【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于体外检测，具体涉及一种检测ad靶标micro rna的检测试剂及其用途和检测试剂盒。
技术介绍
1、阿尔茨海默病（ad）是常见神经退行性痴呆病，以进行性记忆及定向、语言、行为等认知衰退为特征。早期诊断和干预被认为是延缓疾病进展的重要手段。ad病的常用检测方法有神经影像学与脑脊液（csf）生物标志物检测。前者用“碳11”标记物检测大脑β-淀粉样蛋白（aβ）沉积物，但费用高，需专业仪器与人员，不适用于筛查。后者中，脑脊液里β-淀粉样蛋白和tau蛋白是公认的ad生物标志物，诊断准确性高，然而，脑脊液采集属侵入性操作，对操作人员要求高，也不适用于筛查与常规检测。
2、液体活检是一种非侵入性的诊断和预测工具，通过对体液（如血液、尿液和唾液等）取样和分析，以了解疾病相关信息。外泌体（evs）是一种由细胞分泌的胞外囊泡，直径<200 nm，胞内由来自源细胞的核酸、脂质、蛋白质等物质。研究表明，microrna的异常表达与疾病的发生发展密切关系，不同于体液中暴露的microrna的易降解特性，外泌体中携载的microrna具有稳定性。
3、目前，传统的evs内载生物分子的检测，需经历对富集后的evs进行裂解，提取其中的rna和蛋白质等步骤，再进行后续的检测分析流程，这会干扰特定组织细胞来源evs的生物分子信号的识别，同时也有生物分子损失等风险。
4、脂质体膜泡是一种模拟有限空间中携载功能物质的人工微泡结构，能够与相同或相似的生化成分的evs融合，保证膜的完整性，但外泌体中的microrna
5、pcr是最常见的核酸扩增技术，但是该技术需要引物、taq聚合酶、dntps等多种原料，且需要专业仪器，实现反复变温以扩增。不仅实验过程难以预料，还会破坏evs，使rna有污染或降解的风险。恒温核酸扩增技术能够保证evs的完整性，但是非特异性的扩增，往往带来假阳性的结果。crispr技术与恒温核酸扩增技术联用，能够实现高灵敏度和高特异性的核酸检测方法，但是反应过程需要分步进行，因为扩增和剪切交织，对反应试剂要求高，实验结果也亦受影响。
6、基于上述问题，亟需开发一种无须酶促、操作简单、具有高灵敏度和特异性的microrna分子检测技术，为ad等疾病的早期诊断提供支持。
技术实现思路
1、针对上述问题，本专利技术提供一种检测ad靶标micro rna的检测试剂及其用途和检测试剂盒。
2、本专利技术提供一种检测ad靶标micro rna的检测试剂，其特征在于，它包括如下摩尔份的组分：
3、h1 25-100份、
4、h2 25-100份、
5、激活子 10-20份、
6、crispr/cas核酸内切酶 50-125份、
7、grna 50-100份、
8、报告分子 200-1000份；
9、所述h1、h2是催化发夹自组装联合crispr检测方法中的发夹探针1和发夹探针2。
10、优选的，所述检测ad靶标micro rna的检测试剂包括如下摩尔份的组分：
11、h1 50-75份、
12、h2 50份、
13、激活子 20份、
14、crispr/cas核酸内切酶75份、
15、grna 75份、
16、报告分子800份。
17、优选的，所述crispr/cas核酸内切酶选自cas12a、cas13a、cas9。
18、优选的，所述h1和h2组合包括如下组合中的至少一种：
19、所述h1的核苷酸序列为seq id no. 2，所述h2的核苷酸序列为seqid no. 3；
20、或，所述h1的核苷酸序列为seq id no. 8，所述h2的核苷酸序列为seqid no. 9；
21、或，所述h1的核苷酸序列为seq id no. 11，所述h2的核苷酸序列为seqid no.12。
22、优选的，grna的核苷酸序列为seq id no. 4；
23、和/或，激活子是由核苷酸序列为seq id no. 5和核苷酸序列为seq id no. 6的核酸组成的；
24、和/或，报告分子的核苷酸序列为ttatt，报告分子的两端分别修饰荧光基团和荧光淬灭基团；
25、和/或，h1、h2、激活子是分别将核酸溶解在缓冲溶液中经热退火处理制得；
26、和/或，所述检测试剂还包括36-50%的缓冲液，缓冲液的组分包含36.65-50 mmtris-hcl，73.3-100 mm nacl，7.33-10 mm mgcl2，73.3-100 μg/ml bsa，7.33-10 μg/ml肝素钠，ph 7.5-8.0。
27、本专利技术提供上述任一项所述的检测ad靶标micro rna的检测试剂的用途，在制备老年痴呆症或癌症患者血清中microrna的检测试剂盒或微流控芯片的用途。
