【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及细胞免疫治疗，尤其涉及cd40配体的抗原表位肽、抗体及应用。
技术介绍
1、car-t和car-nk是两种前沿的细胞免疫疗法，已在癌症治疗领域展现出巨大的潜力。它们利用患者自身或供体的免疫细胞，通过基因工程改造，使其能够识别并杀伤肿瘤细胞。
2、其中：
3、car-t(chimeric antigenreceptor t-cell)疗法是一种基于t细胞的免疫疗法，其中“t细胞”是人体免疫系统中的一种重要细胞，负责识别和攻击病原体和异常细胞。通过基因工程技术，t细胞表面被装载上一个嵌合抗原受体(car)，该受体能够特异性识别肿瘤细胞表面特定的抗原，从而引发t细胞的激活，进而杀死这些肿瘤细胞。主要构建步骤包括：1、细胞提取：从患者的外周血中提取t细胞。2、基因改造：通过病毒载体或非病毒方法将编码car的基因导入t细胞，使其表达car。3、体外扩增：改造后的t细胞在体外进行扩增，增加数量。4、回输体内：经过化疗或淋巴细胞清除后，患者接受这些改造过的t细胞，car-t细胞开始识别并攻击肿瘤细胞。
4、car-nk(chimeric antigenreceptor natural killer cell)疗法是基于自然杀伤(nk)细胞的免疫疗法。nk细胞是先天免疫系统的一部分，具有天然的肿瘤细胞和病毒感染细胞的杀伤能力。与t细胞不同，nk细胞不依赖于抗原提呈和mhc分子的识别，因此能够广泛攻击恶性细胞。通过基因工程，将car嵌合抗原受体引入nk细胞，使其更具特异性地识别并杀伤肿瘤细胞。ca
5、采用car-t或car-nk治疗t细胞血液病是因为这些疗法在针对特定类型的血液恶性肿瘤方面展现出显著的疗效，特别是在应对传统疗法效果有限的情况下。但该疗法也存在一定的缺点，例如：①由于car-t或car-nk细胞表面表达的嵌合抗原受体可能识别并结合于同类细胞表面的抗原，导致这些细胞相互杀伤(自杀杀伤)，从而降低治疗细胞的存活率和扩增能力，影响治疗效果。②car-t或car-nk靶向的抗原不仅存在于肿瘤细胞，也分布在正常t细胞表面。car-t或car-nk治疗可能导致正常t细胞的大量减少，进而引发免疫缺陷，增加患者感染风险。③肿瘤细胞可能通过下调或丢失靶向抗原的表达，或通过其他机制逃避免疫细胞的识别和杀伤，导致治疗效果不持久或复发。目前t细胞血液病相关治疗靶点主要为cd5、cd7、cd30等，随着car-t/car-nk治疗的推进，肿瘤细胞会进行抗原调变，下调甚至不表达以上的靶点。④car-t和car-nk细胞治疗的制造过程复杂，涉及细胞提取、基因改造、扩增等多个步骤，成本高昂，且对生产环境和技术要求严格，限制了其广泛应用。可以通过本方案中所涉及的在体构建方案显著减少以上复杂的生存流程，从而降低费用。
6、cd40l(或记作cd40lg)是cd40的受体，cd40与cd40l相互作用，从而在免疫应答的调控中起关键作用。cd40l与cd40的结合会触发cd40路径的活化，cd40路径的活化使共刺激性分子诸如cd80和cd86上调。此前研究表明，所有正常组织cd40lg表达量在t淋巴瘤中显著升高，可以通过亲和力调整降低对正常组织的杀伤和破坏，同时cd40lg以cd4+t细胞表达为主，对主要负责杀伤的t细胞cd8+t细胞破坏较少，可减少患者感染风险。因此，将cd40lg作为新型靶点有望有效改善肿瘤免疫逃逸。但目前尚缺乏与cd40l具有良好亲和力的抗体。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术要解决的技术问题在于提供cd40配体的抗原表位肽、抗体及应用。
2、本专利技术提供的cd40配体的抗原表位肽其具有如seq id no:13所示的氨基酸序列。或者，其具有在如前所示的氨基酸序列的基础上经取代、缺失、添加和/或替换1个或多个氨基酸的序列；或具有与如前任一项所示的氨基酸序列同源性80％以上的序列。
3、本专利技术提供的表位肽经过筛选优化获得，相对于其他肽序的片段而言，本专利技术以seq id no:13所示的氨基酸序列的抗原表位肽免疫动物，制备获得的cd40配体的抗体具有更优秀的免疫原性，与cd40配体具有良好的亲和力。
4、本专利技术还提供了一种免疫原，其包括如前所述的抗原表位肽和辅助蛋白。
5、本专利技术中，所述辅助蛋白为bsa，klh或为ova，本专利技术对此不做限定，其中klh与前述表位肽连接后具有良好的免疫原性，klh位于n端，而表位肽位于c端的蛋白更适合作为免疫原。
6、进一步的，本专利技术还提供了cd40配体的抗体，其包含：
7、氨基酸序列如seq id no:1～3所示的vhcdr1、vhcdr2和vhcdr3，
8、和氨基酸序列如seq id no:4～6所示的vlcdr1、vlcdr2和vlcdr3。
