【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及病原体检测领域，特别涉及一种检测感染性腹泻型病原体的引物组合物及试剂盒。
技术介绍
1、感染性腹泻是一种常见的临床病症，其可由多种病原体如细菌、病毒、真菌、原虫和蠕虫等引起，不同年龄段人群均易感，表现出群体性和高发病率的特点。若感染性腹泻得不到有效的控制和治疗，一旦发展成重症，不仅威胁患者生命安全，同时还可能导致病原体的播散，引发更大范围的感染，因此腹泻型感染的检测研究对腹泻型疾病的预防与控制影响深远。
2、传统的诊断方法主要有以下几种：
3、其一，镜检。镜检是依据病毒颗粒的形态结构特征进行初期诊断的方法，尤其适用于那些当前无法在体外细胞培养中繁殖，或者虽能体外培养但所需培养条件复杂的病毒的诊断、归类与鉴定。不过采用电镜观察存在诸多弊端，如耗时费力且诊断结果在很大程度上依赖于操作者的观测经验。
4、其二，细胞培养。利用特定细胞进行培养，通过观察病毒颗粒对细胞病变的影响来检测病毒，这是另一种直接检测方法。然而，该方法操作繁琐、费力且耗时，因为多数病毒的培养周期长达4至8天。此外，该方法对操作人员的专业知识背景以及实验室设备要求较高，更为关键的是，许多重要的肠道病毒无法通过细胞培养进行检测，或者即便能够培养，也会由于病毒细胞与抗体中和作用时灵敏度较低，再加上样品提取、操作及处理不当等因素，可能不会出现细胞病理效应，所以该方法在应用过程中存在一定局限性。
5、其三，酶联免疫吸附试验。该试验是在底物显色后，观察经酶标记的抗体与相应抗原形成的免疫复合物，以此来判断检测结果。但是
6、其四，分子生物学方法。随着分子生物学技术的应用，微生物学检测技术从生物学检查迈向分子生物学鉴定阶段。不同种类的病原微生物具有特定的基因序列，因此可通过检测病原微生物特异性基因序列的有无来进行检测，然而受限于感染性腹泻病原体的基因序列的相似性，导致现有技术的分子生物学检测方法的灵敏度不高。
7、换言之，目前市面上针对于感染性腹泻病原体的诊断方法或多或少存在耗时长、分辨率低、通量低、灵敏度低和耗费人力等缺点。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种检测感染性腹泻型病原体的引物组合物及试剂盒，旨在克服传统检测方法的耗时长、分辨率低、通量低、灵敏度低和耗费人力等问题，实现快速同时检测28种感染性腹泻型病原体的效果。w
2、为实现以上目的，本技术方案提供一种检测感染性腹泻型病原体的引物组合物，包括：
3、金黄色葡萄球菌引物组，所述金黄色葡萄球菌引物组包括核苷酸序列如seq idno:1～2所示的第一引物对、核苷酸序列如seq id no:3～4所示的第二引物对、核苷酸序列如seq id no:5～6所示的第三引物对、核苷酸序列如seq id no:7～8所示的第四引物对、核苷酸序列如seq id no:9～10所示的第五引物对；
4、大肠杆菌引物组，所述大肠杆菌引物组包括核苷酸序列如seq id no:11～12所示的第六引物对、核苷酸序列如seq id no:13～14所示的第七引物对、核苷酸序列如seq idno:15～16所示的第八引物对、核苷酸序列如seq id no:17～18所示的第九引物对、核苷酸序列如seq id no:19～20所示的第十引物对；
5、肺炎克雷柏菌引物组，所述肺炎克雷柏菌引物组包括核苷酸序列如seq id no:21～22所示的第十一引物对、核苷酸序列如seq id no:22～23所示的第十二引物对、核苷酸序列如seq id no:24～25所示的第十三引物对；
6、奇异变形杆菌引物组，所述奇异变形杆菌引物组包括核苷酸序列如seq id no:26～27所示的第十四引物对、核苷酸序列如seq id no:28～29所示的第十五引物对、核苷酸序列如seq id no:30～31所示的第十六引物对；
