【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分子生物学，具体涉及一种磁珠法液体样本病原微生物核酸提取试剂盒。
技术介绍
1、液体样本病原微生物检测是指通过特定的技术手段，对液体样本（如血液、尿液、脑脊液等）中的病原微生物进行识别和定量分析的过程，这项技术对于临床诊断、感染控制、公共卫生安全等领域至关重要。目前，病原微生物检测技术包括传统微生物培养检测、分子生物学检测、免疫学检测等，虽然这些技术发展比较成熟，但还是有一些缺点，比如传统微生物培养检测周期长、阳性周期长；分子生物学检测法容易出现假阳性和假阴性问题；而免疫学检测当样本中的抗原浓度较低时，可能无法准确检测，灵敏度有限等，特别是在轻度感染的情况下，病原体释放到液体样本中的抗原量很少，为此病原微生物核酸的有效获取是分子检测的基础，也是后续确认病原微生物种类的重要环节之一。
2、影响病原微生物核酸有效获取的因素有很多，其中最重要的影响因素之一为核酸提取过程中由于感染性临床样本种类多且样本构成复杂，较多的蛋白、糖类、脂类等物质会随着核酸一起沉淀，导致核酸提取的总量和纯度难以得到保障，特别是液体样本中的病原微生物及其核酸、蛋白等标志物的稳定性有限，影响检测结果的准确性。如果能解决病原微生物核酸提取效率低的问题，有利于提高病原微生物测序准确度，因此获取高纯度、高质量的核酸，对后续病原微生物的分子检测非常重要。
技术实现思路
1、针对现有技术的缺陷，本专利技术基于磁珠法设计了一种核酸提取试剂盒，能有效提高液体样本中病原微生物核酸的提取效率，且具有较好的稳定
2、为了实现上述目的，本专利技术解决技术问题采用如下技术方案：
3、第一方面，本专利技术提供了一种磁珠法液体样本病原微生物核酸提取试剂盒，所述试剂盒包括蛋白酶k、核酸保护液、裂解加强液、裂解结合液、磁珠mxvb、洗涤液1、洗涤液2、洗脱液；
4、其中，所述裂解结合液包括10~100mmol/l三羟甲基氨基甲烷、2~3mol/l异硫氰酸胍、0.2~0.7 mol/l硫氰酸铵、10~30%（v/v）吐温-80、0.1~1%（v/v）十二烷基硫酸钠、10~50mmol/l氯化钠、20~30%（v/v）异丙醇。
5、所述裂解结合液中，三羟甲基氨基甲烷用于核酸的纯化和储存，保护其不被核酸酶降解；异硫氰酸胍、十二烷基硫酸钠用于变性裂解细胞；氯化钠可以降低核酸在水中的溶解度且不破坏其结构，从而提取核酸；吐温-80可以乳化蛋白，降低蛋白间的作用力；异丙醇可以析出核酸，有利核酸与磁珠结合。
6、在其中一些实施例中，所述蛋白酶k浓度为10 mg/ml。
7、在其中一些实施例中，所述核酸保护液包括10~20mmol/l且ph为6.5~7.5的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、5~20％(v/v)甲酰胺。
8、在其中一些实施例中，所述裂解加强液是5~20％（v/v）的十二烷基硫酸钠。
9、在其中一些实施例中，所述磁珠mxvb：由洗涤液2与磁珠mxvb原液按照19:1的比例混合而成。
10、在其中一些实施例中，所述洗涤液1包括2~3mol/l异硫氰酸胍、0.1~0.2mol/l氯化钠、40~60%（v/v）乙醇，ph为5.5~6.8。
11、在其中一些实施例中，所述洗涤液2包括10~100 mmol/l三羟甲基氨基甲烷、0.6~0.68 mol/l氯化钠、70~90%乙醇，ph为6.5~7.5。
12、在其中一些实施例中，所述洗脱液为10~100mmol/l三羟甲基氨基甲烷。
13、第二方面，本专利技术提供了一种核酸提取方法，采用所述的磁珠法液体样本病原微生物核酸提取试剂盒。
14、在其中一些实施例中，所述核酸提取方法包括以下步骤：
15、s1.取200~300 μl液体样本、15~25 μl蛋白酶k加入500~700μl裂解结合液中进行裂解；
16、s2.取200~300 μl上清溶液，加入600 μl裂解结合液，再加入
17、10~30μl磁珠mxvb混匀；
18、s3.加入700 μl洗涤液1，涡旋30秒后分离磁珠，弃上清；
19、s4.加入700 μl洗涤液2，涡旋30秒后分离磁珠，弃上清；
20、s5.再次加入700 μl洗涤液2，涡旋30秒后分离磁珠，弃上清；
21、s6.加入30~100 μl洗脱液de，高速涡旋2~3分钟打散磁珠，60℃振荡温浴5分钟，分离磁珠，得到核酸。
