【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，尤其是涉及一种基于哑铃型探针与rca相结合用于kras基因检测的产品及其用途。
技术介绍
1、kras 是一个在细胞信号传导中起关键作用的基因，主要调节细胞生长、分裂和生存。kras 基因的突变在各种人类癌症中经常遇到。特别是，在非小细胞肺癌（nsclc）中kras 突变的发生率约为 30%，在结直肠癌（crc）中为 30-50%，在胰腺导管腺癌中为 80%。突变通常发生在密码子 12 的单个核苷酸替换上，g12d 是最常见的。g12d 突变占 kras突变癌症的 20-50%，具体取决于癌症类型。这些突变导致kras蛋白持续活化，可以刺激细胞增殖并抑制细胞凋亡，促进肿瘤的发生和发展。kras g12d突变给传统治疗带来了挑战，对于结直肠癌，g12d通常导致对化疗反应较差和复发风险较高。g12d患者也无法从已被证明对其他疗法耐药的crc患者有益的抗egfr治疗中获益。
2、鉴于kras g12d单核苷酸突变在预后评估和治疗决策中起着关键作用，聚合酶链反应（pcr）和下一代测序（ngs）是检测基因突变最常用的方法，其特点是高特异性和敏感性。然而，这些方法都依赖于特殊的成本设备和专业操作人员。
技术实现思路
1、本专利技术的目的：为了克服现有技术的缺陷，本专利技术提供了一种基于哑铃型探针与rca相结合用于kras基因检测的产品，可以用肉眼判断结果，无需精密仪器，与传统方法相比，在测试基因的单核苷酸突变时，更方便、更高效。
2、本专利技术的技术
3、进一步设置，所述哑铃型探针的序列为cagctccaactaccccaacccgccctacccaaagttggagctgtatggcgtaggcttaacccacccacccacccttgcctacgccat。
4、进一步设置，所述茎部是由反向互补配对的碱基对组成的互补链，分别为上链和下链，所述上链含有所述的切口。
5、进一步设置，所述哑铃型探针3’端的最后一个碱基为胸腺嘧啶核苷酸，可识别检测基因的突变位点腺嘌呤；当存在检测基因时，哑铃型探针的碱基t与突变位点的a完美配对；哑铃型探针的上链部分和下链部分得以分离，并在dna连接酶的作用下，分离末端连接环化，形成闭合环状结构；当哑铃型探针遇到野生型kras基因时，存在碱基错配，阻止了哑铃型探针茎部和靶标的完全杂交，导致茎部上链和下链无法有效分离。
6、进一步设置，所述rca反应过程会产生由交替的g-四链体序列组成的长串联重复序列；该长串联重复序列为gggtgggtgggtgggttaagcctacgccatacagctccaactttgggtagggcgggttggggtagttggagctgatggcgtaggcaagggtgggtgggtgggttaagcctacgccatacagctccaactttgggtagggcgggttggggtagttggagctgatggcgtaggcaa。
7、进一步设置，所述pw17互补序列为cccaacccgccctaccc；所述t30695互补序列为acccacccacccaccc。
8、进一步设置，所述茎部的长度为7~13nt。
9、进一步设置，所述哑铃型探针的浓度为5~15μm，dntps的浓度为5~15 mm。
10、本专利技术的另一目的上述检测产品在制备用于检测kras基因检测产品中的用途。
11、本专利技术的有益效果，哑铃型探针与滚环扩增（rca）结合，用于可视化检测krasg12d，检测结果可以直接肉眼进行判读，无需依赖精密仪器，降低检测门槛，适用于即时检测或资源有限的检测场景，可以大大助力病理医师快速精准判断，并且该产品具有高特异性，高灵感度。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种基于哑铃型探针与RCA相结合用于KRAS基因检测的产品，其特征在于，所述产品包括哑铃型探针、DNA连接酶以及RCA扩增试剂，所述哑铃型探针包括茎部和两环部，两环部的端部经茎部连接，所述哑铃型探针的其中一个环含有G-四链体适配体PW17互补序列，另一个环含有G-四链体适配体T30695的互补序列，所述茎部上设有切口，用于识别并结合检测基因的突变位点，所述RCA扩增试剂包括Phi29DNA聚合酶和dNTPs和Phi29DNA聚合酶反应缓冲液，在DNA连接酶与检测基因的介导下哑铃型探针的茎部打开，切口连接形成闭合环状结构，并作为RCA的模板，产生G-四链体序列，G-四链体序列与血红素结合模仿辣根过氧化物酶。