7、单增李斯特氏菌引物组，所述单增李斯特氏菌引物组包括核苷酸序列如seq idno:32～33所示的第十七引物对、核苷酸序列如seq id no：34～35所示的第十八引物对、核苷酸序列如seq id no：36～37所示的第十九引物对、核苷酸序列如seq id no:39～40所示的第二十引物对、核苷酸序列如seq id no:41～42所示的第二十一引物对；
8、铜绿假单胞菌引物组，所述铜绿假单胞菌引物组包括核苷酸序列如seq id no:43～44所示的第二十二引物对、核苷酸序列如seq id no:45～46所示的第二十三引物对、核苷酸序列如seq id no:47～48所示的第二十四引物对、核苷酸序列如seq id no:49～50所示的第二十五引物对、核苷酸序列如seq id no:51～52所示的第二十六引物对；
9、肠道沙门菌引物组，所述肠道沙门菌引物组包括核苷酸序列如seq id no:53～54所示的第二十七引物对、核苷酸序列如seq id no:55～56所示的第二十八引物对、核苷酸序列如seq id no:57～58所示的第二十九引物对、核苷酸序列如seq id no:59～60所示的第三十引物对；
10、产气夹膜杆菌引物组，所述产气夹膜杆菌引物组包括核苷酸序列如seq id no:61～62所示的第三十一引物对、核苷酸序列如seq id no:63～64所示的第三十二引物对、核苷酸序列如seq id no:65～66所示的第三十三引物对；
11、霍乱弧菌引物组，所述霍乱弧菌引物组包括核苷酸序列如seq id no:67～68所示的第三十四引物对、核苷酸序列如seq id no:69～70所示的第三十五引物对、核苷酸序列如seq idno:71～72所示的第三十六引物对、核苷酸序列如seq id no:73～74所示的第三十七引物对；
12、艰难梭菌引物组，所述艰难梭菌引物组包括核苷酸序列如seq id no:75～76所示的第三十八引物对、核苷酸序列如seq id no:77～78所示的第三十九引物对、核苷酸序列如seq id no:79～80所示的第四十引物、核苷酸序列如seq id no:81～82所示的第四十一引物对、核苷酸序列如seq id no:83～84所示的第四十二引物对；
13、豚鼠气单胞菌引物组，所述豚鼠气单胞菌引物组包括核苷酸序列如seq id no:85～86所示的第四十三引物对、核苷酸序列如seq id no:87～88所示的第四十四引物对、核苷酸序列如seq id no:89～90所示的第四十五引物对、核苷酸序列如seq id no:91～92所示的第四十六引物对、核苷酸序列如seq id no:93～94所示的第四十七引物本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种检测感染性腹泻型病原体的引物组合物，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的检测感染性腹泻型病原体的引物组合物，其特征在于，第一引物对至第二百零一引物对的每一引物对由正向引物和对应的反向引物组成。
3.根据权利要求1所述的检测感染性腹泻型病原体的引物组合物，其特征在于，第一引物对至第二百零一引物对的每一引物对中的每一引物添加Barocde序列，且不同感染性腹泻型病原体的Barocde序列不同。
4.根据权利要求1所述的检测感染性腹泻型病原体的引物组合物，其特征在于，第一引物对至第二百零一引物对的每一引物对中的每一引物的5’端进行磷酸化修饰。
5.一种检测感染性腹泻型病原体的试剂盒，其特征在于，包括根据权利要求1到4任一所述的检测感染性腹泻型病原体的引物组合物、人工质粒集以及多重聚合酶链式反应混合物。