28、优选的，所述老年痴呆症或癌症患者血清中microrna的检测试剂盒的使用方法包括如下步骤：
29、待测液与所述老年痴呆症或癌症患者血清中microrna的检测试剂盒中的检测试剂混合，在37℃下孵育30-180min，检测荧光信号。
30、专利技术提供一种检测试剂盒，包括上述任一项所述的检测ad靶标micro rna的检测试剂，或含有上述任一项所述的检测ad靶标micro rna的检测试剂的脂质球；
31、所述含有上述任一项所述的检测ad靶标micro rna的检测试剂的脂质球中，检测ad靶标microrna的检测试剂与脂质球的用量比为1-2ml：23-46mg。
32、优选的，所述含有上述任一项所述的检测ad靶标micro rna的检测试剂的脂质球按照包括如下步骤制备得到：将检测ad靶标micro rna的检测试剂与脂质球混合即得。
33、优选的，所述脂质球按照包括如下步骤制备得到：将阳离子脂质分子、两亲性的磷脂分子与胆固醇混合，旋蒸，制得脂质薄膜，然后在水溶液中孵育、挤压，即得；
34、和/或，所述混合是在37℃下孵育6-12h。
35、优选的，所述阳离子脂质分子为(2,3-二油酰基-丙基)-三甲基铵-氯盐），所述两亲性的磷脂分子为(2-油酰-1-棕榈锡甘油-3-磷酸胆碱)；所述阳离子脂质分子与两亲性的磷脂分子、胆固醇的质量比为10:10:3。
36、本专利技术提供了一种检测ad靶标micro rna的检测试剂及其用途和检测试剂盒。本专利技术筛选了ad疾病的检测靶标，优选了检测体系中各组分的浓度、反应温度与反应时间，并利用脂质体递送cha-crispr检测体系，实现了高灵敏度、高特异性和高准确度地检测ad病人外泌体中的microrna，具有简便、快速的优点。本专利技术本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种检测AD靶标Micro RNA的检测试剂，其特征在于，它包括如下摩尔份的组分：
2.按照权利要求1所述的检测AD靶标Micro RNA的检测试剂，其特征在于，它包括如下摩尔份的组分：
3.按照权利要求1或2所述的检测AD靶标Micro RNA的检测试剂，其特征在于：所述CRISPR/Cas核酸内切酶选自Cas12a、Cas13a、Cas9。
4.按照权利要求1所述的检测AD靶标Micro RNA的检测试剂，其特征在于：
5.按照权利要求1所述的检测AD靶标Micro RNA的检测试剂，其特征在于：
6.权利要求1-5任一项所述的检测AD靶标Micro RNA的检测试剂的用途，其特征在于：在制备老年痴呆症或癌症患者血清中MicroRNA的检测试剂盒或微流控芯片的用途。
7.照权利要求6所述的检测AD靶标Micro RNA的检测试剂的用途，其特征在于：所述老年痴呆症或癌症患者血清中MicroRNA的检测试剂盒的使用方法包括如下步骤：
8.一种检测试剂盒，其特征在于：包括权利要求1-5任一项所述
9.按照权利要求8所述的检测试剂盒，其特征在于：所述含有权利要求1-5任一项所述的检测AD靶标Micro RNA的检测试剂的脂质球按照包括如下步骤制备得到：将检测AD靶标Micro RNA的检测试剂与脂质球混合即得。
10.按照权利要求8所述的检测试剂盒，其特征在于，所述脂质球按照包括如下步骤制备得到：将阳离子脂质分子、两亲性的磷脂分子与胆固醇混合，旋蒸，制得脂质薄膜，然后在水溶液中孵育、挤压，即得；
...【技术特征摘要】
1.一种检测ad靶标micro rna的检测试剂，其特征在于，它包括如下摩尔份的组分：
2.按照权利要求1所述的检测ad靶标micro rna的检测试剂，其特征在于，它包括如下摩尔份的组分：
3.按照权利要求1或2所述的检测ad靶标micro rna的检测试剂，其特征在于：所述crispr/cas核酸内切酶选自cas12a、cas13a、cas9。
4.按照权利要求1所述的检测ad靶标micro rna的检测试剂，其特征在于：
5.按照权利要求1所述的检测ad靶标micro rna的检测试剂，其特征在于：
6.权利要求1-5任一项所述的检测ad靶标micro rna的检测试剂的用途，其特征在于：在制备老年痴呆症或癌症患者血清中microrna的检测试剂盒或微流控芯片的用途。
7.照权利要求6所...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘珊，李雪，
申请(专利权)人：四川省医学科学院·四川省人民医院，
类型：发明
国别省市：
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