【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于鱼类免疫学领域，具体涉及一种可识别多种鲤科鱼类cd4-1+ t细胞的大鼠抗草鱼cd4-1单克隆抗体、杂交瘤细胞株及应用。
技术介绍
1、t细胞是适应性免疫的主要执行者，其中cd4+ t细胞具有重要的辅助和调节作用。cd4+ t细胞的功能特化是根据抗原信号和微环境决定的。例如，病毒和细胞内细菌触发cd4+t细胞分化为th1细胞，th1细胞通过分泌干扰素(ifn)-γ、淋巴毒素(lt)-α和白细胞介素(il)-2激活巨噬细胞和细胞毒性t细胞，从而有助于消除感染。相反，cd4+ t细胞选择性分化为产生il-4的th2细胞或产生il-17的th17细胞，以抵抗细胞外寄生虫或细菌引起的感染。调节性t细胞(treg)是另一种特化的cd4+ t细胞亚群，主要通过分泌tgf-β和il-10抑制过度的免疫反应来维持免疫稳态，防止自身免疫疾病的发生。此外，cd4+ t细胞分化为以分泌il-21为特征的滤泡辅助性t细胞(tfh)，参与b细胞的激活和抗体产生，特别是在生发中心的形成中起关键作用。
2、四足动物只有1个cd4分子，其胞外区由4个ig样结构域构成，而硬骨鱼类有2个cd4分子，名为cd4-1和cd4-2，其中cd4-1与四足动物的cd4一样，胞外区由4个ig样结构域构成，而cd4-2的胞外区仅由2个或3个ig样结构域构成，因此硬骨鱼类的cd4-1和四足动物的cd4被认为是通过基因和结构域复制而起源于cd4-2。虽然早在2006年就发现硬骨鱼类存在2个cd4基因，然而，由于抗体的缺乏，直到2016年硬骨鱼类cd4-1+
3、因此，制备草鱼(ctenopharyngodon idella)cd4-1单克隆抗体，探究t细胞介导的免疫应答机制，对于鱼类疾病的防控具有重要意义，如研发可高效激活鱼类t细胞的疫苗。
技术实现思路
1、本专利技术针对上述现有技术中的缺陷，提供了一种大鼠抗草鱼cd4-1单克隆抗体的杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株的保藏编号为：cctcc no:c2024235。
2、本专利技术的另一个目的在于提供了大鼠抗草鱼cd4-1单克隆抗体，其由上述杂交瘤细胞分泌得到。
3、本专利技术的最后一个目的在于提供了上述杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗体的制备方法和应用。
4、为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案是：
5、申请人通过将表面表达草鱼cd4-1的稳转细胞系和草鱼cd4-1重组蛋白共同免疫大鼠，并建立起由流式细胞术和荧光定量pcr相结合的筛选系统，成功制备了一株可特异性分泌大鼠抗草鱼cd4-1单克隆抗体的杂交瘤细胞株27e3h8e2e5，该杂交瘤细胞株已于2024年7月16日保藏于中国典型培养物保藏中心，分类命名：杂交瘤细胞株(hybridoma cellline)p4-27e3h8e2e5，保藏编号为：cctcc no:c2024235，地址为：中国武汉武汉大学。
6、本专利技术的保护范围还包括：
7、由保藏编号为：cctcc no:c2024235的杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体。
8、编码上述单克隆抗体的多核苷酸。
9、以上所述的单克隆抗体，其重链可变区的cdr区的特征为，包含以下三个氨基酸序列：
10、tawmh(cdrh1，seq id no.1)，
11、rikdrsinsatdyvgavkg(cdrh2，seq id no.2)，
12、qyngyspgy(cdrh3，seq id no.3)；
13、轻链可变区的cdr区包含以下三个氨基酸序列：
14、qasqnideyva(cdrl1，seq id no.4)，
15、htstlvs(cdrl2，seq id no.5)，
16、lqyddlpyt(cdrl3，seq id no.6)。
17、以上所述的单克隆抗体，重链可变区的氨基酸序列为：
18、evqlvetggglvqpgkslkltcatsgftfstawmhwvrqspdkrlewiarikdrsinsatdyvgavkgrftvsrddskssvylhmnsikeedtatyycttqyngyspgywgqgvmvtvss(seq id no.7)；
19、轻链可变区的氨基酸序列为：
