形成单位。特别优选该口服制剂的每毫升悬浮液含有少于IO个微生物的集 落形成单位本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种制备口服药物制剂的方法，该制剂含有可储存的活虫卵的悬浮液，所述虫卵为对人不致病的寄生蠕虫即猪鞭虫的虫卵，在服用该悬浮液后发育出足够数量的蠕虫，从而刺激调节性人Ｔ细胞，其中，该蠕虫卵悬浮液于一个步骤中在ｐＨ值≤２经历酸处理，在后续步骤中将ｐＨ值调节至≥４，并添加药理学上可接受的防腐剂。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：鲁道夫威廉，阿兰K罗普斯托夫，克里斯琴MO卡佩尔，
申请(专利权)人：福尔克博士药物有限责任公司，
类型：发明
国别省市：DE[]
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