9、具体的：
10、vhcdr1的氨基酸序列为gidlsx1yg，其中x1为q或s；
11、vhcdr2的氨基酸序列为x2x3tggx4x5，其中x2为v或i，x3为t或s，x4为i、r或y，x5为t或v；
12、vhcdr3的氨基酸序列为argnidylx6l，其中x6为k或n；
13、vlcdr1的氨基酸序列为kx7x8yknnw，其中x7为s或t，x8为v或i；
14、vlcdr2的氨基酸序列为ex9s，其中，x9为a或t；
15、vlcdr3的氨基酸序列为aggyx10x11dsddx12，其中，x10为s或n，x11为s或g，x12为g或s。
16、一些实施例中，所述cd40配体的抗体的重链cdr1～3的氨基酸序列依次为：gidlsqyg、vttggit、argnidylkl，其轻链cdr1～3的氨基酸序列依次为：ksvyknnw、eas、aggyssdsddg；
17、一些实施例中，所述cd40配体的抗体的重链cdr1～3的氨基酸序列依次为：gidlssyg、istggrv、argnidylnl，其轻链cdr1～3的氨基酸序列依次为：ksiyknnw、eas、aggynsdsdds；
18、一些实施例中，所述cd40配体的抗体的重链cdr1～3的氨基酸序列依次为：gidlssyg、istggyt、argnidylnl，其轻链cdr1～3的氨基酸序列依次为：ktvyknnw、ets、aggysgdsdds。
19、本专利技术实施例中，所述抗体的重链可变区具有如seq id no:7～9中任一项所示的氨基酸序列；或者，其具有在如前所示的氨基酸序列的基础上经取代、缺失、添加和/或替换1个或多个氨基酸的序列；或具有与如前任一项所示的氨基酸序列同源性80％以上的序列。
20、本专利技术实施例中，所述抗体的轻链可变区具有如本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.CD40配体的抗体，其包含：
2.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于，
3.根据权利要求1或2所述的抗体，其特征在于，
4.根据权利要求1～3任一项所述的抗体，其特征在于，其为单链抗体，连接重链可变区和轻链可变区的linker为(G4S)3。
5.CD40配体的抗原表位肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO:13。
6.制备权利要求1～4任一项所述的抗体的免疫原，其包括权利要求5所述的抗原表位肽和KLH蛋白。
7.嵌合抗原受体，其包括胞外域、跨膜域和胞内域，其中所述胞外域的抗原结合域包括权利要求1～4任一项所述的抗体。
8.生物材料，其包括如下至少一种：
9.根据权利要求8所述的生物材料，其特征在于，所述细胞为T细胞或NK细胞。
10.药物，其包括权利要求8中所述的细胞和/或抗体结合药物。
11.权利要求8或9所述的细胞和/或权利要求8所述的抗体结合药物在制备治疗肿瘤的药物中的应用。
12.药物，其包括权利要求8或9所述的细胞和/或权利要求8所述
13.权利要求1～4任一项所述抗体或权利要求8所述的标记抗体在制备CD40配体检测的试剂中的应用。
14.CD40配体的检测试剂，其特征在于，其原料包括：权利要求1～4任一项所述抗体或权利要求8所述的标记抗体。
15.非治疗和/或诊断目的的CD40配体的检测方法，其包括以权利要求14所述的检测试剂对样品进行检测。
...【技术特征摘要】
1.cd40配体的抗体，其包含：
2.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于，
3.根据权利要求1或2所述的抗体，其特征在于，
4.根据权利要求1～3任一项所述的抗体，其特征在于，其为单链抗体，连接重链可变区和轻链可变区的linker为(g4s)3。
5.cd40配体的抗原表位肽，其氨基酸序列如seq id no:13。
6.制备权利要求1～4任一项所述的抗体的免疫原，其包括权利要求5所述的抗原表位肽和klh蛋白。
7.嵌合抗原受体，其包括胞外域、跨膜域和胞内域，其中所述胞外域的抗原结合域包括权利要求1～4任一项所述的抗体。
8.生物材料，其包括如下至少一种：
9.根据权利要求8所...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵维莅，孙芮，郑重，仇昱然，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院附属瑞金医院，
类型：发明
国别省市：
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