【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于基因工程，具体涉及一种哺乳动物细胞表达载体、含有该表达载体的表达质粒以及相应的表达系统。
技术介绍
1、蛋白质是生命科学研究的重要原材料，通过重组蛋白表达系统，使得目的蛋白正确高效表达，并提取、纯化获得足够量的目的蛋白，对该目的蛋白进行功能研究、结构分析等，对于研究生物大分子，推动生命科学的发展具有重要意义。
2、目前重组蛋白表达系统主要有大肠杆菌表达系统、酵母表达系统、昆虫细胞表达系统和哺乳动物细胞表达系统。其中，哺乳动物表达系统具有非常完善的糖基化修饰功能、折叠机制，可以模拟蛋白的天然修饰，并经过翻译后加工、修饰、分泌重组蛋白，能够正确表达结构非常复杂的外源蛋白。
3、然而哺乳动物细胞表达系统存在表达量低、基因表达调控复杂和下游纯化相对困难等问题，此外，目前的表达载体插入外源基因不灵活，同时酶切后会有额外氨基酸存在序列中，导致转染后影响了蛋白的表达量。对于哺乳动物细胞表达系统，主要是包括表达载体和宿主细胞，因此，构建使得哺乳动物细胞高效分泌表达外源蛋白的表达载体是十分有必要的。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的首要目的在于提供一种哺乳动物细胞表达载体，本专利技术优化了表达载体，特别是表达元件的优化，使得该表达载体能够方便、高效且灵活的插入和编辑外源基因，使得外源蛋白在胞外或胞内稳定表达，提高了外源蛋白的表达效率。
2、为了实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
3、本专利技术的一个方面公开了一种哺乳动物细
4、(a)启动子；
5、(b)kozak序列；
6、(c)多聚腺嘌呤序列，所述多聚腺嘌呤序列依次包括bgh polya序列和5'utrpolya序列，所述bgh polya序列的核苷酸序列如seq id no.5所示，所述5'utr polya序列的核苷酸序列如seq id no.6所示；
7、(d)复制起始位点；
8、(e)筛选标记基因。
9、该优化后的表达载体，能够方便目的蛋白的插入和编辑，并且这种插入或编辑基于无缝克隆，便于限制性内切酶线性化载体，克隆后不会有额外的氨基酸存在序列中，从而可提高外源蛋白的表达或纯化效率。
10、本专利技术另一个方面提供了一种哺乳动物细胞表达质粒，其含有上文所述的表达载体，并且在所述表达载体的kozak序列和多聚腺嘌呤序列之间插入人源抗体恒定序列。
11、本专利技术另一个方面提供了另一种哺乳动物细胞表达质粒，其含有上文所述的表达载体，并且在所述表达载体的kozak序列和多聚腺嘌呤序列之间依次插入蛋白纯化标签和酶切位点。
12、本专利技术另一个方面提供了另一种哺乳动物细胞表达质粒，其含有上文所述的表达载体，并在所述表达载体的kozak序列和多聚腺嘌呤序列之间依次插入蛋白纯化标签和标记基因。
13、本专利技术的另一个方面提供了一种哺乳动物细胞表达系统，其含有上文所述的表达质粒，还含有宿主细胞。
14、本专利技术的有益效果：
15、本专利技术优化设计了一种新的表达载体，并基于该表达载体设计了相应的表达质粒，该表达载体可以方便、灵活且无缝克隆的插入和编辑目的基因，避免了现有的表达载体插入目的基因不灵活，以及克隆后有额外氨基酸(如酶切位点氨基酸)存在序列中的问题，该表达载体可提高外源蛋白的表达效率，实现外源蛋白更高效的表达或纯化。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种哺乳动物细胞表达载体，其特征在于，所述表达载体依次具有以下元件：
2.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述启动子为CMV启动子，其核苷酸序列为SEQ ID NO.3所示；
3.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述复制起始位点为pUC复制ori位点，其核苷酸序列为SEQ ID NO.7所示。
4.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述筛选标记基因为氨苄青霉素的抗性基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示。
5.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体的全长核苷酸序列为SEQID NO.1所示。
6.一种哺乳动物细胞表达质粒，其特征在于，其含有如权利要求1-5任一项所述的表达载体，并且在所述表达载体的Kozak序列和多聚腺嘌呤序列之间插入人源抗体恒定序列。
7.如权利要求6所述的哺乳动物细胞表达质粒，其特征在于，所述人源抗体恒定序列为核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示的人源抗体重链恒定序列、核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示的人源抗体Kappa链恒定序列或
8.一种哺乳动物细胞表达质粒，其特征在于，其含有权利要求1-5任一项所述的表达载体，并且在所述表达载体的Kozak序列和多聚腺嘌呤序列之间依次插入蛋白纯化标签和酶切位点；
9.一种哺乳动物细胞表达质粒，其特征在于，其含有权利要求1-5任一项所述的表达载体，并在所述表达载体的Kozak序列和多聚腺嘌呤序列之间依次插入蛋白纯化标签和标记基因；
10.一种哺乳动物细胞表达系统，其特征在于，含有权利要求6-9任一项所述的表达质粒，还含有宿主细胞；
...【技术特征摘要】
1.一种哺乳动物细胞表达载体，其特征在于，所述表达载体依次具有以下元件：
2.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述启动子为cmv启动子，其核苷酸序列为seq id no.3所示；
3.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述复制起始位点为puc复制ori位点，其核苷酸序列为seq id no.7所示。
4.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述筛选标记基因为氨苄青霉素的抗性基因，其核苷酸序列如seq id no.8所示。
5.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体的全长核苷酸序列为seqid no.1所示。
6.一种哺乳动物细胞表达质粒，其特征在于，其含有如权利要求1-5任一项所述的表达载体，并且在所述表达载体的kozak序列和多聚腺嘌呤序列之间插入人源抗体恒定序列。
【专利技术属性】
技术研发人员：张鹏，金雪尧，周慧敏，杨雪，陈茜，刘宏毅，
申请(专利权)人：合肥综合性国家科学中心大健康研究院，
类型：发明
国别省市：
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