【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于脂肪酸检测，具体涉及一种基于gc-ms/ms技术的婴配粉中短链游离脂肪酸检测方法。
技术介绍
1、脂质作为母乳中的第二宏观营养素，为婴幼儿提供大量能量。游离脂肪酸是脂质的重要组成部分，其主要产生途径为脂肪水解如甘油三酯在脂肪酶作用下水解产生；另一部分是乳腺细胞通过一系列复杂生化反应合成。短链游离脂肪酸一般是指碳链中碳原子数小于6的有机脂肪酸，其在人体中发挥着重要作用。研究显示，短链游离脂肪酸是机体能量的重要来源，如丁酸为肠道菌群提供60％-70％的能量；促进机体代谢如调节胃肠道ph值影响电解质营养物质吸收；还具有抗炎抗肿瘤、调节免疫和神经系统保护等作用。
2、婴儿配方奶粉(婴配粉)是专门为婴儿设计的营养补充品，旨在模拟母乳的营养成分满足婴幼儿生长发育需求。目前关于婴配粉脂质方面研究主要集中在脂质结构的模拟、多不饱和脂肪酸的添加、脂肪酸比例的调节等，在短链游离脂肪酸研究甚少。短链游离脂肪酸的缺乏会影响婴幼儿肠道、免疫、代谢等身体机能，为此需要一种婴配粉中短链游离脂肪酸的检测方法保障婴配粉成分满足婴幼儿生长发育需求。
3、目前，关于短链游离脂肪酸检测的方法多采用气相色谱法，大多数研究通过前处理提取短链游离脂肪酸然后直接进行gc分析，该检测方法缺点是忽略了短链脂肪酸易挥发、极性差异较大等因素，最后导致回收率差、色谱分离不佳和检测灵敏度过低。为了改善这些检测中出现的问题，研究中开始在前处理中引入衍生化处理，如siciliano等人使用重氮甲烷与三氟化硼溶液对短链游离脂肪酸进行甲酯化，该方法有不错的检
4、基于gc-ms/ms技术的短链游离脂肪酸检测方法在婴配粉检测中有良好的检测效果。大多研究在gc-ms上采用选择离子监测模式(sim)，我们此次方法建立采用多反应监测模式(mrm)，减少了背景干扰和噪声，具有更高的选择性、灵敏度和定量准确性。利用gc-ms/ms技术的短链游离脂肪酸检测方法分析时，通常需要对样品进行前处理，需要优化提取试剂用量、酯化试剂选择、酯化温度时间等；在gc-ms/ms部分优化分流比、程序升温、电子轰击能量、碰撞能等。然而现有的测定方法在提取上出现的问题是试剂用量过多、酯化试剂危险、酯化时间过长；在仪器上方法分析时间过长、峰形重叠拖尾等。本专利技术针对gc-ms/ms技术的婴配粉中短链游离脂肪酸检测方法中的主要参数进行了详细的优化，相比较现有的方法，改进的方法试剂用量少安全性高、酯化时间短、色谱分析时间短、色谱峰形好、定量更加准确，为婴配粉的定量分析提供了有利的借鉴。
5、基于这一技术背景，本专利技术研究了一种基于gc-ms/ms技术的婴配粉中短链游离脂肪酸检测方法。
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技术实现思路
1、本专利技术针对现有技术不足，提供了一种基于gc-ms/ms技术的婴配粉中短链游离脂肪酸检测方法，该方法前处理使用衍生化处理，可以有效降低短链游离脂肪酸分子量小易挥发不稳定的影响，仪器部分能够快速高效地对短链游离脂肪酸进行分析检测。
2、为了实现上述目的，本专利技术提供一种基于gc-ms/ms技术的婴配粉中短链游离脂肪酸检测方法，所述方法包括以下步骤：
3、(1)对婴配粉取样，加水溶解；
4、(2)用萃取剂乙腈对所述婴配粉溶解样中的短链游离脂肪酸进行提取，并通过离心去除沉淀的蛋白质；
5、(3)取所述离心后的样品加入除水剂无水硫酸镁进行除水并静置，促使短链游离脂肪酸进一步转移至乙腈相；
6、(4)取所述除水并静置后的上清液至具塞管；
7、(5)向所述具塞管中的上清液加入酯化试剂乙酰氯/丁醇，放入恒温水浴槽进行酯化反应；
8、(6)向所述酯化反应后的溶液加入无水碳酸钠溶液进行中和；
9、(7)待所述中和后的溶液冷却至室温后加入正己烷，待其分层后取上层有机相作为待测样品；
10、(8)采用气相色谱-串联三重四极杆质谱法对所述待测样品和系列氘代同位素混标溶液进行检测，得到检测数据；
11、(9)对所述检测数据进行定性分析和/或定量分析，得到所述婴配粉中短链游离脂肪酸的含量。
12、本专利技术的有益效果包括：
