【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于多糖分子量检测，尤其涉及一种b族链球菌荚膜多糖分子量的检测方法。
技术介绍
1、目前，有多种以多糖为主要成分与载体蛋白结合的预防b族链球菌感染的疫苗进行至二期临床阶段。b族链球菌荚膜多糖(cps)是疫苗的主要有效成分，研究表明，cps的分子量大小直接影响多糖疫苗的免疫原性效果；而在结合疫苗中，cps作为疫苗的中间品也是质控的重要指标。
2、目前辉瑞的六价多糖-crm197结合疫苗已经完成了二期临床试验，疫苗展现出了良好的耐受性，能产生充足的母体免疫反应并能有效穿过胎盘到达胎儿，从而保护胎儿免受gbs侵袭。gsk的三价多糖-crm197结合疫苗二期临床结果显示，母体和新生儿血清中的特异性抗体和母体乳汁中的特异性抗体明显高于对照组并能持续到产后90天。但《中国药典》和《欧洲药典》中尚未收录b族链球菌多糖结合疫苗的制造和鉴定流程，未对多糖的分子量进行规定。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种b族链球菌荚膜多糖分子量的检测方法。
2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
3、本专利技术提供了一种b族链球菌荚膜多糖分子量的检测方法，包括以下步骤：
4、1)将多个不同分子量的葡聚糖标准品，用样品溶剂配置成标准溶液，利用高效液相色谱检测标准溶液，使用示差检测器检测标准溶液的出峰情况，记录保留时间，以保留时间为横坐标、以葡聚糖的分子量的对数值为纵坐标绘制标准曲线；
5、2)通过超滤将待
6、优选的，所述样品溶剂由以下成分组成：5～9g/l磷酸氢二钠，4～8g/l磷酸二氢钠，0.01～0.04g/l edta。
7、优选的，所述高效液相色谱检测的流动相由以下成分组成：18～24g/l磷酸氢二钠，13～22g/l磷酸二氢钠，0.01～0.04g/l edta。
8、优选的，所述高效液相色谱检测所用的色谱柱为日本shodex株式会社，ohpak sb-g 6b保护柱、ohpak sb-805hq液相色谱柱、ohpak sb-804hq液相色谱柱串联接入。
9、优选的，所述高效液相色谱的检测条件为：检测器温度35～45℃，流速0.4～1ml/min，样品进样体积45～55μl，运行时间70～80min。
10、优选的，所述b族链球菌的血清型为ia型，ib型，ii型，iii型，iv型，v型，vi型，vii型，viii型，ix型。
11、与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
12、本专利技术采用高效凝胶排阻色谱-示差折光法(high performance size-exclusionchromatogra-phy withrefractive index，hpsec-ri)检测与待测样品性质相似的多糖分子量标准品，并以此绘制标准品分子量随样品洗脱时间或体积变化的质量分布曲线，记录待测样品的相应洗脱指标，通过质量分布曲线测算其分子量；以此构建了一种b族链球菌荚膜多糖的分子量的检测方法，能够检测ⅰa型、ⅰb型、ⅲ型、ⅴ型等多种类型的b族链球菌的cps，本专利技术检测方法的标准曲线的r2＝0.996387，该检测方法具有精确性高，重复性好，稳定性好等特点。
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1.一种B族链球菌荚膜多糖分子量的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述样品溶剂由以下成分组成：5～9g/L磷酸氢二钠，4～8g/L磷酸二氢钠，0.01～0.04g/L EDTA。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱检测的流动相由以下成分组成：18～24g/L磷酸氢二钠，13～22g/L磷酸二氢钠，0.01～0.04g/L EDTA。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱检测所用的色谱柱为日本shodex株式会社，OHpak SB-G 6B保护柱、OHpak SB-805HQ液相色谱柱、OHpak SB-804HQ液相色谱柱串联接入。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱的检测条件为：检测器温度35～45℃，流速0.4～1mL/min，样品进样体积45～55μL，运行时间70～80min。
6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述B族链球菌的血清型为Ia型，Ib型，II型，III型，
...【技术特征摘要】
1.一种b族链球菌荚膜多糖分子量的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述样品溶剂由以下成分组成：5～9g/l磷酸氢二钠，4～8g/l磷酸二氢钠，0.01～0.04g/l edta。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱检测的流动相由以下成分组成：18～24g/l磷酸氢二钠，13～22g/l磷酸二氢钠，0.01～0.04g/l edta。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱检测所用的...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈少隆，段会奇，姜永强，刘鹏，黄文华，任宇豪，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，
类型：发明
国别省市：
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