2.根据权利要求1所述的基于哑铃型探针与RCA相结合用于KRAS基因检测的产品，其特征在于，所述哑铃型探针的序列为CAGCTCCAACTACCCCAACCCGCCCTACCCAAAGTTGGAGCTGTATGGCGTAGGCTTAACCCACCCACCCACCCTTGCCTACGCCAT。
3.根据权利要求1或2所述的基于哑铃型探针与RCA相结合用于
4.根据权利要求3所述的基于哑铃型探针与RCA相结合用于KRAS基因检测的产品，其特征在于，所述哑铃型探针3’端的最后一个碱基为胸腺嘧啶核苷酸，可识别检测基因的突变位点腺嘌呤；当存在检测基因时，哑铃型探针的碱基T与突变位点的A完美配对；哑铃型探针的上链部分和下链部分得以分离，并在DNA连接酶的作用下，分离末端连接环化，形成闭合环状结构；当哑铃型探针遇到野生型KRAS基因时，存在碱基错配，阻止了哑铃型探针茎部和靶标的完全杂交，导致茎部上链和下链无法有效分离。
5.根据权利要求1或2所述的基于哑铃型探针与RCA相结合用于KRAS基因检测的产品，其特征在于，所述RCA反应过程会产生由交替的G-四链体序列组成的长串联重复序列；该长串联重复序列为GGGTGGGTGGGTGGGTTAAGCCTACGCCATACAGCTCCAACTTTGGGTAGGGCGGGTTGGGGTAGTTGGAGCTGATGGCGTAGGCAAGGGTGGGTGGGTGGGTTAAGCCTACGCCATACAGCTCCAACTTTGGGTAGGGCGGGTTGGGGTAGTTGGAGCTGATGGCGTAGGCAA。
6.根据权利要求1或2所述的基于哑铃型探针与RCA相结合用于KRAS基因检测的产品，其特征在于，所述PW17互补序列为CCCAACCCGCCCTACCC；所述T30695互补序列为ACCCACCCACCCACCC。
7.根据权利要求1或2所述的基于哑铃型探针与RCA相结合用于KRAS基因检测的产品，其特征在于，所述茎部的长度为7~13nt。
8.根据权利要求1或2所述的基于哑铃型探针与RCA相结合用于KRAS基因检测的产品，其特征在于，所述哑铃型探针的浓度为5~15μM，dNTPs的浓度为5~15 mM。
9.一种如根据权利要求1-8任一所述的产品在制备用于检测KRAS基因检测产品中的用途。
...【技术特征摘要】
1.一种基于哑铃型探针与rca相结合用于kras基因检测的产品，其特征在于，所述产品包括哑铃型探针、dna连接酶以及rca扩增试剂，所述哑铃型探针包括茎部和两环部，两环部的端部经茎部连接，所述哑铃型探针的其中一个环含有g-四链体适配体pw17互补序列，另一个环含有g-四链体适配体t30695的互补序列，所述茎部上设有切口，用于识别并结合检测基因的突变位点，所述rca扩增试剂包括phi29dna聚合酶和dntps和phi29dna聚合酶反应缓冲液，在dna连接酶与检测基因的介导下哑铃型探针的茎部打开，切口连接形成闭合环状结构，并作为rca的模板，产生g-四链体序列，g-四链体序列与血红素结合模仿辣根过氧化物酶。
2.根据权利要求1所述的基于哑铃型探针与rca相结合用于kras基因检测的产品，其特征在于，所述哑铃型探针的序列为cagctccaactaccccaacccgccctacccaaagttggagctgtatggcgtaggcttaacccacccacccacccttgcctacgccat。
3.根据权利要求1或2所述的基于哑铃型探针与rca相结合用于kras基因检测的产品，其特征在于，所述茎部是由反向互补配对的碱基对组成的互补链，分别为上链和下链，所述上链含有所述的切口。
4.根据权利要求3所述的基于哑铃型探针与rca相结合用于kras基因检测的产品，其特征在于，所述哑铃型探针3’端的最后一个碱基为胸腺嘧啶核苷酸，可识别检测基因的突变位点腺嘌呤；当存在检测基因时，哑铃型探针的碱基t与突变位点的a完美配对；哑铃型探针的上链部分和下链...
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