13、(1)本专利技术提出的基于gc-ms/ms技术的婴配粉中短链游离脂肪酸检测方法，前处理使用乙腈和无水硫酸镁，提取试剂乙腈的引入有三个优点：一是对蛋白质进行沉淀；二是萃取试剂对短链游离脂肪酸进行萃取；三是乙腈作为绿色环保且危害较小的酯化溶剂系统，加强了酯化效果。另外无水硫酸镁的引入，对脂肪酸的萃取效果有以下益处：加入无水硫酸镁到乙腈-水-脂肪酸的混合体系，无水硫酸镁迅速吸收水分，促进乙腈相水相分层更好的将短链游离脂肪酸富集到乙腈相中，提高萃取回收率；除去体系中的水有利于酯化反应在乙腈相中进行，减少水对酯化反应的影响，有更好的酯化效果。
14、(2)本专利技术基于gc-ms/ms技术的婴配粉中短链游离脂肪酸检测方法，利用丁酯化衍生手段，通过对短链游离脂肪酸进行衍生处理，改变短链游离脂肪酸因挥发性强、极性大的性质，从而改善在色谱柱中保留时间短、峰形差的现象。将短链游离脂肪酸转换为脂肪酸丁酯增加其分子量、降低其极性和挥发性，更好地分离提升了检测效果。
15、(3)本专利技术基于gc-ms/ms技术的婴配粉中短链游离脂肪酸检测方法，能够有效排除样品基质中大量共存的其他物质产生的干扰离子信号，可以在复杂样品基质中准确地检测出目标化合物最终实现对短链游离脂肪酸可靠的定性和定量分析。
16、本专利技术的其它特征和优点将在随后具体实施方式部分予以详细说明。
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1.一种基于GC-MS/MS技术的婴配粉中短链游离脂肪酸检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法的参数包括所述萃取剂乙腈用量、除水剂无水硫酸镁用量、酯化试剂类型选择、酯化试剂用量、酯化温度和酯化时间；
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述参数的最佳值通过信号响应法得到，所述信号响应法包括以下步骤：
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述系列氘代同位素混标溶液由所述短链游离脂肪酸的同位素和水混匀得到；
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述气相色谱-串联三重四极杆质谱法的三重四极杆质谱法中电子轰击源参数包括：
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述气相色谱-串联三重四极杆质谱法的三重四极杆质谱法中所述短链游离脂肪酸的保留时间、电离能、母离子、定量子离子、碰撞能量1、定性子离子、碰撞能量2、内标母离子、内标定性子离子、内标定量子离子的数据如下：
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述气相色谱-串联三重四极杆质谱法的气
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述气相色谱-串联三重四极杆质谱法的气相色谱的升温程序数据如下：
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述检测数据为所述短链游离脂肪酸的色谱图和质谱图；
...【技术特征摘要】
1.一种基于gc-ms/ms技术的婴配粉中短链游离脂肪酸检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法的参数包括所述萃取剂乙腈用量、除水剂无水硫酸镁用量、酯化试剂类型选择、酯化试剂用量、酯化温度和酯化时间；
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述参数的最佳值通过信号响应法得到，所述信号响应法包括以下步骤：
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述系列氘代同位素混标溶液由所述短链游离脂肪酸的同位素和水混匀得到；
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述气相色谱-串联三重四极杆质谱法的三重四极杆质谱...
【专利技术属性】
技术研发人员：李先江，朱云霄，马雯，刘阳，韩晔华，
申请(专利权)人：中国计量科学研究院，
类型：发明
国别省市：
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