20、diqmtqsppslsaslgdkvtitcqasqnideyvawyqqkpgraprllihhtstlvsgapsrfsgsgsgrdfsfsisnvksediasyyclqyddlpytfgpgtklelk(seq id no.8)。
21、当重链可变区的氨基酸序列如seq id no.7所示时，核酸分子a的核苷酸序列可以为：
22、gaggtgcagctcgtggagacagggggaggcttggtgcagcctgggaaatctctgaaactcacctgtgccacctcaggattcactttcagtacggcctggatgcactgggttcgccagtctccagacaagcgactagagtggattgctcgaataaaagacagatctatcaattctgcaaccgactatgtgggggctgtgaaaggaagattcaccgtctcaagagatgattccaaaagtagcgtttacctgcacatgaacagcataaaagaggaagacactgccacttattactgtactactcaatataacgggtattccccgggttattggggccaaggagtcatggtcacagtctcctca(seq idno.9)；
23、当轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.8所示时，核酸分子b的核苷酸序列可以为：gacatccagatgacacagtctcctccctccctgtctgcatctctgggagacaaagtcaccatcacttgtcaggcaagtcaaaacattgacgagtatgtggcttggtatcagcaaaagcctggaagagctcctagacttctcatacatcacacatctacactagtgtcaggcgccccatcgaggttcagtggcagtggatctgggagagatttttcattcagcatc本文档来自技高网...
【技术保护点】
1. 一株筛选出的杂交瘤细胞株（Hybridoma cell line）P4-27E3H8E2E5，所述杂交瘤细胞株的保藏编号为：CCTCC NO: C2024235。
2.权利要求1所述杂交瘤细胞株P4-27E3H8E2E5分泌的单克隆抗体。
3.编码权利要求2所述单克隆抗体的多核苷酸。
4. 根据权利要求2所述的单克隆抗体，其重链可变区的CDRH1、CDRH2、CDRH3的序列分别如：SEQ ID NO.1~ SEQ ID NO.3所示，其轻链可变区的CDRL1、CDRL2 、CDRL3的序列分别如：SEQ ID NO.4~SEQ ID NO.6所示。
5. 根据权利要求2所述的单克隆抗体，重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.7所示；轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.8所示。
6.一种重组载体，包含权利要求3所述多核苷酸。
7.一种宿主细胞，包含权利要求3所述多核苷酸或权利要求6所述重组载体。
8. 权利要求2所述单克隆抗体、权利要求1所述杂交瘤细胞株P4-27E3H8E2E
9. 权利要求2所述单克隆抗体、权利要求1所述杂交瘤细胞株P4-27E3H8E2E5、权利要求3所述多核苷酸、权利要求6所述重组载体或权利要求7所述宿主细胞在特异性识别鲤科鱼类的CD4-1+ T细胞中的应用。
10.权利要求2所述单克隆抗体、权利要求1所述杂交瘤细胞株P4-27E3H8E2E5、权利要求3所述多核苷酸、权利要求6所述重组载体或权利要求7所述宿主细胞在制备研究鲤科鱼类T细胞免疫应答试剂中的应用。
...【技术特征摘要】
1. 一株筛选出的杂交瘤细胞株（hybridoma cell line）p4-27e3h8e2e5，所述杂交瘤细胞株的保藏编号为：cctcc no: c2024235。
2.权利要求1所述杂交瘤细胞株p4-27e3h8e2e5分泌的单克隆抗体。
3.编码权利要求2所述单克隆抗体的多核苷酸。
4. 根据权利要求2所述的单克隆抗体，其重链可变区的cdrh1、cdrh2、cdrh3的序列分别如：seq id no.1~ seq id no.3所示，其轻链可变区的cdrl1、cdrl2 、cdrl3的序列分别如：seq id no.4~seq id no.6所示。
5. 根据权利要求2所述的单克隆抗体，重链可变区的氨基酸序列为seq id no.7所示；轻链可变区的氨基酸序列为seq id no.8所示。
6.一种重组载...
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