【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物样本保存，尤其涉及一种棘胸蛙indel分子标记用样本保存试剂及其制备方法。
技术介绍
1、棘胸蛙（quasipaaspinosa）隶属两栖纲（amphibia）、无尾目（anura）、叉舌蛙科（dicroglossidae）、棘胸蛙属（quasipaa），其肉质鲜美、营养丰富，具有高蛋白、低脂肪的特点，同时还具备滋阴补肺、强肝健肾等药用功效，因而被誉为“百蛙之王”，在食用和药用领域都有着较高的价值。
2、然而，近年来棘胸蛙的生存状况不容乐观。随着人类活动范围的不断扩大，其栖息地受到了严重的人为干扰。例如，山区的大规模开发建设，使得棘胸蛙的自然生存空间被不断压缩。同时，除草剂等化学农药在农业生产中的广泛使用，也对棘胸蛙的生存环境造成了极大的污染，这些化学物质通过食物链的传递，在棘胸蛙体内不断积累，影响其生理机能和繁殖能力。此外，由于棘胸蛙具有较高的经济价值，过度捕捉现象十分严重，大量的野生棘胸蛙被非法捕捞，用于市场交易。基于此，这一物种已被国际自然保护联盟（iucn）和中国红色名录列为“易危”物种，保护棘胸蛙的任务迫在眉睫。
3、在棘胸蛙的研究和保护工作中，indel（insertion/deletion，插入缺失）分子标记技术是一项重要的研究手段。通过对indel分子标记的分析，可以深入了解棘胸蛙的遗传结构、种群动态以及性别决定机制等关键信息，这些信息对于制定科学合理的保护策略和开展有效的遗传育种工作具有重要的指导意义。例如，在遗传育种方面，利用indel分子标记可以筛选出具有优良性状的
4、因此，根据上述中的相关技术，亟需研发一种棘胸蛙indel分子标记用样本保存试剂及其制备方法。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的在于提出一种棘胸蛙indel分子标记用样本保存试剂及其制备方法，以解决现有技术中棘胸蛙样本保存过程中存在的问题，确保样本的dna完整性和细胞活性，从而提高indel分子标记检测的准确性和可靠性。
2、基于上述目的，本专利技术提供了一种棘胸蛙indel分子标记用样本保存试剂及其制备方法。
3、一种棘胸蛙indel分子标记用样本保存试剂，由以下原料制备得到：
4、所述保存试剂包括缓冲液体系、核酸保护剂、细胞稳定剂、抗氧化剂和抗菌剂；
5、所述核酸保护剂由纳米二氧化硅和阳离子脂质体制备得到；
6、所述细胞稳定剂为蔗糖、海藻糖、聚n-异丙基丙烯酰胺和乳酸乙酸共聚物混合得到；
7、所述抗氧化剂为艾地苯醌、锰卟啉、维生素c和谷胱甘肽制备得到；
8、所述抗菌剂为纳米银改性黄连素。
9、优选的，所述缓冲液体系为edta溶解于在浓度为10-20mm、ph值在7.5-8.5之间的tris-hcl缓冲液中得到的，其中edta的浓度为5-10mm，tris-hcl缓冲液的作用是维持样本溶液的ph值稳定，为细胞和dna提供一个稳定的酸碱环境，防止因ph值变化导致的dna降解和细胞结构破坏，加入的乙二胺四乙酸能够螯合样本中的金属离子，如镁离子和钙离子，这些金属离子是核酸酶的激活剂，乙二胺四乙酸通过螯合作用抑制核酸酶的活性，从而防止dna被核酸酶降解，此外，当细胞因各种原因破裂释放出核酸酶时，edta可以及时抑制其活性，防止释放的核酸被降解，同时细胞保护系统维持细胞的完整性，减少核酸酶的释放。
10、优选的，所述核酸保护剂的制备过程如下：
11、步骤a1.将纳米二氧化硅颗粒分散于无水乙醇中，超声处理，得到纳米二氧化硅乙醇悬浮液，采用纳米二氧化硅（sio2）颗粒，其具有较大的比表面积和良好的生物相容性。纳米sio2颗粒能够通过物理吸附作用，与样本中的核酸紧密结合，形成一层纳米级的保护屏障，有效阻挡核酸酶与核酸的接触，从而抑制核酸酶对dna的降解作用。同时，纳米sio2还能在一定程度上缓冲外界环境因素（如温度、ph值变化）对核酸的影响，维持核酸的稳定性；
12、步骤a2.将二油酰基三甲基氯化铵溶解在氯仿中，在旋转蒸发仪上蒸发除去氯仿，形成脂质薄膜，再加入pbs缓冲液，超声处理，得到均匀的阳离子脂质体溶液，阳离子脂质体能够与带负电荷的dna通过静电作用相互结合，形成稳定的脂质体-dna复合物。这种复合物不仅可以保护dna免受核酸酶的降解，还能增强dna在溶液中的分散性和稳定性。此外，阳离子脂质体还具有一定的膜融合特性，在后续样本处理过程中，有助于dna从保存试剂中高效释放并进入细胞或反应体系中；