22、与现有技术相比，本专利技术具有如下的有益效果：
23、本专利技术提供了一种磁珠法液体样本病原微生物核酸提取试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括蛋白酶k、核酸保护液、裂解加强液、裂解结合液、磁珠mxvb、洗涤液1、洗涤液2、洗脱液；其中，所述裂解结合液包括三羟甲基氨基甲烷、异硫氰酸胍、硫氰酸铵、吐温-80、十二烷基硫酸钠、氯化钠、异丙醇。本专利技术的试剂盒能快速提取、纯化的获取细菌、真菌和病毒的dna，提升了病原微生物核酸的提取效率，同时经过长期储存后，试剂盒中的组分仍然能够保持其原有的活性和效力，从而确保了实验结果的准确性和可靠性。
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1.一种磁珠法液体样本病原微生物核酸提取试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括蛋白酶K、核酸保护液、裂解加强液、裂解结合液、磁珠MXVB、洗涤液1、洗涤液2、洗脱液；
2.根据权利要求1所述的磁珠法液体样本病原微生物核酸提取试剂盒，其特征在于，所述蛋白酶K浓度为10 mg/mL。
3.根据权利要求1所述的磁珠法液体样本病原微生物核酸提取试剂盒，其特征在于，所述核酸保护液包括10~20mmol/L且pH为6.5~7.5的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、5~20％(v/v)甲酰胺。
4.根据权利要求1所述的磁珠法液体样本病原微生物核酸提取试剂盒，其特征在于，所述裂解加强液是5~20％（v/v）的十二烷基硫酸钠。
5.根据权利要求1所述的磁珠法液体样本病原微生物核酸提取试剂盒，其特征在于，所述磁珠MXVB：由洗涤液2与磁珠MXVB原液按照19:1的比例混合而成。
6.根据权利要求1所述的磁珠法液体样本病原微生物核酸提取试剂盒，其特征在于，所述洗涤液1包括2~3mol/L异硫氰酸胍、0.1~0.2mol/L氯化钠、40~60%（v/v）乙醇
7.根据权利要求1或5任一项所述的磁珠法液体样本病原微生物核酸提取试剂盒，其特征在于，所述洗涤液2包括10~100 mmol/L三羟甲基氨基甲烷、0.6~0.68 mol/L氯化钠、70~90%乙醇，PH为6.5~7.5。
8.根据权利要求1所述的磁珠法液体样本病原微生物核酸提取试剂盒，其特征在于，所述洗脱液为10~100mmol/L三羟甲基氨基甲烷。
9.一种核酸提取方法，其特征在于，采用权利要求1-8任一项所述的磁珠法液体样本病原微生物核酸提取试剂盒。
10.根据权利要求1所述的核酸提取方法，其特征在于，所述核酸提取方法包括以下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种磁珠法液体样本病原微生物核酸提取试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括蛋白酶k、核酸保护液、裂解加强液、裂解结合液、磁珠mxvb、洗涤液1、洗涤液2、洗脱液；
2.根据权利要求1所述的磁珠法液体样本病原微生物核酸提取试剂盒，其特征在于，所述蛋白酶k浓度为10 mg/ml。
3.根据权利要求1所述的磁珠法液体样本病原微生物核酸提取试剂盒，其特征在于，所述核酸保护液包括10~20mmol/l且ph为6.5~7.5的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、5~20％(v/v)甲酰胺。
4.根据权利要求1所述的磁珠法液体样本病原微生物核酸提取试剂盒，其特征在于，所述裂解加强液是5~20％（v/v）的十二烷基硫酸钠。
5.根据权利要求1所述的磁珠法液体样本病原微生物核酸提取试剂盒，其特征在于，所述磁珠mxvb：由洗涤液2与磁珠mxvb原液按照19:1的比例混合而成。
【专利技术属性】
技术研发人员：林程忠，黄芯怡，陈荷萍，马放晴，蚁珩鑫，
申请(专利权)人：广州湾区生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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