6.根据权利要求5所述的检测感染性腹泻型病原体的试剂盒，其特征在于，人工质粒集包括不同感染性腹泻型病原体的人工质粒，且人工质粒同对应的感染性腹泻型病原体的扩增子的引物端相同，中间区域存在18～22％的差异，GC含
7.根据权利要求5所述的检测感染性腹泻型病原体的试剂盒，其特征在于，人工质粒集包括金黄色葡萄菌人工质粒、大肠杆菌人工质粒、肺炎克雷伯菌人工质粒、奇异变形杆菌人工质粒、单增李斯特氏菌人工质粒、铜绿假单胞菌人工质粒、肠道沙门菌人工质粒、产气夹膜杆菌人工质粒、霍乱弧菌人工质粒、艰难梭菌人工质粒的一种或任意组合。
8.根据权利要求5所述的检测感染性腹泻型病原体的试剂盒，其特征在于，金黄色葡萄菌人工质粒的核苷酸序列如SEQ ID NO.243所示、大肠杆菌人工质粒的核苷酸序列如SEQID NO.244所示、肺炎克雷伯菌人工质粒的核苷酸序列如SEQ ID NO.245所示、奇异变形杆菌人工质粒的核苷酸序列如SEQ ID NO.246所示、单增李斯特氏菌人工质粒的核苷酸序列如SEQ ID NO.247所示、铜绿假单胞菌人工质粒的核苷酸序列如SEQ ID NO.248所示、肠道沙门菌人工质粒的核苷酸序列如SEQ ID NO.249所示、产气夹膜杆菌人工质粒的核苷酸序列如SEQ ID NO.250所示、霍乱弧菌人工质粒的核苷酸序列如SEQ ID NO.251所示、艰难梭菌人工质粒的核苷酸序列如SEQ ID NO.252所示。
9.根据权利要求5所述的检测感染性腹泻型病原体的试剂盒，其特征在于，混合检测感染性腹泻型病原体的引物组合物、人工质粒集以及多重聚合酶链式反应混合物、DNA模板以及待测样品进行多重PCR扩增得到PCR产物。
10.根据权利要求9所述的检测感染性腹泻型病原体的试剂盒，其特征在于，对PCR产物直接加入测序接头进行上机测序，其中采用纳米孔测序平台进行测序。
...【技术特征摘要】
1.一种检测感染性腹泻型病原体的引物组合物，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的检测感染性腹泻型病原体的引物组合物，其特征在于，第一引物对至第二百零一引物对的每一引物对由正向引物和对应的反向引物组成。
3.根据权利要求1所述的检测感染性腹泻型病原体的引物组合物，其特征在于，第一引物对至第二百零一引物对的每一引物对中的每一引物添加barocde序列，且不同感染性腹泻型病原体的barocde序列不同。
4.根据权利要求1所述的检测感染性腹泻型病原体的引物组合物，其特征在于，第一引物对至第二百零一引物对的每一引物对中的每一引物的5’端进行磷酸化修饰。
5.一种检测感染性腹泻型病原体的试剂盒，其特征在于，包括根据权利要求1到4任一所述的检测感染性腹泻型病原体的引物组合物、人工质粒集以及多重聚合酶链式反应混合物。
6.根据权利要求5所述的检测感染性腹泻型病原体的试剂盒，其特征在于，人工质粒集包括不同感染性腹泻型病原体的人工质粒，且人工质粒同对应的感染性腹泻型病原体的扩增子的引物端相同，中间区域存在18～22％的差异，gc含量差异在1％～3％。
7.根据权利要求5所述的检测感染性腹泻型病原体的试剂盒，其特征在于，人工质粒集包括金黄色葡萄菌人工质粒、大肠杆菌人工质粒、肺炎克雷伯菌人工质粒、奇异变形杆菌人工质粒、单增李斯特氏菌人工质粒、铜...
【专利技术属性】
技术研发人员：毛凌峰，王大鹏，聂旋，吕陈昂，吴斯豪，
申请(专利权)人：杭州柏熠科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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