13、步骤a3.将纳米二氧化硅乙醇悬浮液和阳离子脂质体溶液混合均匀，得到核酸保护剂，纳米sio2和阳离子脂质体主要从物理吸附和形成复合物的角度保护核酸，而edta从抑制核酸酶活性的角度提供保护，形成多重防护。
14、优选的，步骤a1中所述纳米二氧化硅颗粒和无水乙醇的用量比为0.4-0.6g：45-55ml；
15、步骤a1中所述超声处理时的功率为200-400w，时间为30-60min。
16、优选的，步骤a2中所述二油酰基三甲基氯化铵、氯仿和pbs缓冲液的用量比为0.18-0.22g：9.5-12ml：4-6ml。
17、步骤a2中所述旋转蒸发仪的温度设置为30-40℃、真空度为0.05-0.1mpa；
18、步骤a2中所述超声处理的功率为100-200w，时间为15-30min。
19、优选的，所述细胞稳定剂的制备过程如下：
20、步骤b1.将聚n-异丙基丙烯酰胺和聚乳酸-羟基乙酸共聚物，分别加入到去离子水中，加热至52-58℃，并以280-320rpm的转速搅拌，直至完全溶解，然后将两种溶液混合均匀，得到聚合物溶液，运用温敏性聚合物聚n-异丙基丙烯酰胺（pn本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种棘胸蛙InDel分子标记用样本保存试剂，其特征在于，由以下原料制备得到：
2.根据权利要求1所述的棘胸蛙InDel分子标记用样本保存试剂，其特征在于，所述缓冲液体系为EDTA溶解于在浓度为10-20mM、pH值在7.5-8.5之间的Tris-HCl缓冲液中得到的，其中EDTA的浓度为5-10mM。
3.根据权利要求1所述的棘胸蛙InDel分子标记用样本保存试剂，其特征在于，所述核酸保护剂的制备过程如下：
4.根据权利要求3所述的棘胸蛙InDel分子标记用样本保存试剂，其特征在于，步骤A1中所述纳米二氧化硅颗粒和无水乙醇的用量比为0.4-0.6g：45-55mL；
5.根据权利要求3所述的棘胸蛙InDel分子标记用样本保存试剂，其特征在于，步骤A2中所述二油酰基三甲基氯化铵、氯仿和PBS缓冲液的用量比为0.18-0.22g：9.5-12mL：4-6mL；
6.根据权利要求1所述的棘胸蛙InDel分子标记用样本保存试剂，其特征在于，所述细胞稳定剂的制备过程如下：
7.根据权利要求6所述的棘胸蛙InDel分
8.根据权利要求1所述的棘胸蛙InDel分子标记用样本保存试剂，其特征在于，所述抗氧化剂的制备过程如下：
9.根据权利要求1所述的棘胸蛙InDel分子标记用样本保存试剂，其特征在于，所述抗菌剂的制备过程如下：
10.根据权利要求1-9任一项所述的棘胸蛙InDel分子标记用样本保存试剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种棘胸蛙indel分子标记用样本保存试剂，其特征在于，由以下原料制备得到：
2.根据权利要求1所述的棘胸蛙indel分子标记用样本保存试剂，其特征在于，所述缓冲液体系为edta溶解于在浓度为10-20mm、ph值在7.5-8.5之间的tris-hcl缓冲液中得到的，其中edta的浓度为5-10mm。
3.根据权利要求1所述的棘胸蛙indel分子标记用样本保存试剂，其特征在于，所述核酸保护剂的制备过程如下：
4.根据权利要求3所述的棘胸蛙indel分子标记用样本保存试剂，其特征在于，步骤a1中所述纳米二氧化硅颗粒和无水乙醇的用量比为0.4-0.6g：45-55ml；
5.根据权利要求3所述的棘胸蛙indel分子标记用样本保存试剂，其特征在于，步骤a2中所述二油酰基三甲基氯化铵、氯仿和pbs缓冲液的用量比为0.18-0...
【专利技术属性】
技术研发人员：向建国，张廖瑞林，廖小林，李鸿，李德亮，黄艳飞，刘新华，龚宇舟，张健，张恬谕，张家诺，李娟，何进荣，李湘，
申请(专利权)人：湖南农业大学，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。