【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医学工程领域，特别涉及一种非哺乳动物来源胶原蛋白多孔复合支架及其制备方法与应用。
技术介绍
1、拔牙后会留下牙窝缺损，未加干预的牙窝愈合会导致牙槽骨吸收造成牙龈萎缩，不利于后续种植牙、镶牙等治疗，且会影响牙龈轮廓和面部容貌，导致美学效果上的潜在损失。因此拔牙后，常需要同时进行位点保存治疗，减少后续愈合过程中牙槽骨吸收，增大牙槽骨体积，避免牙龈萎缩。医学上，自体移植被认为是位点保存的金标准，但由于需要在患者第二手术位点进行取样，不仅面临着数量的局限，还增加了手术的复杂性和患者疼痛，常不被采用。商业上，常用胶原蛋白和磷酸钙等组分制备的胶原蛋白复合海绵作为填补牙拔牙后牙窝缺损的生物材料。胶原蛋白，主要是来源于牛肌腱或来源于猪的的i型胶原蛋白，不仅具有良好的生物活性为缺损处再生提供类细胞外基质ecm的生长环境，其海绵支架还能具备良好的止血性能，促进凝血块形成，加速缺损愈合。此外，磷酸钙，主要是羟基磷灰石，作为骨质主要成分，具有促进牙槽骨再生的能力，还能改善复合海绵支架机械性能，为早期牙窝缺损提供支撑能力，避免坍缩。
2、然而，正如前文所述，商业胶原复合海绵所用的胶原蛋白多来自于猪或牛。因为哺乳动物生理结构和代谢机制上具有更多的相似性，使得污染物更容易在哺乳动物间传递和积累，增加潜在的、不确定的传播疾病风险。目前，从水产养殖生物等非哺乳动物组织中提取胶原蛋白被视为是可行的补充，不仅避免了猪或牛来源胶原蛋白的缺点，还有效的利用了水产养殖资源，实现绿色经济和蓝色经济的发展。
3、本专利技术是基于美国专
技术实现思路
1、本专利技术的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种非哺乳动物来源胶原蛋白多孔复合支架的制备方法。
2、本专利技术的另一目的在于提供通过上述制备方法得到的非哺乳动物来源胶原蛋白多孔复合支架。
3、本专利技术的再一目的在于提供上述非哺乳动物来源胶原蛋白多孔复合支架的应用。
4、本专利技术的目的通过下述技术方案实现：一种非哺乳动物来源胶原蛋白多孔复合支架的制备方法，包括如下步骤：
5、(1)将非哺乳动物来源胶原蛋白溶解于乙酸溶液中，然后加入磷酸钙粉末混匀，再加入交联剂，得到前溶液i；
6、(2)将前溶液i于0～10℃充分混合后加入到模具中，冷冻干燥，得到支架胚体；
7、(3)将非哺乳动物来源胶原蛋白溶解于乙酸溶液，然后加入交联剂，得到前溶液ii；
8、(4)将前溶液ii注入步骤(2)得到的支架胚体，于0～10℃静置反应，冷冻干燥，得到非哺乳动物来源胶原蛋白多孔复合支架。
9、步骤(1)和步骤(3)中所述的非哺乳动物来源胶原蛋白优选通过如下步骤制备得到：
10、1)将取自非哺乳动物的新鲜原料清理干净后，依次经过碱处理、洗涤、酸处理，机械粉碎，得到混合糊状物；
11、2)用水稀释步骤1)得到的混合糊状物，接着于2～8℃离心，得到包含胶原蛋白的上层溶液和包含色素的团粒，收集包含胶原蛋白的上层溶液；
12、3)在步骤2)得到的上层溶液中加入无机盐，混合均匀后静置，得到析出含胶原蛋白的沉淀物，离心收集沉淀物；
13、4)将步骤3)得到的含胶原蛋白的沉淀物和酸性溶液混合，得到含游离胶原蛋白的混合溶液；将含游离胶原蛋白的混合溶液进行透析，得到非哺乳动物来源胶原蛋白溶液，冷冻干燥，得到非哺乳动物来源胶原蛋白。
14、步骤1)中所述的非哺乳动物可以是蛙类养殖物种，诸如牛蛙(ranacatesbeiana)、林蛙(rana amurensis boulenger)、虎纹蛙(hoplobatrachus rugulosus、hoplobatrachus tigerinus)。
15、步骤1)中所述的原料优选为皮肤。
16、步骤1)中所述的碱处理的具体步骤如下：将清理干净的非哺乳动物的新鲜原料浸泡于碱性溶液中。
17、步骤1)中所述的碱处理中的碱性溶液优选为naoh溶液；其浓度优选为0.1～1mol/l、0.3～0.7mol/l、0.4～0.6mol/l、0.5mol/l。
