【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体检测，具体涉及一种鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体的双重qpcr引物组合及其检测方法与应用。
技术介绍
1、鸡支原体给家禽养殖业带来了严重的经济损失，其中鸡毒支原体(mycoplasmagallisepticum,mg)和鸡滑液囊支原体(mycoplasma synovialum,ms)的致病力最强，危害最为严重，一直威胁着养禽业的健康。mg又称禽败血支原体或鸡毒霉形体，在鸡和火鸡中最为易感；感染后，患病鸡大多表现出打喷嚏、啰音、咳嗽、结膜炎、流泪、鼻孔渗出等呼吸道症状，少部分会出现胚胎死亡率增加，产蛋量、孵化率、饲料转化率和体重降低等现象。ms又称滑液囊霉形体，各类家禽及野生鸟类均可感染，其中以鸡和火鸡的感染情况最为严重；感染后，患病鸡的关节、腱鞘、滑液囊等部位会出现炎症反应，其中产蛋鸡还会出现蛋壳变薄、易碎、透明度增加，产蛋率和孵化率下降等症状。
2、近年来，mg和ms在我国的许多省份都时有发生，呈现出逐年增长的趋势，且二者混合感染及隐形感染的病例逐渐增多。此外，海南的鸡场也发现mg和ms感染，给海南的养殖者带来严重的经济损失。
3、研究发现，定期监测，隔离淘汰阳性鸡，严格做好生物防控是目前防控mg和ms最为有效的措施。然而，对于mg和ms的监测而言，目前临床急需精准、快速、低成本的检测技术。
4、虽然国内外现有的mg、ms检测技术较多，如病原分离鉴定、血清学检测及分子生物学检测等，但病原分离操作复杂、耗时长，血清学检测无法区分疫苗毒与野毒，不能同时检测m
技术实现思路
1、本专利技术所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供一种鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体的双重qpcr引物组合及其检测方法与应用，该方法具有特异性强、灵敏度高、操作简便快速、经济等优点。
2、为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是：一种鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体的双重qpcr引物组合，包括检测的鸡毒支原体mg mgc2基因、鸡滑液囊支原体ms vlha基因的特异性引物和探针；针对所述鸡毒支原体mg mgc2基因的特异性引物为mg-f和mg-r，针对所述鸡毒支原体mg mgc2基因的探针为mg-taq；针对所述鸡滑液囊支原体ms vlha基因的特异性引物为ms-f和ms-r，针对所述鸡滑液囊支原体ms vlha基因的探针为ms-taq；
3、所述mg-f的核苷酸序列如seq id no.1所示，所述mg-r的核苷酸序列如seq idno.2所示，所述ms-f的核苷酸序列如seq id no.3所示，所述ms-r的核苷酸序列如seq idno.4所示；
4、所述mg-taq的5’→3’的序列为：
5、rox-atggttgaatcccttggaataatcg-bhq2；
6、所述ms-taq的5’→3’的序列为：
7、hex-agacaagttgaagcaactacaacag-bhq1。
8、本专利技术还提供了上述的鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体的双重qpcr引物组合检测鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体的双重qpcr方法，该方法为：
9、s1、提取待测样品dna；
10、s2、以s1中所述待测样品dna为模板，用mg-f、mg-r、ms-f、ms-r、mg-taq和ms-taq进行qpcr扩增；
11、所述qpcr扩增的反应体系为：premix ex taq(probe qpcr)12.5μl，待测样品dna1μl，浓度为10μmol/l的mg-f 0.6μl，浓度为10μmol/l的mg-r 0.6μl，浓度为10μmol/l的ms-f 0.8μl，浓度为10μmol/l的ms-r 0.8μl，浓度为10μmol/l的mg-taq 1μl，浓度为10μmol/l的ms-taq0.6μl，ddh2o补足至25μl；
12、所述qpcr扩增的反应程序为：95℃预变性30s；95℃变性5s；47.8℃退火30s(采集荧光)；循环40次；
13、s3、绘制的扩增曲线所对应的ct值来进行结果判定；
14、当所述鸡毒支原体mgc2基因扩增后所得到的ct值≤38时，则说明所述待测样品中含有鸡毒支原体，当ct值＞38时，则说明所述待测样品中不含鸡毒支原体；
15、当所述鸡滑液囊支原体vlha基因扩增后所得到的ct值≤38时，则说明所述待测样品中含有鸡滑液囊支原体，当ct值＞38时，则说明所述待测样品中不含鸡滑液囊支原体。
16、本专利技术还提供了上述的鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体的双重qpcr引物组合的应用，其特征在于，所述鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体的双重qpcr引物组合用于进行鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体的同时检测。
17、本专利技术还提供了上述的鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体的双重qpcr引物组合的应用，所述鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体的双重qpcr引物组合用于制备同时检测鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体的试剂盒。
18、本专利技术与现有技术相比具有以下优点：
19、本专利技术提供了一种可同时特异性检测海南地区鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体的双重qpcr引物组、探针、检测方法及应用。采用该方法可同时进行海南地区鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体的检测，特异性强、灵敏度高、操作简单、结果可靠，可快速区分单一感染和混合感染，能为海南地区鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体的监测、检测提供有效的诊断手段，为海南地区鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体的流行病学调查及防控提供可靠的信息。
20、下面结合附图和实施例对本专利技术作进一步详细说明。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体的双重qPCR引物组合，其特征在于，包括检测的鸡毒支原体MG mgC2基因、鸡滑液囊支原体MS vlhA基因的特异性引物和探针；针对所述鸡毒支原体MG mgC2基因的特异性引物为MG-F和MG-R，针对所述鸡毒支原体MG mgC2基因的探针为MG-Taq；针对所述鸡滑液囊支原体MS vlhA基因的特异性引物为MS-F和MS-R，针对所述鸡滑液囊支原体MS vlhA基因的探针为MS-Taq；
2.一种用权利要求1所述的鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体的双重qPCR引物组合检测鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体的双重qPCR方法，其特征在于，该方法为：
3.一种如权利要求1所述的鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体的双重qPCR引物组合的应用，其特征在于，所述鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体的双重qPCR引物组合用于进行鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体的同时检测。
4.一种如权利要求1所述的鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体的双重qPCR引物组合的应用，其特征在于，所述鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体的双重qPCR引物组合用于制备同时检测鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体
...【技术特征摘要】
1.一种鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体的双重qpcr引物组合，其特征在于，包括检测的鸡毒支原体mg mgc2基因、鸡滑液囊支原体ms vlha基因的特异性引物和探针；针对所述鸡毒支原体mg mgc2基因的特异性引物为mg-f和mg-r，针对所述鸡毒支原体mg mgc2基因的探针为mg-taq；针对所述鸡滑液囊支原体ms vlha基因的特异性引物为ms-f和ms-r，针对所述鸡滑液囊支原体ms vlha基因的探针为ms-taq；
2.一种用权利要求1所述的鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体的双重qp...
【专利技术属性】
技术研发人员：张艳，薛琛璐，刘海隆，陈素贞，董亚童，魏立民，刘圈炜，晁哲，
申请(专利权)人：海南省农业科学院畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：
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