【技术实现步骤摘要】
本申请涉及apoe分型检测，特别是涉及一种apoe基因型的ddpcr检测的试剂盒、检测装置和检测方法。
技术介绍
1、载脂蛋白e(apolipoprotein e，apoe)是一种主要的胆固醇载体，通过介导细胞胆固醇摄取，调节体内的脂质代谢。apoe的两个单核苷酸多态性位点526c>t(rs429358)和388t>c(rs7412)，构成e2(388t-526t)、e3(388t-526c)、e4(388c-526c)三种基因型，其中e3为野生型，e2和e4为突变型，共产生3种纯合子(e2/2、e3/3、e4/4)和三种杂合子(e2/3、e2/4、e3/4)。apoe基因分型在心血管疾病和阿尔茨海默病的风险评估以及个体化治疗中具有重要意义，携带e4等位基因的人群患心脑血管疾病的风险增加，携带e2等位基因的人群患高脂血症的风险增加，携带e4等位基因的人群患阿尔茨海默病的风险显著增加；多项研究表明，apoe基因多态性是他汀类药物调脂疗效出现个体差异的重要原因之一，e2等位基因携带者对于他汀类药物的疗效优于e3、e4等位基因携带者。综上，apoe基因是心脑血管疾病的重要危险因素和他汀类药物调脂疗效的重要预测因子，通过对apoe基因的进行基因分型检测，能够有助于评估是否为高脂血症或阿尔兹海默症的易感人群，进而能够提早预防、早诊断、早治疗，有助于改善预后，能够辅助预测他汀类药物的调脂疗效，进而有助于提供个体化治疗。
2、目前，apoe基因分型常用的检测方法有taqman探针法、基因芯片杂交法和测序法等。taqma
3、对于apoe检测进行质量控制(包括对照品的检测、批次内批次间重复性测试、标准品检测等)和计量溯源(标准品的认证、仪器校准等)时，定量检测非常必要。ddpcr(dropletdigital pcr，液滴数字pcr)是一种先进的pcr技术，通过将样品分成数千个微小的液滴来进行扩增和检测，从而实现对目标核酸的绝对定量，ddpcr技术克服了传统定量pcr(qpcr)的一些局限性，特别适用于低丰度目标的检测和定量。
4、综上，目前针对apoe基因型检测的方法，存在的灵敏度低，无法绝对定量等问题。因此，亟需一种对定量检测apoe基因型的产品或方法。
5、目前，针
技术实现思路
1、本申请的目的是提供一种apoe基因型的ddpcr检测的试剂盒、检测装置和检测方法。
2、本申请采用了以下技术方案：
3、本申请的第一方面公开了一种apoe基因型的ddpcr检测的试剂盒，包括检测apoe388t＞c的第一引物探针组和检测apoe 526c＞t的第二引物探针组；所述第一引物探针组包括：正向引物388t-f，序列如seq id no.1所示；正向引物388c-f，序列如seq id no.2所示；反向引物388-r，序列如seq id no.3所示；探针388-p，序列如seq id no.4所示；所述第二引物探针组包括：正向引物526c-f，序列如seq id no.5所示；反向引物526c-r，序列如seq id no.6所示；正向引物526t-f，序列如seq id no.7所示；反向引物526t-r，序列如seqid no.8所示；探针526-p，序列如seq id no.9所示。
4、需要说明的是，本申请的试剂盒中，正向引物388t-f和正向引物388c-f的3’末端位于多态性位点上，正向引物388t-f的序列的最后一位碱基(最靠近3’端的位置的碱基)是和apoe 388t相匹配，正向引物388c-f的序列的最后一位碱基则是和apoe 388c相匹配。dna聚合酶对引物3’末端的碱基配对较为严格，当引物3'末端出现单个碱基错配时，dna聚合酶无法有效地从这个位置开始延伸，表现为扩增受阻，由此，能够抑制非特异性扩增。同理，正向引物526c-f和正向引物526t-f也具有类似的特殊设计。此外，本申请通过对不同正向引物和反向引物进行大量的特异性引物设计和测试，筛选出特异性好、信号准确(阳性微滴与阴性微滴分区明确、微滴簇弥散较少、微滴数较高)的引物探针组。另外，本申请中针对apoe388野生型和突变型共用一个探针，针对apoe 526野生型和突变型共用一个探针，能够减少探针成本，且本申请的探针具有良好的特异性和能够产生准确的信号。综上，采用本申请的ddpcr检测试剂盒对apoe基因型进行检测，具有特异性好、灵敏度高、检测结果准确性高等优点，可实现无需标准曲线即可对apoe基因扩增目标进行绝对定量。