18、步骤1)中所述的碱处理中原料和碱性溶液的配比优选为0.1～2g：10ml、0.5～1.5g：10ml、1g：10ml。
19、步骤1)中所述的碱处理的温度为0～10℃；优选为1～8℃、2～6℃、3～5℃、4℃。
20、步骤1)中所述的碱处理的时间优选为至少24小时；更优选为24～72h、36～60h、45～50h、48h。
21、步骤1)中所述的洗涤的程度为洗涤至ph值为中性或接近中性。
22、所述的洗涤的溶剂为去离子水或酸性溶液。
23、所述的酸性溶液优选为hcl溶液。
24、步骤1)中所述的酸处理的具体步骤如下：将洗涤后的原料浸泡于酸性溶液中。
25、步骤1)中所述的酸处理的酸性溶液优选为乙酸溶液。
26、所述的乙酸溶液的浓度优选为0.1～1mol/l、0.3～0.7mol/l、0.4～0.6mol/l或0.5mol/l。
27、步骤1)中所述的酸处理的温度为0～10℃；优选为1～8℃、2～6℃、3～5℃或4℃。
28、步骤1)中所述的酸处理的时间优选为至少12小时；更优选为12～36h、18～30h、22～26h或24h。
29、步骤2)中所述的水的用量优选按水的体积为混合糊状物体积的10～30倍计算，或10～20倍计算，或10倍计算。
30、步骤2)中所述的离心的温度优选为4℃。
31、步骤2)中所述的离心的离心力优选为15,000～50,000×g、20,000～35,000×g或25,000×g。
32、步骤2)中所述的离心的时间优选为5～45分钟、10～30分钟或15分钟。
33、步骤3)中所述的无机盐优选为硫酸钠、硫酸铵、氯化钾和氯化钠中的至少一种。
34、所述的无机盐的用量优选按其终浓度为0.5～4.0m，0.5～1.5m，0.9m计算。
35、步骤3)中所述的静置的时间优选为6～24小时、6～12小时或12～18小时。
36、步骤3)中所述的离心的离心力优选为4,000～8,本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种非哺乳动物来源胶原蛋白多孔复合支架的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的非哺乳动物来源胶原蛋白多孔复合支架的制备方法，其特征在于：
3.根据权利要求2所述的非哺乳动物来源胶原蛋白多孔复合支架的制备方法，其特征在于：
4.根据权利要求2所述的非哺乳动物来源胶原蛋白多孔复合支架的制备方法，其特征在于：
5.根据权利要求1所述的非哺乳动物来源胶原蛋白多孔复合支架的制备方法，其特征在于：
6.根据权利要求5所述的非哺乳动物来源胶原蛋白多孔复合支架的制备方法，其特征在于：
7.根据权利要求6所述的非哺乳动物来源胶原蛋白多孔复合支架的制备方法，其特征在于：
8.根据权利要求1所述的非哺乳动物来源胶原蛋白多孔复合支架的制备方法，其特征在于：
9.一种非哺乳动物来源胶原蛋白多孔复合支架，其特征在于：通过权利要求1～8任一项所述的制备方法得到；其为核壳结构，核层的材料为非哺乳动物来源胶原蛋白和磷酸钙交联得到的材料，壳层的材料为非哺乳动物来源胶原蛋白。
10.权
...【技术特征摘要】
1.一种非哺乳动物来源胶原蛋白多孔复合支架的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的非哺乳动物来源胶原蛋白多孔复合支架的制备方法，其特征在于：
3.根据权利要求2所述的非哺乳动物来源胶原蛋白多孔复合支架的制备方法，其特征在于：
4.根据权利要求2所述的非哺乳动物来源胶原蛋白多孔复合支架的制备方法，其特征在于：
5.根据权利要求1所述的非哺乳动物来源胶原蛋白多孔复合支架的制备方法，其特征在于：
6.根据权利要求5所述的非哺乳动物来源胶原蛋白多孔复合支架的制...
【专利技术属性】
技术研发人员：郑祖仰，黄俊杰，曹华颀，曾远金，
申请(专利权)人：中新国际联合研究院，
类型：发明
国别省市：
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