【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于肿瘤分子生物学，尤其涉及一种特异性识别肺腺癌细胞的核酸适配体及其应用。
技术介绍
1、肺癌是一种起源于支气管黏膜或肺腺体的恶性肿瘤，根据美国癌症协会发布的2023年的癌症统计报告，肺癌已经成为全球致死率最高的恶性肿瘤。根据组织病理学，肺癌可分为小细胞肺癌和非小细胞肺癌，其中后者约占肺癌的85％。非小细胞肺癌又可分为肺鳞癌、肺腺癌、以及大细胞癌，据统计肺腺癌患者占所有肺癌患者人数的50％
2、以上。
3、对于早期肺癌，患者的5年生存率大于70％，但是由于肺癌起病隐匿，且肺癌早期无明显症状，故患者不易察觉，50％以上的患者检查出时肿瘤已发生明显转移。研究表明，肺腺癌的发展可以分为四个阶段：原位癌阶段、微浸润腺癌阶段、浸润性腺癌、以及远处转移肺腺癌阶段。晚期肺癌的生存率不超过5％，因此早诊早治是降低肺癌死亡率的关键。
4、现目前，肺癌的诊断方式有影像学与病理学两类，前者包括胸部x片、ct、磁共振成像等，这些方法可以较快的得到结果，但存在着误诊，假阳性率高的情况，如将肺部结节判断为肺癌。病理学的检查如针刺活检，支气管镜检查等检测结果更为准确，但取样时会对病人的身心造成影响，因此提出一种能够快速准确检出肺癌的同时且无创的方法很有必要，发展能够特异性识别肺癌细胞，将其与正常肺部细胞区分开的分子探针在肺癌早期诊断领域有着广阔的应用前景。
5、核酸适配体(aptamer)是指能通过形成特定二级结构或三级结构与靶标特异性结合的dna/rna分子，该类单链寡核苷酸的序列长度大多在20-9
6、核酸适配体是通过指数富集的配体系统计划技术(systematic evolution ofligands by exponential enrichment,selex)获得的，1990年，ellington和szostak两位科学家从含1015种寡核苷酸分子的文库中筛选出能够特异性结合多种有机染料的rna序列，并且把这些rna序列命名为“aptamers”。同年tuerk和gold两位科学家筛选得到了能够与t4 dna聚合酶特异性结合且只有8个碱基的rna序列。经过三十多年的发展，selex技术得到了很大的改善，出现了许多不同形式的筛选方法，如细胞selex技术(cell-selex)、毛细管电泳selex技术(ce-selex)、氧化石墨烯selex技术(multiple go-selex)、微流控芯片selex技术(m-selex)等。其中cell-selex技术是以完整的活细胞为靶标进行筛选，这一技术可以保留细胞上受体的天然构象，无需明确靶细胞膜上目标分子的类型和数量，就可筛选得到能与靶细胞特异性结合的核酸适配体。
7、尽管目前已经通过cell-selex技术筛选得到了部分肺癌细胞特异性的核酸适配体，如a549、h-1975等，但是肺癌细胞的种类非常多，仍然有不少细胞缺乏具有靶向功能的核酸适配体作为识别工具。目前也未出现识别pc-9细胞的适配体。
技术实现思路
1、本专利技术要解决的技术问题是克服现有技术中存在的不足，提供一种特异性识别肺腺癌细胞的核酸适配体及其应用。我们选择了携带表皮生长因子受体19号外显子突变的肺腺癌细胞pc-9作为靶标开展实验，以发现能够将该细胞与正常细胞区分开的核酸适配体。本专利技术基于cell-selex技术，以人肺腺癌细胞为靶标，人肺支气管上皮细胞为对照，总共进行15轮筛选获得了对靶标有明显识别的ssdna文库，通过高通量测序与结果分析得到了对肺腺癌细胞有高特异性高亲和力的核酸适配体，该适体容易合成，成本低，对肺腺癌细胞具有高特异性高亲和力，可用于肺腺癌检测，为肺腺癌的早期诊断与靶向治疗提供了有力的分子工具。
2、为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种特异性识别肺腺癌细胞的核酸适配体，所述核酸适配体的基因序列如seq id no.1所示。
3、上述的核酸适配体，进一步的，在所述核酸适配体的一端或两端标记有放射性标记、荧光标记或者生物素标记。
4、上述的核酸适配体，进一步的，在所述核酸适配体的一端或两端连接治疗性药物。
5、基于一个总的技术构思，本专利技术还提供了一种所述的核酸适配体在特异性识别肺腺癌细胞中的应用。
6、上述的应用，进一步的，所述应用所采用的引物包括前向引物和后向引物，所述前向引物的基因序列如seq id no.2所示；所述后向引物的基因序列如eq id no.3所示。
7、上述的应用，进一步的，所述前向引物标记fam，所述后向引物标记生物素。
8、与现有技术相比，本专利技术的优点在于：
9、(1)本专利技术提供了一条特异性识别肺腺癌细胞的核酸适配体，能够高特异性高亲和力结合肺腺癌细胞，在肺腺癌的检测与制备靶向探针方面有着广阔的应用前景。
10、(2)本专利技术提供了一条特异性识别肺腺癌细胞的核酸适配体，该适配体是通过cell-selex技术筛选得到的，能够识别细胞膜表面上天然构象的目标蛋白。与抗体相比，本专利技术提供的核酸适配体具有更低的分子量，容易合成与运输，易于修饰，成本低等优点，在生物医学检测中有着潜在的应用价值。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种特异性识别肺腺癌细胞的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的基因序列如SEQ ID NO.1所示。
2.根据权利要求1所述的核酸适配体，其特征在于，在所述核酸适配体的一端或两端标记有放射性标记、荧光标记或者生物素标记。
3.根据权利要求1或2所述的核酸适配体，其特征在于，在所述核酸适配体的一端或两端连接治疗性药物。
4.一种权利要求1或3所述的核酸适配体在特异性识别肺腺癌细胞中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述应用所采用的引物包括前向引物和后向引物，所述前向引物的基因序列如SEQ ID NO.2所示；所述后向引物的基因序列如EQ IDNO.3所示。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述前向引物标记FAM，所述后向引物标记生物素。
【技术特征摘要】
1.一种特异性识别肺腺癌细胞的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的基因序列如seq id no.1所示。
2.根据权利要求1所述的核酸适配体，其特征在于，在所述核酸适配体的一端或两端标记有放射性标记、荧光标记或者生物素标记。
3.根据权利要求1或2所述的核酸适配体，其特征在于，在所述核酸适配体的一端或两端连接治疗性药物。
4.一...
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。