5、本申请的一种实现方式中，所述探针388-p和所述探针526-p的荧光基团独立地选自fam、fitc、hex、vic、tet、joe、rox、cy3、cy5、cy5.5、cy7、atto 425和sf670，所述探针388-p和所述探针526-p的淬灭基团独立地选自bhq1、bhq2、bhq3、mgb和dabcyl。
6、本申请的一种实现方式中，所述探针388-p的荧光基团和所述探针526-p的荧光基团不相同。
7、本申请的一种实现方式中，所述试剂盒还包括以下的至少一种：ddpcr预混液、液滴生成油、阳性对照品、阴性对照品。
8、本申请的一种实现方式中，所述ddpcr预混液包括以下的至少一种：pcr缓冲液、taq dna聚合酶、mg2+和dntps。
9、本申请的第二方面公开了一种apoe基因型的检测装置，包括：扩增模块：采用如本申请第一方面所述的试剂盒对待测核酸样本进行ddpcr检测；判断模块：根据所述ddpcr检测的结果判断apoe的基因型及含量。
10、本申请的第三方面公开了一种非诊断治疗目的的apoe基因型的检测方法，其特征在于，包括：获取待测核酸样本；采用如本申请第一方面所述的试剂盒配置ddpcr反应体系，并按照反应程序进行反应；判断apoe的基因型及含量。
11、本申请的一种实现方式中，所述ddpcr反应体系中，正向引物388t-f、正向引物388c-f、反向引物388-r、正向引物526c-f、反向引物526c-r、正向引物526t-f或反向引物526t-r的浓度为300nm～500nm。
12、本申请的一种实现方式中，所述ddpcr反应体系中，正向引物388t-f、正向引物388本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种ApoE基因型的ddPCR检测的试剂盒，其特征在于，包括检测ApoE 388T＞C的第一引物探针组和检测ApoE 526C＞T的第二引物探针组；
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述探针388-P和所述探针526-P的荧光基团独立地选自FAM、FITC、HEX、VIC、TET、JOE、ROX、CY3、CY5、CY5.5、CY7、ATTO 425和SF670，所述探针388-P和所述探针526-P的淬灭基团独立地选自BHQ1、BHQ2、BHQ3、MGB和DABCYL。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述探针388-P的荧光基团和所述探针526-P的荧光基团不相同。
4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括以下的至少一种：ddPCR预混液、液滴生成油、阳性对照品、阴性对照品。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述ddPCR预混液包括以下的至少一种：PCR缓冲液、Taq DNA聚合酶、Mg2+和dNTPs。
6.一种ApoE基因型的检测装置，其特征在于，包括：<...
【技术特征摘要】
1.一种apoe基因型的ddpcr检测的试剂盒，其特征在于，包括检测apoe 388t＞c的第一引物探针组和检测apoe 526c＞t的第二引物探针组；
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述探针388-p和所述探针526-p的荧光基团独立地选自fam、fitc、hex、vic、tet、joe、rox、cy3、cy5、cy5.5、cy7、atto 425和sf670，所述探针388-p和所述探针526-p的淬灭基团独立地选自bhq1、bhq2、bhq3、mgb和dabcyl。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述探针388-p的荧光基团和所述探针526-p的荧光基团不相同。
4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括以下的至少一种：ddpcr预混液、液滴生成油、阳性对照品、阴性对照品。
5.根据权利...
【专利技术属性】
技术研发人员：周舒君，代文俊，董莲华，
申请(专利权)人：深圳中国计量科学研究院技术创新研究院，
类型：发明
国别省市：
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